生血合剂干预下免疫介导再障小鼠骨髓核因子κB表达变化

目的:进一步探讨获得性再生障碍性贫血(AA)发病机制及健脾补肾活血方生血合剂治疗AA的疗效机制.方法:以环孢素为对照,免疫介导AA小鼠为研究对象,采用定量PCR(Q-PCR)、免疫组织化学等方法分析生血合剂于预前后AA小鼠骨髓核因子kB(NF-κB)mRNA水平、蛋白表达及活性变化.结果:AA小鼠骨髓单个核细胞NF-κB mRNA水平未见明显改变,与正常对照比无显著差异(P＞0.05);骨髓细胞NF-κB/p65蛋白表达较正常组增加,p-IκBα表达明显下降,生血合剂干预后NF-κB/p65蛋白表达减少,而p-IκBa表达明显提高;与之相比,环孢素作用后NF-κB/p65蛋白及p-IκBa均急剧下降.结论:NF-κB蛋白表达异常及活性改变可能参与了免疫介导AA小鼠模型的形成;生血合剂可能通过调节NF-κB的表达及活性发挥改善免疫介导AA小鼠造血功能的作用.

Objective: To observe the clinical effect of Shengxue Mixture (SXM) in treating aplastic anemia and study the possible mechanism. Methods: Eighty-four patients in the treated group with Spleen-Kidney Yang deficiency syndrome and Spleen-Kidney Yin deficiency syndrome were treated with SXM-Ⅰ and SXM-Ⅱ respectively, and 30 patients in the control group were treated with Stanozolol. The clinical effect and several experimental parameters were also observed. Results: The basic cure was gained in 18 cases, remission in 23, markedly improved in 32, ineffective 11, total effective rate and cure remission rate of the treated group were 86.90% and 48.81% respectively, which were obviously better than those of the control group (P<0.05) with no obvious side-effect. While the patient's symptoms were alleviated, the peripheral blood cells increased, the ratio of T lymphocyte subsets tended to balance, the level of natural killer cell activity increased, interleukin-2 reduced, and reproduction of the bone marrow were markedly improved in most of the patients treated by SXM. Conclusions: SXM is an effective and safe drug for aplastic anemia. Its mechanism might be likely due to its regulating the immune function, which facilitates the recovery of the bone marrow hematopoiesis function.

再生障碍性贫血T细胞受体Vβ基因表达及生血合剂对其的干预作用

目的 利用免疫学和分子生物学技术,着重从T细胞受体β链可变区(TCR Vβ)亚家族基因表达角度探讨再生障碍性贫血(AA)的免疫发病机制及中药复方生血合剂的治疗作用.方法 AA患者分别用生血合剂(治疗组10例)和环孢霉素(对照组10例)治疗6个月以上,采用RT-PCR、基因扫描方法检测治疗前后外周血单个核细胞TCR Vβ基因表达的变化.结果 20例AA患者Vβ 24个亚家族基因谱型倾斜,寡克隆亚家族所占百分率明显增多,与健康人(10名)比较差异有显著性(P＜0.01).30%～50%的AA患者存在Vβ2、Vβ5、Vβ6、Vβ15、Vβ16、Vβ22、Vβ23寡克隆亚家族,50%以上的患者存在Vβ8、Vβ21寡克隆亚家族.治疗后两组寡克隆亚家族均比治疗前减少(P＜0.05).结论 多个克隆性增殖的T细胞家族参与了AA的发病过程,生血合剂可改善TCR Vβ谱型倾斜程度,降低异常T细胞克隆性增殖,从而减少异常克隆的T细胞对造血组织的免疫损伤,有利于骨髓造血功能的恢复.

