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15羟二十四碳四烯酸对缺氧视网膜微血管内皮细胞增生的抑制作用及其机制
背景 缺氧导致的视网膜新生血管性疾病已成为主要的致盲疾病,目前临床上缺乏有效的化学治疗方法,因此,研究其发病的分子机制从而指导临床用药十分关键. 目的 探讨15羟二十四碳四烯酸(15-HETE)对缺氧条件下培养的视网膜微血管内皮细胞(RMVECs)增生、凋亡的影响及其作用通路. 方法 分离C57BL/6J小鼠的RMVECs并用细胞除杂法进行培养,用间接免疫组织化学及免疫荧光检测法鉴定培养的细胞对内皮细胞的特征性标志物Ⅷ因子相关抗原的反应.将生长良好的细胞分为常氧组和缺氧组,后者以终浓度为125 μmol/L的CoCl2处理细胞建立缺氧模型.各组细胞换无血清含内皮细胞生长添加剂(ECGS)和高糖的DMEM培养基继续培养48 h,再按照培养基中加入15-HETE浓度的不同(终浓度分别为0.0、0.1、1.0、5.0μmol/L)分别将常氧组和缺氧组细胞亚分为4个组.各组细胞分别用15-HETE处理48 h,然后用MTT法检测各组细胞的增生值(吸光度,A值),并计算15-HETE的抑制率;分别采用逆转录PCR(RT-RCR)法及Western blot法检测各组RMVECs中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、bcl-2和caspase-3 mRNA及其蛋白的相对表达量. 结果 间接免疫组织化学法检测结果显示,培养的细胞对Ⅷ因子相关抗原呈阳性表达,细胞阳性率为(94.38±4.25)％.常氧培养条件下不同浓度15-HETE培养组RMVECs增生值(A值)的差异无统计学意义(F=0.283,P=0.837),但缺氧培养条件下不同浓度15-HETE培养组RMVECs增生值的差异有统计学意义(F=702.582,P＜0.001),其中缺氧+1.0 μmol/L 15-HETE处理组、缺氧+5.0 μmol/L 15-HETE处理组RMVECs增生值明显低于单纯缺氧培养组,差异均有统计学意义(P＜0.05).0.1、1.0、5.0μmol/L 15-HETE处理组对RMVECs的抑制率分别为(1.09±0.31)％、(21.09±3.53)％和(49.86±4.15)％,随着15-HETE浓度的增加,抑制率逐渐升高.常氧条件下各组bcl-2、caspase-3和HIF-1α mRNA的表达差异均无统计学意义,与单纯常氧培养组比较,单纯缺氧培养组RMVECs中bcl-2和HIF-1α mRNA的相对表达量分别升高1.5倍和1.7倍,而caspasse-3 mRNA的表达降低了70％,组间差异均有统计学意义(P＜0.05);在用不同浓度15-HETE干预的缺氧细胞中,bcl-2、HIF-1α的相对表达量随着15-HETE浓度的增高呈逐渐下降的趋势,而caspasse-3mRNA的表达则逐渐上升.常氧条件下各组细胞bcl-2、pro-caspase-3蛋白相对表达量差异均无统计学意义(P＞0.05),但与单纯常氧培养组比较,单纯缺氧培养组bcl-2、pro-caspase-3蛋白相对表达量分别上升1.6倍和1.9倍,差异均有统计学意义(P＜0.05);在缺氧条件下,bcl-2和pro-caspase-3蛋白的表达量随15-HETE浓度的增高逐渐下降,5.0 μmol/L 15-HETE处理组分别是单纯缺氧培养组的40.4％和42.5％,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 15-HETE可能通过下调HIF-1α、bcl-2及激活caspase-3的方式抑制缺氧诱导下RMVECs的增生,从而对缺氧导致的新生血管生成产生抑制作用,其作用呈剂量依赖的方式.
