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丹溪痛风方对阿尔茨海默病小鼠血脑屏障通透性和海马β淀粉样蛋白1-40的影响及机制
目的:探讨丹溪痛风方(DXTFF)对阿尔茨海默病(AD)小鼠血脑屏障(BBB)通透性和海马β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)的影响及机制.方法:小鼠随机分成正常组,模型组,多奈哌齐组(0.001 g·kg-1),DGP高、中、低剂量组(52,26,13 g·kg-1).采用小鼠双侧海马注射Aβ1-42和腹腔注射D-半乳糖诱导AD小鼠.DGP连续治疗35 d后取材.检测小鼠脑含水量和伊文氏蓝(EB)含量,海马电镜结构和脏器指数.采用双抗体夹心法测定海马和血清Aβ.1-40,海马晚期糖基化终末产物受体(RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1).采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马RAGE和LRP1 mRNA表达.结果:与正常组比较,模型组AD小鼠脑含水量,EB含量,海马Aβ140含量及海马RAGE mRNA水平明显升高(P＜0.05),血清Aβ1-40,海马LRP1 mRNA,脾指数和胸腺指数均明显降低(P＜0.05),海马CA1区神经元形态较规则,神经元较小,细胞核圆形且萎缩,双层核膜不清晰,细胞质不丰富,细胞器较少;与模型组比较,DGP组脑含水量,EB含量,海马Aβ1-40及RAGE mRNA水平明显降低(P＜0.05),血清Aβ1-40,海马LRP1,脾指数和胸腺指数明显增加(P＜0.05),海马神经元结构明显改善.结论:DGP通过下调海马RAGE和上调海马LRP1表达来降低AD小鼠BBB通透性和海马Aβ1-40.
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晚期糖基化终产物受体和低密度脂蛋白受体相关蛋白在慢性脑血流低灌注大鼠皮层和海马的改变
目的 研究慢性脑血流低灌注对脑内受体介导的β-淀粉样肽(Aβ)转运蛋白晚期糖基化终产物受体(RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1))含量及分布的影响. 方法采用双侧颈总动脉永久性结扎大鼠模型,应用免疫组织化学和免疫印迹方法对脑内RAGE和LRP-1进行定位和定量检测. 结果 免疫组织化学结果显示,与对照组相比,RAGE在皮层及海马组织中血管内皮细胞上的表达从低灌注10d起增多,而神经元上表达从低灌注30d起减少,且这种变化一直持续到低灌注180d;LRP-1的分布变化则与之相反.免疫印迹结果显示,皮层和海马中RAGE含量在低灌注术后10d即开始明显增加,且在缺血的不同时间点与相应的对照组比较都明显增多(P<0.05);LRP-1变化较晚,在缺血180d时明显增多(P<0.05). 结论 慢性脑血流低灌注可使RAGE、LRP-1在脑组织中的表达增高,同时在神经元、血管中的分布发生改变,这种变化可导致Aβ在脑内的聚集,可能在阿尔茨海默病(AD)早期发病过程中起重要作用.
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脑淀粉样血管病所致脑出血的免疫性血管病理损害初步研究
目的回顾性分析外科手术治疗的自发性脑出血（intracerebral hemorrhage，ICH）病理标本中脑淀粉样血管病（cerebral amyloid angiopathy，CAA）及相关免疫-血管因子共表达情况，探讨CAA-ICH的免疫性血管病理损害可能机制。
方法收集2010-2011年46例ICH患者的手术病理标本，其中男27例，女19例，平均年龄（56±15）岁。免疫组化荧光检测β-淀粉样蛋白（amyloid β，Aβ）与晚期糖基化终产物受体（glycosylation end products，RAGE）、低密度脂蛋白受体相关蛋白1（low-density lipoprotein receptor related protein-1，LRP1）蛋白的共表达情况。