生血合剂联合骨髓腔输血给药治疗再生障碍性贫血研究

目的:研究生血合剂联合骨髓腔输血给药治疗再生障碍性贫血的疗效及安全性.方法:2011年至2015年,陕西医大血液病研究院对收住的53例再生障碍性贫血(脾肾两虚证)患者应用生血合剂200 ml,口服,2/d;司坦唑醇2 mg,3/d;吗替麦考酚酯成人1.0g,2/d;骨髓腔输注:重组人红细胞生成素10000 U、重组人粒细胞刺激因子450μg、重组人白介素-11 4.5 mg、地塞米松注射液20 mg,骨髓腔注射,1周1次,共4次.治疗1月,观察血象和骨髓.出院后巩固治疗3-6个月,观察疗效,随访1年以上.结果:治疗1个月,基本治愈40例(75.47％)、缓解8例(15.09％);Hb、WBC及Plt与治疗前对比,均有显著好转(P＜0.01),有效率90.57％(48例);骨髓增生活跃者46例(86.79％),与治疗前9例(16.98％)相比,有好转(P＜0.05);治疗3-6个月,基本治愈40例(75.47％),缓解8例(15.09％),明显进步3例(5.66％)、无效2例(3.77％),基本治愈率和缓解率90.57％(48/53例),明显进步率5.66％,总有效率96.23(51/53例),治疗后检查无明显毒副作用.随访1年无复发.结论:生血合剂联合骨髓腔输血给药,是一种较好的治疗方法.

生血合剂联合rHuEPO治疗肾性贫血的临床观察

目的:观察生血合剂联合rHuEPO治疗血液透析患者肾性贫血的疗效.方法:采用生血合剂(主要由熟地、何首乌、黄芪、当归、鸡血藤、川芎、丹参等制成颗粒剂)配合rHuEPO治疗血液透析患者肾性贫血30例,并设立对照组30例,观测两组患者治疗前后的血常规(Hb,Hct)、肾功能(Scr、BUN)、血清白蛋白、中医临床证候等.结果:治疗组与对照组相比:Hct、白蛋白较治疗前明显升高,P＜0.01.Hb差异具有统计学意义(P＜0.05).治疗组与治疗前相比:Hb、Hct、白蛋白差异具有统计学意义(P＜0.01);Scr、BUN差异有统计学意义(P＜0.05).结论:生血合剂联合rHuEPO优于单纯使用rHuEPO治疗血液透析患者的肾性贫血,临床实施切实可行.

环孢霉素A联合雄激素及生血合剂治疗再生障碍性贫血25例临床观察

我院从1997年5月至2002年4月用环孢素A(CSA)联合雄激素及生血合剂治疗再生障碍性贫血(再障)25例,效果良好,报告如下.

生血合剂影响慢性再障患者外周血单个核细胞T-bet/GATA-3及相关信号分子、细胞因子表达的体外研究

目的:转录因子T-bet、GATA-3及相关信号通路在Th1、Th2分化平衡及免疫反应调节中发挥重要的作用,本研究拟从体外研究健脾补肾活血中药复方生血合剂对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者外周血单个核细胞(PBMNC) T-bet、GATA-3及相关信号分子、细胞因子表达的影响.方法:纳入CAA患者10例,男5例,女5例,年龄42～73岁,采集外周血前3天内未服用中药及环孢素.生血合剂制成无菌针剂(每毫升含2g生药),环孢菌素A(CsA)用无菌RPMI1640配制成浓度为1 mg/mL的溶液.分离培养患者外周血单个核细胞(PBMNC),加或不加药物培养72 h,分为空白对照组、大剂量生血合剂组(200 mg/mL)、小剂量生血合剂组(100 mg/mL)和环孢素组(400ng/mL),采用实时荧光定量PCR(Realtime FQ-PCR)检测培养后PBMNC转录因子T-bet、GATA-3及信号分子STAT4、STAT6 mRNA表达情况,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平.结果:CAA患者PBMNC体外培养后,空白对照组T-bet、STAT4、IFN-γ、IL-12表达均明显高于小剂量生血合剂组、大剂量生血合剂组和环孢素组(P＜0.05),小剂量生血合剂组T-bet、STAT4、IFN-γ、IL-12显著高于大剂量生血合剂组、环孢素组(P＜0.05),大剂量生血合剂组T-bet、STAT4、IFN-γ、IL-12与环孢素组之间没有显著性差异(P＞0.05)；各组GATA-3、STAT6、IL-4之间比较无明显差异(P＞0.05).结论:生血合剂能在体外下调CAA患者PBMNC T-bet、STAT4、IFN-γ、IL-12表达,并且呈现一定的剂量依赖性.