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一氧化氮合酶抑制剂对大鼠半乳糖性白内障的防治作用
背景 研究发现,白内障患者的血液、房水、泪液及晶状体内一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量均升高.NO是一种极不稳定的生物自由基,其生成依赖于NOS.目前NOS抑制剂对白内障防治作用的研究鲜有报道. 目的 制作大鼠半乳糖性白内障模型,应用NOS抑制剂-硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)滴眼液进行干预,探讨L-NAME对大鼠半乳糖性白内障的作用. 方法 清洁级Wistar大鼠60只用随机数字表法随机分为对照组、模型组、L-NAME组3个组,每组各20只.对照组20只大鼠皮下注射质量分数0.9％生理盐水30 ml/kg;模型组与L-NAME组各20只大鼠均给予皮下注射等体积质量分数50％ D-半乳糖溶液,L-NAME组大鼠同时用L-NAME滴眼液点眼,每日3次.注射后第10、20、30天,在裂隙灯显微镜下检查各组鼠眼情况并对晶状体混浊程度进行评分,于注射后第30天摘出晶状体,检测各组大鼠晶状体中NO及NOS的含量.应用流式细胞分析技术检测各组大鼠晶状体上皮细胞(LECs)中凋亡基因半胱天冬酶-3(caspase-3)的含量.采用重复测量两因素方差分析比较各组大鼠不同时间点晶状体混浊评分的差异,采用单因素分析法比较各组大鼠晶状体中NO、NOS及caspase-3含量,以平均荧光强度指数(MFI)表示蛋白表达量.结果 模型组和L-NAME组大鼠皮下注射50％ D-半乳糖溶液后晶状体出现混浊,模型组大鼠晶状体混浊评分均明显高于L-NAME组;模型组和L-NAME组大鼠的晶状体混浊评分随着实验时间的延长均增加,差异均有统计学意义(F时间 =435.251,P=0.000;F分组=395.120,P=0.000).对照组大鼠晶状体中NO含量为(0.45±0.15) μmol/g,模型组为(2.67±0.47) μmol/g; L-NAME组为(1.68±0.34) μmol/g,3个组间差异有统计学意义(F=58.872,P=0.000).对照组大鼠晶状体中NOS含量为(0.0160±0.0020) U/ml(商品单位),模型组为(0.0370±0.0040) U/ml(商品单位),L-NAME组为(0.0270±0.0010) U/ml,3个组间的差异有统计学意义(F=66.174,P=0.000).对照组、模型组和L-NAME组大鼠晶状体中caspase-3含量分别为339.4±37.9、697.7±46.5和650.7±53.1,各组间差异有统计学意义(F=100.005,P=0.000). 结论 大鼠晶状体中NO、NOS和caspase-3含量的多少与晶状体混浊程度有关,L-NAME的局部应用可以抑制半乳糖性白内障晶状体中NOS的表达,减少NO的生成,抑制LECs的凋亡.
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米诺环素对大鼠视网膜缺血再灌注的保护作用探讨
目的 探讨米诺环索对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用.方法 SD大鼠88只,分为正常对照组8只,缺血组和治疗组各40只.建立视网膜缺血再灌注模型,于6、24、48、72 h检测视网膜电图(ERG)b波振幅,分光光度计测定超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO)的变化,免疫组织化学检测半胱天冬酶-3(caspase-3)的表达,电镜观察超微结构.结果 与缺血组相比,治疗组可维持ERG b波振幅,升高SOD含量,降低MDA、NO含量,降低caspase-3表达,可减轻超微结构损伤(P＜0.05).结论 米诺环素可维持ERG b波振幅,调控SOD、MDA、NO,改善超微结构而保护视网膜.