结果46例ICH患者中8例（男5例，女3例）确诊为CAA，占17.39%，确诊为CAA的8例患者脑组织标本均有Aβ、RAGE、LRP1蛋白的共表达（阳性率100%），而在非CAA自发性脑出血患者中均无共表达。CAA-ICH组的LRP1表达水平较非CAA-ICH组显著降低（P=0.031），而CAA-ICH组的RAGE表达水平较非CAA-ICH组显著升高（P=0.015）。
结论 CAA是ICH的重要病因之一，CAA相关的免疫-血管因子RAGE、LRP1蛋白异常表达，在ICH发病机制中可能有重要作用。 -
MEOX2基因与阿尔兹海默病神经血管功能失调的相关性研究
阿尔兹海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种以进行性认知功能障碍和行为损害为特征的脑退行性疾病.目前临床上极度缺乏预防及治疗AD的有效药物.同源盒MEOX2基因又称为GAX基因,主要在心血管系统中高表达,对血管的分化和血管的生成起多方面作用,本课题旨在研究MEOX2基因与AD疾病中神经血管功能失调的相关性,为AD疾病的治疗寻找新的思路.本实验通过双侧侧脑室注射Aβ1-42建立AD大鼠模型,应用Morris水迷宫、免疫组织化学染色、生化检测、免疫印迹(Western blot)及实时定量PCR等方法检测指标进行研究.实验动物饲养及处理均符合中国实验动物伦理学要求.实验结果表明,与对照组相比,AD模型组大鼠有明显的认知功能障碍,伴随着脑内和血清中Aβ的增加、脑内星形胶质指标纤维酸性蛋白(GFAP)、小胶质细胞指标同种异体炎性因子1 (AIF1)、内皮一氧化氮合酶(eNOS)表达的增加和特异性神经元烯醇酶(NSE)、突触素(SYN)、血管功能变化指标CD34、血管内皮生长因子(VEGF)表达的减少,内皮素(ET)浓度增加,一氧化氮(NO)浓度降低.此外,在AD模型大鼠脑内MEOX2和低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)减少,晚期糖基化末端产物受体(RAGE)表达增加,表明Aβ诱导的大鼠AD模型中神经血管功能失调可能与MEOX2的降低有关.同时,MEOX2基因的作用与Aβ转运受体LRP-1和RAGE水平的变化存在一定的相关性.
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慢病毒介导shRNA关节腔注射可加重骨关节炎的软骨破坏
背景：近研究表明低密度脂蛋白受体相关蛋白除了参与脂质代谢外，还参与调节炎症反应。
目的：观察慢病毒介导的低密度脂蛋白受体相关蛋白1-shRNA对大鼠骨关节炎模型软骨破坏的影响，以及对软骨组织中基质金属蛋白酶13表达的作用，初步判断低密度脂蛋白受体相关蛋白1对体内实验骨关节炎发病进程中的作用。
方法：SD大鼠64只分为4组，每组16只。①对照组大鼠未做手术为阴性对照组。②假手术组大鼠显露关节腔后及关闭切口，不切断交叉韧带和半月板。③模型+shLRP1组大鼠切断前交叉韧带切断加内侧半月板部分切除制作骨关节炎模型，造模后2 d用慢病毒介导的siRNA关节腔注射，每周1次，连续2周。④骨关节炎模型组，造模后关节腔注射阴性对照慢病毒。4组大鼠造模后5d开始在自制的电动跑步机中跑步，每日跑步30 min，里程为500 m。造模2，4及6周处死各小组大鼠，观察软骨破坏程度和软骨组织中基质金属蛋白酶13表达。
结果与结论：①大体和病理切片观察发现：行关节腔注射慢病毒介导的siRNA抑制关节软骨的低密度脂蛋白受体相关蛋白1表达后，大鼠骨关节炎模型中软骨破坏加重，加速骨关节炎病程。②6周时：模型+shLRP1组Mankin’s评分明显高于其他3组(P<0.05)，模型+shLRP1组软骨细胞基质金属蛋白酶13阳性率明显高于其他3组(P<0.05)。③结果说明：前叉韧带切断加内侧半月板部分切除并配合跑步机中慢跑锻炼能再现骨关节炎模型。慢病毒介导siRNA关节腔注射可干扰抑制关节软骨中的低密度脂蛋白受体相关蛋白1表达，对关节软骨有加重损伤的作用。 -
软骨细胞膜蛋白低密度脂蛋白受体相关蛋白1低表达的意义
背景：肿瘤坏死因子α是骨关节炎主要致病因子，主要通过激活核因子KB信号通路活性实现软骨细胞炎症反应。细胞膜蛋白低密度脂蛋白受体相关蛋白1参与调节多种细胞因子诱导的细胞炎症反应。
目的：观察大鼠软骨细胞膜蛋白低密度脂蛋白受体相关蛋白1对炎症因子肿瘤坏死因子α反应中的作用。
