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掌叶半夏脂溶性成分GC-MS研究
目的:分析掌叶半夏脂溶性成分的化学成分.方法:对乙醇提取后氯仿萃取得到的脂溶性成分进行了GC-MS分析.HP-5MS色谱柱(0.25 mm×0.25 mm×30 m);程序升温,进样口温度280℃,进样量1.0μL,分流比10:1.结果:共分离鉴定出三氯乙酸1.86％,顺式-1,2-环己二醇3.56％,庚基氢过氧化物1.66％,Z型-2-十一碳烯5.54％,1-丁氧基-2-乙基己烯4.13％,吡咯并[1,2-A]吡嗪-1,4-二酮6.36％,棕榈酸23.32％,10-十一碳炔酸33.81％,环戊烷十一酸1.11％,2,5-哌嗪,3-苄基-6-异丙基2.95％,2-溴(正)壬烷1.04％,吡咯并[1,2-A]吡嗪-1,4-二酮,六氢-3(苯)5.73％,4-乙基四氢-2H-噻喃1.77％,1,2,2溴二十二烷1.26％,1,1-二氯-2,2,3,3-四甲基环丙烷2.31％,(Z,Z,Z)-6,9,12-十八三烯苯基甲基酯等19种成分.结论:进一步确定了掌叶半夏脂溶性部分的化学成分,为掌叶半夏的抗肿瘤作用深入研究提供参考.
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遮荫对掌叶半夏化学成分含量的影响
目的:探讨不同光照强度下掌叶半夏化学成分的变化,为栽培生产和林药间作提供理论依据.方法:利用HPLC测定不同遮荫处理(遮荫率分别为0%,40%,60%,80%)下掌叶半夏4种含氮化合物含量.结果:随着遮荫程度的增加,4种含氮化合物含量指标是呈低-高-低的变化趋势,但不同含氮化合物变化程度不同.与全光对比,A,B,C处理的葫芦巴碱和胸腺嘧啶含量增加,A,B处理的腺嘌呤和6-氧嘌呤含量也增加,而C处理的腺嘌呤和6-氧嘌呤含量减少.结论:中度遮荫下,能够提高4种含氮化合物的含量,适宜在一定遮荫条件下栽培,适宜林(果)间作.
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半夏及掌叶半夏毒针晶中共性毒蛋白的研究
目的:寻找天南星科半夏属有毒中药半夏及掌叶半夏毒性物质基础毒针晶中的共有蛋白,研究刺激性相关蛋白的致炎效应.方法:采用溶液内双酶解方法将半夏与掌叶半夏毒针晶中的蛋白降解为混合肽段,采用液相色谱与串联质谱偶联分析降解后的肽段,将质谱分析数据与BIOWORKS软件搜索的NCBI绿色植物Viridiplantae蛋白库比对进行蛋白质检索分析.采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对半夏、掌叶半夏毒针晶蛋白进行分析,同时采用胶内酶解后液相色谱与串联质谱偶联的方法,分析并鉴定约13kDa蛋白.提取分离半夏中的凝集素蛋白,并采用中性粒细胞迁移试验和测定腹腔渗出液中PGE2的含量.考察毒针晶及凝集素的炎症刺激性效应.结果:半夏及掌叶半夏毒针晶中均含约13kDa的蛋白条带,此条带经鉴定为凝集素类蛋白,且此13kDa蛋白条带为毒针晶中的主要蛋白之一,凝集素类蛋白可诱导中性粒细胞向大鼠腹腔迁移,可显著增加小鼠腹腔渗出液中PGE2的含量.结论:天南星科有毒中药半夏及掌叶半夏毒针晶蛋白中均含有凝集素类蛋白,且此类凝集素蛋白具有显著的致炎作用,是半夏与掌叶半夏毒针晶中的共性毒蛋白.