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YVAD-cmK及DEVD-CHO对培养的人视网膜色素上皮细胞光损伤的影响
目的观察半胱天冬酶 (caspase-3)选择性抑制剂天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酰胺醛(Asp-Glu-Val-Asp-CHO,DEVD-CHO),及caspase-1选择性抑制剂酪氨酸-缬氨酸-丙氨酸-天冬氨酰胺(Tyr-Val-Ala-Asp-cmK,YVAD-cmK)对可见光诱导的培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响.方法用(2 000±500)lx的白色荧光灯光源,照射培养的人RPE细胞.在培养液中加入YVAD-cmK和DEVD-CHO,利用荧光素标记的连接素V/碘化丙锭双染色流式细胞测定观察RPE细胞的凋亡情况.结果本研究模型下,DEVD-CHO预处理组的细胞凋亡及坏死与无光照组相比,差异无显著性(P＞0.05),与光照组及YVAD-cmK预处理组相比,细胞存活数增高,差异有显著性(P＜0.05).而YVAD-cmK组与无光照组比较,其结果与单纯光照组一样,表现出细胞的明显损伤(P＜0.05).结论可见光诱导培养的人RPE细胞凋亡的发生机制中,可能不涉及caspase-1的作用.外源性的caspase-3抑制剂(DEVD-CHO)对RPE细胞光性损伤有一定的保护作用.
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C2-神经酰胺对牛晶状体上皮细胞凋亡的影响
目的:观察C2-神经酰胺对牛晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)凋亡的影响及半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性的变化.方法:取第二代牛LECs,经不同浓度(25 μmol/L,50 μmoL/L,100 μmol/L)C2-神经酰胺作用12 h,行TUNEL染色,荧光显微镜下计数凋亡细胞,计算凋亡率;Caspase-3活性检测试剂盒检测牛LECs中Caspase-3活性的变化.结果:随着C2-神经酰胺浓度的增加,牛LECs凋亡率也随之升高(P<0.05),呈剂量依赖关系.随着C2-神经酰胺浓度的增加,牛LEC中Caspase-3活性的表达也随之增强(P<0.05).结论:C2-神经酰胺可以诱导牛LECs发生凋亡;在此过程中,存在Caspase-3活性表达.
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新生大鼠脑缺氧缺血后半胱天冬酶-3激活与DNA损伤的关系
目的: 探讨未成熟脑在缺氧缺血(H1)后海马神经细胞半胱天冬酶-3的激活与DNA损伤之间的关系.方法: 采用7日龄新生大鼠脑缺氧缺血模型,观察HI后不同时间点脑组织海马CA1、CA3区半胱天冬酶-3活性亚单位p17阳性细胞及检测DNA双链断裂的寡核苷酸探针(HPP)标记阳性细胞的分布.结果: HI后3 h在海马CAl、CA3区即可检测到p17及HPP阳性细胞,并随HI时间延长而增加.在CAl区阳性细胞计数24 h达到峰值,而在CA3区72 h仍有较多阳性细胞,p17和HPP标记的阳性细胞在各时间点具有相同的变化规律.双重染色证实,p17和HPP在海马神经元中同时表达.结论: 未成熟脑HI后海马区半胱天冬酶-3被激活并伴随DNA双链的断裂,二者均是检测神经细胞凋亡敏感而特异的指标.
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澳洲茄边碱对大肠癌RKO细胞增殖和凋亡作用
目的 观察澳洲茄边碱对人大肠癌RKO细胞增殖及凋亡作用.方法 不同浓度澳洲茄边碱作用RKO细胞.CCK-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖,平板法检测克隆形成,Annexin V-APC/PI标记流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测Caspase-3活性.结果 澳洲茄边碱可抑制RKO细胞增殖,呈剂量与时间依赖性.澳洲茄边碱可抑制RKO细胞克隆形成,呈剂量依赖性.澳洲茄边碱可促RKO细胞凋亡.澳洲茄边碱同时可增强RKO细胞Caspase-3活性.结论 澳洲茄边碱可以抑制RKO细胞增殖和克隆形成,促RKO细胞凋亡,其机制与活化Caspase-3相关.