健脾补肾活血法联合小剂量雄激素治疗慢性再生障碍性贫血的临床观察

目的:观察以健脾补肾活血法为主联合小剂量雄性激素等组成的综合方案治疗慢性再生障碍性贫血的临床疗效.方法:将符合纳入标准的91例慢性再障患者随机分为治疗组61例和对照组30例,治疗组又分为脾肾阳虚型组(31例)服用生血Ⅰ号合剂,脾肾阴虚型组(30例)服用生血Ⅱ号合剂;对照组服用复方皂矾丸,所有患者均联合服用小剂量雄性激素.两组均施以对症及支持治疗,治疗3个月为1个疗程,连用2个疗程以上进行临床证候疗效评估较.结果:对中医临床证候改善,治疗组中医证候好转明显优于对照组(P＜0.05).治疗组和对照组依赖红细胞悬液患者月均输注量均较治疗前减少,两者无显著差异(P＜0.01),但治疗组依赖红细胞悬液患者比率减少较对照组明显(P＜0.05).依赖血小板悬液输注患者,治疗组减少率大于对照组(P＜0.05).治疗组感染发生率较对照组下降(P＜0.05).结论:健脾补肾活血法为主联合小剂量雄性激素等组成的综合方案治疗慢性再生障碍性贫血的临床疗效良好.

生血合剂对慢性再生障碍性贫血患者T细胞表型变化干预研究

目的 探讨中药生血合剂对慢性再生障碍性贫血(简称再障)患者外周血T细胞表型变化的干预作用.方法 将40例患者随机分为生血合剂(SXM)组和环孢菌素(CsA)组,各20例;另设正常组10例.用流式细胞仪检测正常组及患者治疗前后外周血T细胞表面抗原CD4+、CD8+、T细胞受体(αβTCR+、γδTCR+)表达水平.结果再障患者CD4+表达和CD4+/CD8+比值明显低于正常组(P＜0.01,P＜0.001),CD8+、γδTCR+表达明显高于正常组(P＜O.01,P＜0.001),αβTCR+表达与正常组无明显差异(P＞0.05).治疗后两组CD4+,、CD4+/CD8+比值均增高,CD8、γδTCR+下降(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),组间比较无显著差异(P＞0.05).结论 再障存在CD4+表达降低和CD8+、γδTCR+表达增高的细胞表型变化,生血合剂可干预上述T细胞介导的细胞免疫紊乱,具有与免疫抑制剂CsA相当的作用.

生血合剂治疗老年再生障碍性贫血的临床研究

为观察生血合剂治疗老年再生障碍性贫血(简称再障)的临床疗效,探讨疗效机理,62例患者随机分为治疗组(32例)和对照组(30例).治疗组中脾肾阳虚型用生血I号合剂、脾肾阴虚型用生血Ⅱ号合剂;对照组30例用康力龙.疗程3个月.结果:治疗组基本治愈6例、缓解9例、明显进步12例、无效5例,总有效率84.38%,治愈缓解46.88%,明显优于对照组(P＜0.05),且未见肝损等不良反应.治疗组患者症状改善,外周血象明显升高,T淋巴细胞亚群比例趋向正常,自然杀伤细胞活性(NKa)增加,白介素-2(IL-2)产生减少,骨髓增生程度明显好转,均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).提示生血合剂治疗老年再障疗效良好,安全无毒,其疗效机制可能是通过调整免疫,改善骨髓微环境,促进造血功能的恢复来实现的.

