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红芪多糖干预内毒素诱导的葡萄膜炎模型中糖原合成酶3-β的表达及其作用机制
目的 通过观察红芪多糖(radix hedysari polysaccharide,HPS)和氯化锂(LiCl)对霍乱弧菌内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的葡萄膜炎的抗炎作用,探讨糖原合成酶3-β(glycogen synthase kinase 3-β,GSK3-β)在葡萄膜炎中的作用机制.方法 200只Wistar大鼠随机分为4组(n=50):空白对照组(negative control,NC)组、LPS诱导的葡萄膜炎组(LPS组)、HPS治疗组(LPS+ HPS组)和LiCl治疗组(LPS+ LiCl组).LPS+ HPS组腹腔注射400 mg·kg-1 HPS,LPS+ LiCI组腹腔注射0.5 mol·L-1的LiCl 100 μL,对照组和LPS组注射等量PBS.2h后,LPS组、LPS+ HPS组和LPS+ LiCl组每只大鼠足底注射0.1 mL LPS注射液,NC组注射等体积的PBS.应用临床评分、裂隙灯照相、HE染色等检查评价炎性反应程度;Western blot和RT-PCR检测虹膜睫状体GSK3-β和核因子-κB(neuclear factor-κB,NF-κB) p65表达水平;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠前房房水中肿瘤坏死因子0(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)等细胞因子的水平.结果 LPS注射后6h、12 h、24 h、48 hLPS组的炎症评分分别为(2.3士0.2)分、(3.6±0.7)分、(3.9±0.3)分、(3.2±0.4)分,显著高于其他三组(均为P＜0.05),而LPS +HPS组、HPS+ LiCl组和NC组之间差异均无统计学意义(均为P＞0.05),HPS或LiCl预处理对LPS诱导的大鼠葡萄膜炎产生了抗炎效果.经过HPS或LiCl处理,LPs诱导的葡萄膜炎大鼠虹膜睫状体磷酸化GSK3-β水平上调,NF-κB p65表达明显被抑制,前房房水中抗炎因子IL-10水平上调,而TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症细胞因子受到抑制.结论 HPS或LiCl预处理可以抑制LPS诱导的大鼠葡萄膜炎炎性反应,这一抗炎作用与GSK3-β的抑制性磷酸化密切相关.
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红芪多糖3作用小鼠胸腺组织蛋白双向电泳技术的建立
目的 建立和优化红芪多糖3(HPS 3)作用后小鼠胸腺组织蛋白质组双向电泳技术方法.方法 采用标准裂解法提取HPS-3 100 mg/(kg·d)灌胃14 d小鼠的胸腺组织总蛋白,后续进行三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法和去脂蛋白纯化法获取胸腺组织蛋白,以固相pH梯度胶条进行双向凝胶电泳,并对等电聚焦程序进行改良和优化,同时将去脂蛋白纯化法运用于A549细胞蛋白的纯化并进行双向电泳,银染色后进行凝胶图像比较.结果 去脂蛋白纯化法不仅能减少蛋白降解,而且增加蛋白的溶解性,因此去脂蛋白纯化法所得蛋白的双向电泳图谱显示更好的溶解性和重复性,此外在双向凝胶电泳(2 - DE)时,聚焦电压在传统聚焦条件上进行优化,使横向和纵向拖尾有明显改善,成功建立了背景清晰,蛋白分离良好、分辨率较高的胸腺组织蛋白的双向电泳体系.去脂蛋白纯化法同样适用于A549细胞蛋白提取纯化.结论建立了HPS -3作用后小鼠胸腺组织蛋白质组提取纯化的方法,采用去脂蛋白纯化法可以更有效地提取胸腺组织蛋白.利用优化后的实验方法,获得了HPS 3作用后小鼠胸腺组织蛋白2- DE图谱,为后续研究打下基础.
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红芪多糖超声法提取工艺的正交实验优选研究
目的 优选超声波法提取红芪多糖的工艺条件,为红芪多糖的进一步开发研究提供理论依据.方法 采用正交实验法对红芪多糖的提取工艺进行研究.结果 佳工艺为超声温度80℃,超声时间30 rin,超声功率128 W,料液比1:30..结论 此方法是一种简单、快捷、高效的提取方法.