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H2O2对PC12细胞Caspase-3和NF-κB P65基因表达的影响
目的:探讨H2O2对PC12细胞半胱天冬酶-3(caspase-3)和核转录因子-kappaB P65 (uclear factor-kappa B,NF-κB P65)基因表达的影响.方法:不同剂量H2O2(0～400 nmol·L-1)处理PC12细胞8 h,采用RT-PCR检测Caspase-3、NF-κB P65 mRNA表达变化,Western blot检测Caspase-3P 20活性片段和NF-κB P65蛋白表达的变化,用比色法检测Caspase-3相对活性.结果:随H2O2浓度从100～400 nmol·L-1增加,Caspase-3、NF-κB P65 mRNA表达和Caspase-3 P20活性片段及NF-κB P65蛋白表达水平逐渐增加;随H2O2浓度从50～400 nmol·L-1增加,Caspase-3相对活性增加(P<0.05),在400 nmol·L-1 H2O2时Caspase-3相对活性达大值.结论:H2O2可剂量依赖性的增加Caspase-3 mRNA表达和Caspase-3P 20活性片段,增加Caspase-3活性;H2O2可剂量依赖性的增加NF-κB P65 mRNA表达和NF-κB P65蛋白表达.
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肌苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤Caspase-3表达的影响
目的 探讨肌苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)半胱天冬酶3(Caspase-3)表达的影响. 方法 健康新生7日龄SD大鼠12只,随机分为对照组(N组,n=4),左颈总动脉结扎HIBD组(H组,n=4)及肌苷治疗组(Ⅰ组,n=4),在缺氧缺血后3 d进行尼氏染色.另取120只新生7日龄SD大鼠按上述随机分组,每组40只,用Western blot方法检测各组在缺氧缺血后6 h、12 h、24 h、3 d、7 d时间点的Caspase-3表达情况. 结果尼氏染色可见肌苷治疗组能减轻脑组织的损伤.HIBD组Caspase-3在缺氧缺血后6 h开始出现裂解片段,24 h达高峰,各时间点的表达明显高于对照组,而肌苷治疗组裂解片段的表达较HIBD组减少,两者之间比较(P＜0.05). 结论肌苷治疗能够减少HIBD大鼠Caspase-3的激活,从而减轻细胞凋亡,提示肌苷通过抑制Caspase-3的活化而具有保护神经元的作用.
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MK-801对新生大鼠脑缺氧缺血后Caspase-3激活及其对凋亡的影响
目的探讨N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK-801对新生大鼠缺氧缺血(HI)后半胱天冬酶-3(Caspase-3)激活及凋亡的影响.方法 7日龄新生大鼠在HI后即刻给予腹腔注射MK-801 0.5 mg/kg,在HI后24 h取脑制作脑组织连续切片进行微管相关蛋白-2(MAP-2),Caspase-3免疫组化染色及发夹寡核苷酸探针(Haipin Probe,HPP)原位杂交,计算脑损伤面积及Caspase-3,HPP阳性细胞数.结果①MK-801干预组脑损伤面积为(23±5)%,较生理盐水对照组(52±12)%明显降低,P＜0.01;②MK-801干预组Caspase-3及HPP阳性细胞数(65±8)/高倍视野,(61.6±11.5)/高倍视野,与对照组(40±6.7)/高倍视野,(12.6±5.2)/高倍视野相比均明显减少,其中HPP阳性细胞数减少比Caspase-3阳性细胞数减少更明显.结论 MK-801能明显抑制Caspase-3的激活,减少神经元的凋亡,减轻缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的程度.