生血合剂及其拆方对免疫介导再生障碍性贫血小鼠作用的实验研究

建立免疫介导再障小鼠模型,观察生血合剂及其拆方对再障模型小鼠的作用.结果:生血合剂能降低再障小鼠死亡率,增加外周血象、骨髓有核细胞;增高Th(CD4)百分值、Th/Ts(CD4/CD8)比值、IL-3、sIL-2R;降低Ts(CD8)、IL2、IFN-γ水平和脾细胞IFN-γ基因表达;生血Ⅰ号的作用优于生血Ⅱ号和CsA;单用健脾、补肾、活血方药对上述指标均有不同程度的作用,其中温肾药优于滋肾药和活血药;活血药优于健脾药.

生血合剂治疗慢性再生障碍性贫血15例临床观察

慢性再生障碍性贫血(CAA)是骨髓造血功能衰竭导致全血细胞减少的血液系统常见疾病,严重危害人类尤其是青壮年患者的身体健康,目前尚无理想的治疗方法.中医药治疗CAA具有经济有效、毒副作用小等优点,是目前临床治疗CAA的重要手段之一.我们根据"久病必虚"、"虚久必瘀"的中医理论,采用健脾补肾活血的生血合剂治疗CAA15例,并从细胞因子角度对生血合剂的疗效机制进行了探讨.

高效液相色谱法测定生血合剂中黄芩苷的含量

目的建立测定生血合剂中黄芩苷的HPLC测定方法.方法黄芩苷测定以kromasil ODS C18(4.6mm×200mm,5μm)为固定相,甲醇-水-磷酸(53:47:0.2,V/V/V)为流动相,UV检测波长为280nm.结果黄芩苷在0.20～1.80μm范围内与峰面积呈直线关系.回归方程为:Y=251481.75X-6859.95,r=0.9999,平均回收率为99.66%,RSD=1.14%.结论本法测定生血合剂中黄芩苷的含量简便、准确、快捷,可用于生血合剂的质量控制.

健脾补肾活血法联合小剂量安雄治疗慢性再障的疗效及生存质量观察

目的:观察健脾补肾活血法为主联合小剂量安雄治疗慢性再障的疗效.方法:135例患者随机分为治疗组和对照组,治疗组服用生血合剂,对照组服用复方皂矾丸,两组均服用小剂量安雄.3个月为1疗程,2个疗程以上行临床疗效评估及生存质量分析.结果:治疗组总有效率78.89％;对照组总有效率64.44％,两组比较率差异具有统计学意义(P＜0.01).治疗组中医证候改善优于对照组(P＜0.05),出血情况及感染发生率均低于对照组(P＜0.05),生存质量高于对照组(P＜0.01).结论:健脾补肾活血法为主综合方案治疗慢性再障临床疗效良好.

生血合剂联合小剂量雄激素治疗慢性再生障碍性贫血的临床研究

目的:观察生血合剂联合小剂量雄性激素治疗慢性再生障碍性贫血的临床疗效.方法:将慢性再生障碍性贫血患者91例随机分为治疗组61例和对照组30例,所有患者在服用小剂量雄性激素治疗的基础上,治疗组中脾肾阳虚型亚组(31例)联合服用生血Ⅰ号合剂,脾肾阴虚型亚组(30例)联合服用生血Ⅱ号合剂;对照组联合服用复方皂矾丸.3个月为1个疗程,连用2个疗程后进行临床疗效评估.结果:与对照组比较,治疗组总有效率提高(P＜0.01).对照组治疗后外周血细胞计数仅Hb、PLT较治疗前明显升高(P＜ 0.01);而治疗组WBC、Hb、PLT、ANC计数均较治疗前明显升高(P＜0.05).治疗组出血分级减轻优于对照组(P＜0.01);痤疮、毛发增多、发音变粗、消化道反应等不良反应发生率明显少于对照组(P＜0.05).结论:具有健脾补肾活血作用的生血合剂联合小剂量雄性激素治疗慢性再生障碍性贫血临床疗效优于复方皂矾丸联合小剂量雄激素.