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掌叶半夏提取物的有效部位对体外培养宫颈癌细胞的促凋亡作用
目的:观察中药掌叶半夏提取物的有效部位(pinellia extract fraction,PE)对体外培养的两种官颈癌细胞株的作用,力求寻找一种能有效防治女性宫颈病变的纯中药制剂.方法:将4种不同浓度PE分别作用于Hela和Caski细胞1-5天,用倒置相差显微镜观察细胞生长及摄影,溴化噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡.结果:PE对两种宫颈癌细胞株的生长均表现出明显的抑制作用,流式细胞术检测结果显示PE作用后两种细胞株均呈现出凋亡,且随着作用时间延长,凋亡细胞的比例明显增加.结论:PE对两种官颈癌细胞株有明显的抑制生长和促凋亡作用;为进一步研究PE的药物作用机制和新药的研制开发奠定了初步的基础.
关键词： 掌叶半夏 提取物 凋亡 宫颈癌 HeLa细胞株和CaSki细胞株 -
姜辣素拮抗掌叶半夏毒针晶刺激性毒性的机制研究
为探索姜辣素拮抗掌叶半夏毒针晶刺激性毒性的机制,该研究采用掌叶半夏毒针晶诱导的小鼠腹腔炎症模型,观察姜辣素对小鼠腹腔炎症渗出液中炎症介质PGE2的影响;采用大鼠腹腔巨噬细胞体外培养模型,以上清液中TNF-α和IL-1β为指标,研究姜辣素拮抗掌叶半夏毒针晶的致炎作用;采用扫描电镜法观察姜辣素拮抗掌叶半夏毒针晶刺激后巨噬细胞表面形态的改变;采用巨噬细胞-中性粒细胞共培养模型,考察姜辣素拮抗掌叶半夏毒针晶对中性粒细胞迁移的影响.结果显示,姜辣素可以显著抑制掌叶半夏毒针晶所致的小鼠腹腔渗出液中PGE2的生成;姜辣素可以显著抑制掌叶半夏毒针晶诱导巨噬细胞释放炎症因子,并具有一定的量效关系;扫描电镜显示,姜辣素可以显著抑制巨噬细胞吞噬掌叶半夏毒针晶及细胞膜破损,并能显著抑制掌叶半夏毒针晶诱导的中性粒细胞迁移.姜辣素拮抗掌叶半夏毒针晶刺激性毒性的机制可能是抑制了包括巨噬细胞激活、炎症因子释放、中性粒细胞迁移聚集的致炎毒性.
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HPLC同时测定掌叶半夏中四种含氮化合物的含量
目的:用高效液相色谱法同时测定掌叶半夏中葫芦巴碱、胸腺嘧啶、腺嘌呤和6-氧嘌呤4种含氮化合物的含量.方法:采用Diamonil-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);乙腈-纯水-三乙胺梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1;柱温25℃;检测波长254 nm.结果:葫芦巴碱在0.2～1.0μg(r:0.999 6),胸腺嘧啶在2.6～13μg(r=0.999 8),腺嘌呤在0.55～2.75μg(r=0.999 9),6-氧嘌呤在0.65～3.25μg(r:o.999 8)线性关系良好;葫芦巴碱平均同收率100.6%,RSD 2.4%(n=6);胸腺嘧啶平均回收率99.89%,RSD 0.20%(n=6);腺嘌呤平均回收率100.53%,RSD 1.1%(n=6);6-氧嘌呤平均回收率100.0%,RSD1.4%(n=6).结论:3批样品测定结果表明,该方法简便、准确,可用于掌叶半夏中4种含氮化合物的含鼍测定.