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健脾补土组方对体外神经元低氧/复氧后PI3K、Akt、Caspase-3表达的影响
目的 观察健脾补土组方对新生SD鼠神经元体外培养低氧/复氧后的凋亡情况以及PI3K、Akt、Caspase-3表达的影响,探讨其减少神经元凋亡的作用机制.方法 原代分离培养新生SD鼠神经元,随机分为正常血清对照组、低氧模型组、神经生长因子组、健脾补土组.将标本低氧诱导24 h,再复氧培养4 h进行造模.用流式细胞术检测神经元凋亡情况,RT-qPCR法检测PI3K、Akt、caspase-3 mRNA的表达,免疫细胞化学法和Western blot法检测PI3K、Akt、caspase-3蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,低氧模型组神经元凋亡率显著增加,PI3K、Akt mRNA与蛋白表达显著减少,Caspase-3 mRNA与蛋白表达显著增加;与低氧模型组比较,神经生长因子组、健脾补土组神经元凋亡率均显著减少,PI3K、Akt mRNA及蛋白表达显著增强,Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著较少(P<0.01);与神经生长因子组比较,健脾补土组神经元凋亡率显著减少,PI3K、Akt mRNA及蛋白表达显著增加,Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著降低.结论 健脾补土组方能减少脑缺血后神经元的凋亡,其作用机制可能与其通过上调PI3K和Akt的表达水平,终抑制在细胞凋亡中起关键作用的因子Caspase-3的表达有关.
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3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血Caspase-3表达和活性的影响
目的 探讨小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达和活性的影响.方法 大鼠腹腔注射3-NPA 20mg/kg或生理盐水3 d后制作局灶性脑缺血再灌注模型,采用免疫印迹技术和荧光测定法观察3-NPA预处理对缺血2 h再灌注24 h Caspase-3的表达和活性的影响.结果 缺血2 h再灌注24 h 3-NPA预处理组Caspase-3表达减弱(P＜0.05),活性降低(P＜0.05),与对照组比较差异有显著性.结论 3-NPA预处理诱导脑缺血耐受与降低Caspase-3活性,进而抑制神经细胞凋亡有关.
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细胞色素c信号通路在胆道梗阻大鼠中性粒细胞凋亡调控中的作用
目的 探讨细胞色素c(Cyt-c)信号通路在胆道梗阻大鼠中性粒细胞(PMN)凋亡调控中的作用.方法 104只SD大鼠随机分为正常组(NO组)、假手术组(SO组)、胆总管结扎组(BDL组)、Cyt-c干预组(BDL+Cyt-c组),NO组不作任何操作,BDL组、BDL+ Cyt-c组予胆总管结扎,SO组不予结扎和切断胆总管,BDL+Cyt-c组则在结扎胆总管关腹后行尾静脉注射Cyt-c(20 mg/kg).SO、BDL和BDL+ Cyt-c组分别予细分术后12、24、48、72 h等4个时相.检测外周血PMN数量,流式细胞仪测PMN凋亡率,分光光度法检测PMN胞质Caspase-8、Caspase-9及Caspase-3活化程度.结果 BDL组各时相PMN凋亡率明显低于NO组和SO组相应时相,差异有统计学意义(P＜0.05);与NO组和SO组各时相比较,BDL组Caspase-9和Caspase-3活性明显下降(P＜0.05);在BDL+ Cyt-c组各时相中,Caspase-9、Caspase-3活性和PMN凋亡率均显著高于BDL组;进一步相关性分析表明,Caspase-9、Caspase-3活性与PMN凋亡率均呈正相关(r=0.943,P＜0.01;r=0.949,P＜0.01).Caspase-8活性在NO组、SO组、BDL组、BDL+ Cyt-c组中变化不明显.结论 胆道梗阻大鼠Cyt-c通路上游信号Caspase-9及Caspase-3活性的减弱,导致外周血PMN凋亡减少,在梗阻性黄疸诱发过度炎症反应中具有重要意义;经Cyt-c干预后,促进了PMN的凋亡,有利于炎症反应的消退.