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红芪多糖调控磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶信号通路抑制结肠癌细胞增殖及促进凋亡的机制
目的 探讨红芪多糖调控磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路抑制结肠癌细胞增殖及促进凋亡的机制.方法 25、50、100、200、400mg/L的红芪多糖干预人结肠癌SW480细胞24、48、72h,细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖,计算半数抑制浓度(IC50)值;190mg/L的红芪多糖干预SW480细胞48h,不加药物的作为对照组,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blot检测细胞核增殖抗原(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、β-连环蛋白(β-catenin)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、PI3K、Akt、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-Akt)蛋白表达.结果 不同浓度的红芪多糖处理HepG2细胞24、48、72h 后细胞抑制率均受到不同程度的抑制,且对细胞的抑制作用随着时间的延长逐渐增强,与对照组[48h(1.18±0.42)%]比较差异均有统计学意义(48h:t25mg/L=6.002,P25mg/L=0.007;t50mg/L=7.452,P50mg/L=0.005;t100mg/L=8.236,P100mg/L=0.003;t200mg/L=9.113,P200mg/L=0.002;t400mg/L=10.221,P400mg/L=0.001).结论 红芪多糖可抑制结肠癌细胞增殖及促进细胞凋亡,其机制与PI3K/Akt信号通路的调控有关.
关键词： 红芪多糖 磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶信号通路 结肠癌 增殖 凋亡 -
红芪多糖对脂多糖诱导的牙周膜细胞凋亡及对Wnt信号通路的影响
目的:探讨红芪多糖对脂多糖(LPS)诱导的牙周膜细胞凋亡及对Wnt信号通路的影响.方法:体外分离培养人牙周膜细胞.实验分为3组,依次为对照组、脂多糖组和红芪多糖组.对照组细胞用正常的细胞培养液培养细胞;脂多糖组和红芪多糖组细胞用含有脂多糖浓度为10 mg/L的培养液培养细胞;红芪多糖组细胞培养液中加入红芪多糖终浓度为10 mg/L的培养液.流式细胞仪检测细胞凋亡情况,探针法检测细胞内的活性氧(ROS)水平.试剂盒检测细胞中碱性磷酸酶活性和分泌的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.Western blot检测细胞中c-myc、β-连环蛋白(β-catenin)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)单克隆抗体、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白水平.结果:脂多糖组细胞存活率明显低于对照组(P＜0.01).脂多糖组细胞凋亡率和Bax水平、ROS水平明显高于对照组(P＜0.01).红芪多糖组细胞凋亡率和Bax水平、ROS水平明显低于脂多糖组(P＜0.01).脂多糖组细胞Bcl-2、c-myc、β-catenin水平和碱性磷酸酶活性明显低于对照组(P＜0.01).红芪多糖组细胞Bcl-2、c-mye、β-catenin水平和碱性磷酸酶活性明显高于脂多糖组(P＜0.01).脂多糖组细胞分泌的TNF-α水平明显高于对照组(P＜0.01).红芪多糖组细胞分泌的TNF-α水平明显低于脂多糖组(P＜0.01).结论:红芪多糖能够抑制脂多糖诱导的人牙周膜细胞凋亡,抑制细胞分泌TNF-α,作用机制可与Wnt信号通路、ROS水平有关.
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红芪多糖对人牙周膜细胞增殖及分泌IL－1β、IL－6的影响
目的：研究红芪多糖（HPS）对人牙周膜细胞（hPDLCs）增殖及分泌IL－1β、IL－6的影响。方法：采用改良组织块酶消化法培养人牙周膜细胞，经免疫组化SP法进行鉴定，MTT法检测细胞增殖情况，荧光实时定量PCR和酶联免疫法检测红芪多糖对LPS作用的hPDLCs分泌IL－1β、IL－6的影响。结果：10μg／mL HPS能够促进人牙周膜细胞增殖（P＜0．05）；10μg／mL LPS可显著刺激人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6（P＜0．01），而给予10μg／mL HPS能抑制LPS刺激人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6，且与LPS组具有显著性差异（P＜0．01）。结论：适宜浓度的红芪多糖能够促进体外培养的人牙周膜细胞增殖，并抑制LPS作用的人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6。
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红芪多糖对S180瘤细胞化疗协同增效作用的蛋白质组学分析
目的:分析红芪多糖(Radix Hedysari polysaccharides,HPS)对S180瘤细胞化疗协同增效作用的差异蛋白质.方法:以环磷酰胺(Cyclophsphamide,Cy)和HPS联合Cy治疗荷瘤小鼠后提取瘤细胞总蛋白,用双向电泳对蛋白质进行分离,使用PDQuest 8.0软件对双向电泳图谱进行差异分析,通过质谱技术鉴定差异明显的蛋白点,并用蛋白免疫印迹方法对其中1个蛋白质进行验证.结果:HPS联合Cy组中有24个蛋白点发生明显改变,经质谱和Mascot软件分析,成功鉴定了 5个蛋白质,分别为热休克蛋白84(HSP90β)、载脂蛋白A、白蛋白、热休克蛋白β1(HSP27)、未命名蛋白,其中1个高表达,4个低表达.蛋白印迹验证与蛋白质组结果一致.结论:通过蛋白质组学技术,发现了HPS对S180小鼠瘤细胞化疗增效作用的靶标蛋白,这些蛋白质涉及能量代谢、氧化应激反应和凋亡信号转导.