方法：将慢病毒包装的低密度脂蛋白受体相关蛋白1-shRNA转染原代培养的软骨细胞。转染3 d后用核因子κB磷酸化抑制剂Bay 11-7082(10μmol/L)预处理的阴性对照组和shLRP1组软骨细胞30 min，肿瘤坏死因子α(30μg/L)分别作用两组软骨细胞30 min，收集总蛋白并进入后续Western blot的实验，测定相关胞内信号蛋白表达情况,收集总RNA并行Real-time PCR实验检测相关RNA表达情况。收集肿瘤坏死因子α(30μg/L)作用软骨细胞12 h的培养基行ELISA检测基质金属蛋白酶13表达水平。
结果与结论：①慢病毒介导敲低低密度脂蛋白受体相关蛋白1后的软骨细胞肿瘤坏死因子α受体1表达增加；②肿瘤坏死因子α作用后的shLRP1组软骨细胞核因子kB通路较对照组均有明显激活，诱导型一氧化氮合酶表达增加；③ELISA检测提示shLRP1组胞外基质金属蛋白酶13浓度增加；④结果提示，软骨细胞膜蛋白低密度脂蛋白受体相关蛋白1低表达对炎症因子肿瘤坏死因子α的作用表现为激活核因子kB通路和提高骨关节炎相关的蛋白基质金属蛋白酶13表达以及易凋亡。 -
LRP-1抑制缺氧/复氧诱导的肾细胞损伤
目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)在肾小管上皮细胞(HK2)缺氧/复氧损伤中的作用及其可能机制.方法:建立HK-2缺氧/复氧模型;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LRP-1 mRNA表达量;Western blotting检测LRP-1、JNK蛋白表达量和JNK磷酸化水平;构建重组载体pcDNA.3.1-LRP-1并转染细胞过表达LRP-1;转染LRP-1 siRNA抑制LRP-1表达;试剂盒方法检测caspase-3活性;Annexin-Ⅴfluorescein isothiocyanate conjugate and propidium iodide(Annexin-Ⅴ FITC/PI)方法检测细胞凋亡;MTT法检测细胞生长活力;试剂盒方法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;JNK抑制剂SP600125孵育HK-2.结果:HK-2缺氧/复氧诱导LRP-1表达量上调;过表达LRP-1显著下调JNK磷酸化水平,降低缺氧/复氧诱导的HK-2凋亡,降低caspase-3活性和LDH漏出量,且提高细胞生长活力.抑制LRP-1则作用相反.另外,SP600125抑制JNK磷酸化水平,且提高细胞生长活力,降低caspase-3活性.结论:LRP-1可通过调控JNK降低肾细胞的缺氧/复氧损伤,为肾脏缺血再灌注的防治提供新的靶点.
关键词： 低密度脂蛋白受体相关蛋白1 缺氧/复氧 肾细胞 JNK -
不同年龄糖尿病大鼠脑组织LRP-1表达与Aβ1-40的相关性
目的 研究糖尿病大鼠脑组织中低密度脂蛋白受体相关蛋白1(Lrp-1)和β淀粉样蛋白(Aβ1-40)的含量,探讨二者的关系.方法 采用高脂高糖饮食加小剂量腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型.将Wistar大鼠随机分为3月龄正常对照组、6月龄正常对照组、3月龄糖尿病组(DM3组)、6月龄糖尿病组(DM6组).应用免疫组化法测定Lrp-1、Aβ1-40的表达.酶联免疫吸附试验(Elisa)法测定Lip-1、Aβ1-40在脑组织的表达量.结果 ①Aβ1-40表达于大鼠大脑皮质、海马等处的神经元、神经胶质细胞的胞浆、胞膜及软脑膜动脉和穿支动脉的外膜及平滑肌细胞处;在同月龄大鼠中,糖尿病组Aβ1-40在脑组织中表达均较正常大鼠组明显增多(P<0.05);两组大鼠随着月龄的增长Aβ1-40在脑组织中的表达逐渐增加(P<0.05);②Lrp-1表达于大脑皮质、海马等处的神经元细胞的胞浆、胞膜及软脑膜动脉和穿支动脉的内膜和毛细血管内皮细胞上;在同月龄大鼠中,糖尿病组较正常大鼠组Lrp-1的表达明显减少(P<0.05);两组大鼠随月龄增长Lrp-1表达逐渐减少(P<0.05);③Aβ1-40和Lrp-1呈负相关.结论 Aβ1-40沉积可能与Lrp-1的表达下调有关.