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掌叶半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞的致炎作用研究
为探索掌叶半夏凝集素蛋白(PPL)刺激巨噬细胞诱导炎症的作用与炎症小体NLRP3的相关性.采用凝胶色谱纯化掌叶半夏凝集素蛋白并采用SDS-PAGE凝胶电泳分析其纯度;采用ELISA法以IL-1β为指标考察PPL刺激巨噬细胞释放炎症因子的影响;采用荧光探针DCFH-DA荧光酶标仪检测PPL刺激巨噬细胞后活性氧ROS的水平变化;以ROS抑制剂NAC(N-乙酰半胱氨酸)预处理巨噬细胞,考察PPL刺激ROS的过量生成与炎症因子IL-1β大量释放的相关性;采用Western Blot方法检测PPL对炎症小体生成相关的Caspase-1 p20,NLRP3,TXNIP,ASC等蛋白的表达水平变化.结果显示分离纯化的PPL达到电泳纯;PPL刺激巨噬细胞后引起ROS过量释放,引起强烈的氧化应激反应,胞内炎症因子IL-1β含量显著升高;NAC可抑制PPL导致的ROS过量生成,且IL-1β释放也显著降低.同时PPL可诱导胞内Caspase-1 p20,NLRP3,ASC蛋白表达升高,TXNIP表达显著降低.研究结果表明,PPL刺激巨噬细胞可导致强烈的氧化应激反应,同时能够激活炎症小体NLRP3,导致IL-1β大量生成释放,即PPL能够通过ROS-TXNIP-NLRP3-IL-1β信号通路促进IL-1β的成熟和分泌,导致炎症级联反应.
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掌叶半夏(虎掌南星)矾制前后致炎毒性比较研究
目的:探索掌叶半夏致炎毒性及白矾炮制对其致炎作用的影响.方法:自掌叶半夏鲜品中分离毒针晶及掌叶半夏凝集素蛋白;采用整体动物及细胞水平模型,以炎症介质为指标,考察掌叶半夏毒性成分毒针晶和凝集素蛋白的致炎效应,及矾制对致炎作用的影响.结果:腹腔注射掌叶半夏毒针晶混悬液可使小鼠腹腔渗出液中炎症介质PGE2,NO含量显著增加,矾制后生品及毒针晶诱导的PGE2,NO释放显著下降;掌叶半夏凝集素蛋白刺激小鼠巨噬细胞后,在一定时间内可导致剂量依赖性的炎症因子TNF-α及IL-6含量显著增加.矾制后凝集素蛋白诱导的小鼠腹腔渗出液中PGE2含量显著下降.结论:掌叶半夏的刺激性毒性在机体表现为炎症反应,其所含的毒针晶及凝集素蛋白是其毒性成分,均可导致显著的炎症介质释放.矾制可显著降低掌叶半夏毒性成分的致炎毒性.
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掌叶半夏超临界CO2乙醇萃取物的抗惊厥作用
目的 研究掌叶半夏超临界CO2乙醇萃取物(SEE-CO2PP)对青霉素诱发惊厥的对抗作用.方法 采用大鼠皮质局部定位注射青霉素诱发惊厥模型,研究SEE-CO2PP对惊厥发作的潜伏期以及惊厥行为变化的影响,并用RM6240C型多道生理信号采集处理仪记录皮质和海马痫性放电的潜伏期、频率和痫波高发放波幅,同时应用高效液相色谱法测定海马谷氨酸(Glu)、天冬氨酸 (Asp)、甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)递质的含量.结果 SEE-CO2PP 15和30 g·kg-1 (ig)可延长青霉素诱发惊厥的潜伏期,并减弱发作强度.SEE-CO2PP能够延长痫性放电的潜伏期,减少痫性放电的频率,减小皮质和海马发放痫波的高波幅,同时,SEE-CO2PP可以增加海马GABA的水平,对Gly,Asp和Glu水平无明显影响.结论 SEE-CO2PP可对抗青霉素诱发的惊厥行为和痫样放电,具有抗惊厥作用.
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半夏及其伪品的鉴别
目的:在市场销售及临床应用中正确使用半夏,杜绝假冒或掺伪.方法:将半夏与水半夏、掌叶半夏、天南星的基原、植物形态特征、饮片特征、显微鉴别及所合成分进行对比.结果:半夏在植物形态、饮片特征及所合成分等方面均有别于其伪品.结论:水半夏、掌叶半夏、天南星从药用功效上不可替代半夏.