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TRAIL、caspase-3、Ki-67在自身免疫性甲状腺疾病中的表达研究——附57例检验报告
目的:分析肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)、半胱天冬酶-3(caspase-3)、抗增殖核蛋白单克隆抗体(Ki-67)在自身免疫性甲状腺疾病(autoimmune thyroid disease,AITD)中的表达情况.方法:采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶法检测31例格雷夫斯病(Graves'disease,GD)和26例桥本甲状腺炎(Hashimoto thyroiditis,HT)患者的甲状腺标本的TRAIL、caspase-3、Ki-67的表达情况,并以12份正常甲状腺标本作为对照,比较3组的差异.结果与结论:GD的甲状腺滤泡上皮细胞中TRAIL、caspase-3的表达阳性率分别为61%、71%,高于正常对照的42%、33%,低于HT的77%、92%.Ki-67在HT淋巴细胞中呈高表达,Ki-67标记指数为(21.00±4.75)%,Ki-67在GD甲状腺滤泡上皮细胞中的标记指数为(3.51±1.53)%,均高于HT组(0.51±0.15)%及正常对照组的(0.62±0.46)%,提示TRAIL、caspase-3、Ki-67可能在AI-TD的发病过程中起一定作用.
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青蒿琥酯诱导NB4细胞凋亡机制的研究
目的:研究青蒿琥酯诱导NB4细胞凋亡的机制.方法:通过细胞形态学、流式细胞仪检测青蒿琥酯对NB4细胞凋亡的影响,采用ELISA法检测半胱天冬酶-3(Caspasc-3)活性.结果:青蒿琥酯可诱导NB4细胞凋亡,并伴有Caspase-3活性增高.结论:青蒿琥酯诱导NB4细胞凋亡可通过激活Caspase-3而实现.
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因宁片对甲亢大鼠肝细胞凋亡调节蛋白Caspase-3和Bcl-2表达的影响
目的 观察因宁片对甲亢大鼠肝细胞凋亡调节蛋白半胱天冬酶-3(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达的影响,探讨因宁片对甲亢肝损害的保护作用及其机制.方法 对SD大鼠灌胃甲状腺片1.2 g/(kg·d)制备甲亢肝损害模型.因宁片低(0.6 g/kg)、中(1.2 g/kg)、高(2.4 g/kg)剂量组和甲亢灵组(1.2 g/kg)均灌胃给药,治疗30 d后处死大鼠,取血和肝脏.用放射免疫法测血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH),全自动生化仪测血清天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT).Western-Blot检测Caspase-3蛋白、Bcl-2蛋白表达.结果 与空白对照组相比,模型组大鼠血T3和T4水平明显升高,TSH水平下降(P＜0.01),AST和ALT水平升高(P＜0.01),Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达显著下降(P＜0.01).与模型组比较,因宁片高、中、低剂量组血中T3,T4,AST,ALT水平均明显降低,TSH水平均明显升高(P＜0.05),因宁片高、中剂量组Caspase-3蛋白表达明显下调(P＜0.01和P＜0.05),Bcl-2蛋白表达明显上调(P＜0.01),且因宁片高剂量组的改变明显.结论 因宁片对甲亢合并肝损害有预防作用,其作用机制可能与抑制肝细胞凋亡有关.
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Nrf2/ARE通路与PI3K/AKT通路相互作用对胰岛细胞半胱天冬酶-3表达的影响
目的 探讨核因子相关因子2 (Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路相互作用对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛细胞凋亡和半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响及其可能机制.方法 将60只雄性Wistar大鼠分为正常对照组(NC组,n=20)、糖尿病模型组(DM组,n=20)和叔丁基对苯二酚干预组(tBHQ组,n=20),干预8周后处死所有大鼠,TUNEL检测胰岛细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清及胰腺组织中丙二醛(MDA)水平,Western blot检测AKT、p-AKT、总Nrf2、核Nrf2、血红素氧合酶1(HO-1)、Caspase-3在胰岛细胞中蛋白表达水平.结果 与NC组比较,DM组胰岛细胞凋亡率显著增加(P=0.000),而tBHQ组胰岛细胞凋亡率明显低于DM组(P=0.000).DM组血清及胰腺组织中MDA水平较NC组明显升高(P=0.000),而tBHQ组血清及胰腺组织中MDA水平明显低于DM组(P=0.000).DM组p-AKT、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达水平均较NC组显著降低(P=0.000),Caspase-3蛋白表达水平较NC组明显升高(P=0.000);与DM组比较,tBHQ组p-AKT、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达水平均明显增加(P=0.000),Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P=0.017);AKT蛋白表达水平在3组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Nrf2/ARE通路与PI3K/AKT通路相互作用对抑制胰岛细胞Caspase-3的表达及延缓胰岛细胞凋亡进程产生重要的保护作用.