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敲低LRP1基因对TNF-α诱导的大鼠软骨细胞损伤的影响
目的 探讨大鼠软骨细胞膜蛋白低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)对炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的大鼠软骨细胞损伤的影响.方法 将慢病毒包装的LRP1-shRNA转染原代培养的软骨细胞.转染3d后使用ERK磷酸化抑制剂PD098059(10μmol/L)和P38磷酸化抑制剂SB203580(10μmol/L)分别预处理对照组和shLRP1组软骨细胞30 min,再以TNF-α(30 ng/mL)作用软骨细胞30 min,收集总蛋白行Western blot检测软骨细胞MAPKs通路蛋白和凋亡蛋白表达.收集经TNF-α(30 ng/mL)作用12h的软骨细胞培养液,采用ELISA法检测MMP-13表达水平.结果 经TNF-α作用后,shLRP1组软骨细胞MAPKs通路蛋白ERK、P38活性、MMP-13表达均较对照组明显提高,且可以被PD098059和SB203580所拮抗(均P＜0.05);凋亡蛋白Caspase-3和Bax表达较对照组有明显提高,抑凋亡蛋白p-Akt和Bcl-2表达较对照组明显降低(均P＜0.05).结论 在TNF-α诱导的大鼠软骨细胞损伤中,敲低LRP1表达可激活MAPK通路,上调MMP-13表达和促进细胞凋亡,LRP1有望成为骨关节炎治疗的靶点.
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低密度脂蛋白受体相关蛋白1在阿尔茨海默病中的研究进展
阿尔茨海默病的主要病理学特征之一是β-淀粉样蛋白(Aβ)过度沉积,基于β-淀粉样蛋白级联学说,降低Aβ水平是对抗阿尔茨海默病的有效策略.本文对低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)介导的细胞对Aβ的摄取及降解以及LRP1介导的外周与中枢神经系统中Aβ转运及清除的具体机制的研究进展作一综述.
关键词： 低密度脂蛋白受体相关蛋白1 阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白 -
低密度脂蛋白受体相关蛋白1与胎盘植入及新生儿结局的关系
目的 探讨产妇血清低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)表达及其与胎盘植入和新生儿结局的关系.方法 选取30例胎盘植入产妇(观察组)以及30例健康产妇(对照组),比较两组血清LRP1、Caspase-3、Bax、bcl-2表达并进行.根据LRP1将30例胎盘植入产妇分为低表达组(n=17)与高表达组(n=13),比较两组受试产妇血清LRP1、Caspase-3、Bax、bcl-2表达以及产妇产后情况、新生儿结局.结果 观察组低密度LRP1表达低于对照组.观察组Caspase-3、Bax表达高于对照组、bcl-2表达低于对照组(P<0.05).高表达组Caspase-3、Bax表达水平低于低表达组、bcl-2表达高于低表达组.高表达组产后出血率、产后输血率、子宫切除率高于低表达组.高表达组娩出新生儿病死率高于低表达组.结论 胎盘植入产妇LRP1表达降低,其可对产妇及新生儿结局造成不良影响.
关键词： 低密度脂蛋白受体相关蛋白1 胎盘植入 新生儿结局 -
α-苦瓜素经LRP1受体介导的JNK信号通路诱导肝细胞L02早期凋亡的机制研究
目的:探讨α-苦瓜素诱导肝细胞L02(简称"L02细胞")早期凋亡的信号通路.方法:制备并纯化α-苦瓜素.采用流式细胞术检测0(阴性对照)、160、80μg/mLα-苦瓜素作用L02细胞2～8 h后的细胞凋亡率.小干扰RNA(siRNA)沉默低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)得到LRP1-siRNA细胞,然后采用液相芯片分析术检测α-苦瓜素(160μg/mL)分别作用L02细胞(正常组)和LRP1-siRNA细胞(沉默组)0、0.25、0.5、1、2 h后c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路中促调蛋白磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化凋亡前体蛋白(p-Bad)、胱天蛋白酶9(Caspase-9)及抑调蛋白磷酸化蛋白53(p-p53)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化B淋巴细胞瘤2(p-Bcl-2)、Caspase-8的表达情况,分析α-苦瓜素对L02细胞JNK信号通路的作用.结果:制备并纯化得到α-苦瓜素(纯度>97％);与阴性对照组比较,160μg/mLα-苦瓜素作用8 h时,可显著诱导细胞早期凋亡(P<0.05),80μg/mLα-苦瓜素诱导的早期凋亡不明显(P>0.05);与0 h比较,作用后0.25 h促调蛋白p-JNK、p-Bad和Caspase-9表达量显著增加(P<0.05),而抑调蛋白p-p53、p-Akt、p-Bcl-2和Caspase-8表达量无变化;与正常组相比,沉默组各时间点的p-JNK、p-Bad和Caspase-9的表达均显著减少(P<0.05).结论:α-苦瓜素可能通过LRP1受体介导JNK信号通路诱导肝细胞凋亡,为揭示其肝毒性提供了参考.