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近红外光谱法用于半夏伪品鉴别
目的 实现对半夏及其伪品掌叶半夏的快速鉴别.方法 采用近红外光谱法,结合多种预处理方法,对半夏及掌叶半夏进行判别分析和聚类分析,建立判别模型.结果 在6 600 ～5 400 cm-1波段内,采取原始图谱结合多元散射校正和标准正态变量变换的预处理方法,辨识率可达100％;聚类分析可有效地将半夏与掌叶半夏分为2类,样本辨识的准确率达96.9％.结论 近红外光谱法用于半夏及掌叶半夏的快速鉴别准确可靠,方法可行.
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掌叶半夏研究概况
分别从化学成分、药理作用等方面概述掌叶半夏的研究进展,阐述了掌叶半夏具有镇静、镇痛作用、抗惊厥作用及对心血管作用,尤其是从掌叶半夏对卵巢癌细胞株SKOV3、OVCAR、A0、3A0的抑制作用和其浸出液对Hela细胞的抑制作用等方面,重点阐明了掌叶半夏抗肿瘤作用,尤其是对宫颈癌的治疗应用.
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遮荫对掌叶半夏生长、产量及光合生理特性的影响研究
目的:研究遮荫对掌叶半夏生长、药材产量和光合生理指标的影响,分析适宜掌叶半夏药材高产的遮荫度,探寻其产量差异形成的光合生理机制.方法:采用遮荫网遮荫,共设置了5种光强处理,透光率分别为全光对照CK( 100％)、T1(75％)、T2(65％)、T3(50％)、T4(25％),测定各遮荫处理下掌叶半夏的株高、单株叶片数、单株叶面积、单片叶面积、药材产量、叶绿素含量、光合日进程和叶绿素荧光参数.结果:(1)遮荫可显著(P＜o.01)提高掌叶半夏的株高、单株叶面积和叶绿素含量；(2)光合日进程曲线测定结果表明,除T4处理外其他处理均发生光合“午休”现象,日平均光合速率(Pn)以T1处理高,绝对光能利用率(Eu)以T3处理高；(3)叶绿素荧光参数测定结果表明,CK的Fv/Fm低,发生的原因可能与PS II反应中心的光化学伤害有关；(4)药材产量以T2处理高,较CK增产56.34％.结论:掌叶半夏更适宜在遮荫条件下栽培,透光率在65％时有利于掌叶半夏药材高产,其产量差异的形成可能与日均光合速率的不均衡有关.
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掌叶半夏主要成分对子宫颈癌细胞生长的抑制作用
目的 观察掌叶半夏主要成分对子宫颈癌细胞活性、形态和超微结构、细胞周期和凋亡的影响.方法 在子宫颈癌细胞SiHa的培养基中加入不同浓度的β-谷甾醇和/或掌叶半夏总蛋白培养1～7 d,采用MTT比色法检测细胞的活性.采用倒置相差显微镜、扫描和透射电镜观察细胞形态学和超微结构的变化,流式细胞术检测β-谷甾醇对细胞周期和细胞凋亡的影响.结果 β-谷甾醇对子宫颈癌细胞SiHa的活性表现出明显的抑制作用,且具有时间、剂量依赖关系,掌叶半夏总蛋白对SiHa细胞的活性无显著影响.与对照组比较,20 μmol/L的β-谷甾醇使SiHa细胞出现S期聚集、凋亡和坏死细胞增加,细胞形态和超微结构发生显著改变.结论 掌叶半夏总蛋白对SiHa细胞活性的抑制作用不明显,β-谷甾醇能抑制人子宫颈癌细胞的活性,使细胞周期聚集在S期,诱导少量细胞凋亡和坏死,对细胞的形态和超微结构有显著的影响.因此,β-谷甾醇有希望成为一种安全低毒的抗子宫颈癌药物.