关键词： 半胱天冬酶-3 糖尿病 2型 胰岛 细胞凋亡 Nrf2/ARE通路 PI3K/Akt通路 氧化性应激 -
Caspase-3对HeLa细胞凋亡的诱导作用
目的探讨由野生型人caspase-3大小亚基颠倒构建的重组型caspase-3的促细胞凋亡活性.方法用RT-PCR法获得人caspase-3基因.通过重组PCR进行改造,构建小亚基位于大亚基之前的两种重组型caspase-3基因,它们所对应的蛋白质的N端,分别带有或没有其自身识别的四肽序列.将上述基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pIRES2-EGFP中,转染人HeLa细胞,在荧光显微镜和电镜下观察转染细胞的形态和结构.结果成功地获得了野生型caspase-3基因及两种重组型caspase-3基因.构建了重组型caspase-3基因的表达载体.转染HeLa细胞后,重组型caspase-3基因在细胞中得到表达,随后引起细胞荧光强度下降,生长状况变差甚至死亡.电镜观察显示,许多细胞呈现凋亡的典型特征.结论重组型caspase-3可促进HeLa细胞的凋亡.
关键词： 半胱天冬酶-3 细胞凋亡:绿色荧光蛋白 -
米非司酮对早孕绒毛滋养层细胞Bcl-2和caspase-3表达的影响
目的:探讨米非司酮对人早孕绒毛滋养细胞中Bcl-2和caspase-3表达的影响及其在滋养细胞凋亡中的作用.方法:将105例自愿要求终止妊娠的早孕妇女随机分成两组,即米非司酮流产组(55例)及人工流产组(50例).采用免疫组化染色方法检测早孕妇女的绒毛组织中Bcl-2和caspase-3的表达.结果:米非司酮组与人流组绒毛滋养细胞中Bcl-2的表达率分别为54.6%和88.0%; caspase-3的表达率分别为89.1%和42.0%.米非司酮组与人流组相比较绒毛滋养层细胞Bcl-2呈低表达 (P<0.01),caspase-3呈高表达(P<0.01).结论:Bcl-2和caspase-3在米非司酮诱导的早孕绒毛滋养层细胞凋亡的信号传导中起关键作用.
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胰岛素对滋养层细胞凋亡的调节作用及机制
目的:探讨胰岛素对培养的滋养细胞凋亡的影响及可能的机制. 方法:将培养的妊娠早期滋养层细胞,分为正常对照组(细胞+培养液)、H2O2组(细胞+培养液+H2O2)和胰岛素+H2O2组(细胞+H2O2+胰岛素).采用透射电镜观察及流式细胞术,观察H2O2诱导的细胞凋亡及胰岛素对H2O2诱导的细胞凋亡的抑制作用.并检测胰岛素对滋养细胞caspase-3的活性及Bcl-2蛋白表达的影响.结果:H2O2可诱导培养的滋养细胞凋亡,透射电镜下可见特征性的细胞核改变.胰岛素可显著抑制H2O2诱导的细胞凋亡,流式细胞仪检测其凋亡率较H2O2组显著下降(P<0.01).H2O2组滋养细胞中caspase-3的活性较对照组显著增高(P<0.01),而Bcl-2蛋白的表达则较对照组显著下降(P<0.01).结论:胰岛素可明显抑制H2O2诱导的滋养细胞凋亡,其机制可能与降低caspase-3的活性和促进Bcl-2蛋白的表达有关.