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掌叶半夏有效提取物单独或与顺铂联合对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用
目的 观察中药掌叶半夏有效提取物(PE)对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用,以及PE对HeLa细胞对顺铂(DDP)敏感性的影响,以期寻找药物治疗宫颈癌更完善的途径.方法 体外培养宫颈癌HeLa细胞,分别用PE、DDP及DDP+PE处理细胞;用倒置相差显微镜观察细胞生长及摄影,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 PE及DDP对宫颈癌HeLa细胞的生长均表现出明显的抑制作用,低剂量PE可加强DDP对HeLa细胞的抑制作用;流式细胞术检测结果显示PE作用后HeLa细胞呈现出凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞的比例明显增加.结论 PE对宫颈癌HeLa细胞有明显的抑制生长和促凋亡作用,同时能提高HeLa细胞对顺铂的敏感性.
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半夏与其伪品掌叶半夏的RAPD鉴别
目的建立半夏及其伪品掌叶半夏的快速简单的分子鉴定方法.方法 SDS法提取半夏和掌叶半夏的基因组DNA,20个10碱基随机引物(S1-S20,上海生工)用于RAPD-PCR分析.结果 20个引物中有7个有效稳定的引物在半夏和掌叶半夏之间能显示出多态性指纹图谱,其中Si0和S17在半夏和掌叶半夏之间显示较大差异.结论 利用引物S10和S17进行RAPD-PCR能有效鉴别半夏和掌叶半夏.
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山东天南星生产情况调查
山东产天南星药材为虎掌南星,植物基源为掌叶半夏Pinellia pedatisecta Schott,以菏泽和济宁两市为种植区,有块茎繁殖法和种子繁殖法,常见病害有病毒病、根腐病、烫叶病,常见虫害为红天蛾、红蜘蛛.对目前的产地加工、产销情况进行了介绍,对存在问题进行了探讨.
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胶束电动毛细管色谱法测定半夏等药材中苯甲酸的含量
目的 建立胶束电动毛细管电泳色谱法(MECC)测定半夏及其同科其它品种药材中苯甲酸的含量的方法.方法 用MECC法对样品进行分析.毛细管柱内径75 μm,长62.5 cm;运行电压25 kV,检测波长200 nm,分离温度35℃;緩冲液为30 mmol·L-1,SDS-30 mmol·L-1硼酸-15%甲醇(pH值9.5);压力进样,进样时间3 s.结果 苯甲酸在0.044～2.2 mg/ml浓度范围内具有良好的线形关系( r＝0.9994), 平均回收率为96.7% (RSD=2.4%, n=6), 对半夏及其同科属其它品种共14个样品中的苯甲酸含量进行了测定.结论 该方法快速、简便、并且较为准确,可供评价半夏等品种质量时参考.
关键词： 半夏 掌叶半夏 水半夏 苯甲酸 胶束电动毛细管色谱法 -
掌叶半夏生物学特性的研究
目的 观察掌叶半夏的生长特性与光照、温度、土壤、水分、肥料等的关系.方法 试验观察采用大田定株、随机抽样与盆栽实验相结合的方法.结果 掌握了掌叶半夏的生物学特性和生长规律.结论 该植物在半遮荫、25～30℃的砂质土壤中生长较好,以饼肥或尿素作为肥料,可以大面积地栽培.
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半夏类药材不同提取物对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用
目的:观察并比较半夏类药材不同提取物诱导体外培养的人肝癌细胞Bel-7402凋亡的作用.方法:应用流式细胞术,检测半夏类药材不同提取物促进人肝癌细胞Bel-7402凋亡的作用,并观察了2种掌叶半夏醋酸乙酯提取物对细胞凋亡的量效关系.结果:3种药材都有诱导Bel-7402肿瘤细胞凋亡的活性,其诱导肿瘤细胞凋亡的有效成分主要集中在总有机酸或醋酸乙酯提取部分.结论:掌叶半夏和半夏诱导肿瘤细胞凋亡的作用较强,水半夏较弱,并且2种掌叶半夏样品的醋酸乙酯部分对促进Bel-7402细胞凋亡呈现一定的剂量依赖性.