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红芪多糖诱导人肝癌HEP-G2细胞凋亡的作用机制研究
0 μg/mL红芪多糖作用72 h,可以观察到G0前期的亚二倍体DNA 峰,但对G0/G1期细胞比例和S期细胞比例无明显影响,而G2/M期细胞比例显著升高(P＜0.05);Bc1-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白表达水平提高.结论:红芪多糖可通过抑制人肝癌HEP-G2细胞的生长增殖、G2/M期阻滞、诱导细胞凋亡、降低bcl-2蛋白、提高Bax蛋白表达等作用机制发挥抗肿瘤作用.
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红芪多糖用于阿尔茨海默病的探讨
通过查阅红芪的相关药理作用研究,红芪多糖对阿尔茨海默病细胞模型存活率下降具有良好的保护作用,红芪多糖作用于微血管内皮细胞氧化损伤模型后,能够使多种蛋白表达量明显增加,从而可能对阿尔茨海默病患者有一定治疗意义.
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红芪多糖的提取分离及药理作用研究进展
目的:为红芪多糖的深入研究及进一步开发利用提供参考.方法:以"红芪多糖""提取分离""药理作用""HPS""Radix hedysari polysaccharide""Hedysarum polybotys saccharide"等为关键词,组合查询2005年1月-2016年6月在PubMed、中国知网、万方、维普等数据库中的相关文献,对红芪多糖的提取分离、含量测定方法、抗氧化活性及其药理作用进行综述.结果:共检索到相关文献161篇,其中有效文献46篇.目前,红芪多糖的提取仍以传统水提醇沉为主,多由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖5种单糖组成.红芪多糖的含量测定方法以苯酚-硫酸比色法为主,除此之外还有高效液相色谱法.研究表明,红芪多糖具有抗氧化活性和抗肿瘤、抗癌、提高机体免疫力、抗糖尿病等多种药理作用.结论:红芪多糖的提取分离、含量测定方法及其药理活性研究已取得了一定进展,但目前仍停留在实验研究阶段,未来应进一步加强其工业化提取和制剂生产的相关研究.
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红芪多糖对氧化低密度脂蛋白诱导人脑微血管内皮细胞氧化损伤模型保护作用机制分析
目的:首先建立氧化低密度脂蛋白诱导的人脑微血管内皮细胞氧化损伤模型,然后分析红芪多糖对该模型的保护作用机制.方法:运用氧化低密度脂蛋白(规格为50μg/ml)诱导人脑微血管内皮细胞氧化损伤模型,运用红芪中的红芪多糖对该氧化损伤模型进行处理,然后采用MTT法测红芪多糖对该模型的保护作用,在显微镜下分别检测各个组别的人脑微血管内皮细胞的形态学变化.用红芪多糖(20μg/nl)来干预人脑微血管内皮细胞氧化损伤模型(时间为一天即24小时),然后提取纯化细胞总蛋白(使用细胞裂解液),凝胶电泳分离纯化后的细胞蛋白,染色后扫描凝胶得蛋白图谱.随机分为对照组(20例)、50μg/ml氧化低密度脂蛋白模型组(20例)和红芪多糖药物干预的试验组(20例),提取每组的人脑微血管内皮细胞总蛋白,得到蛋白图谱.分析各个组间的差异蛋白点,用MS技术鉴定并且定位差异明显的蛋白点.结果:红芪多糖药物干预试验组细胞的存活率、细胞数目、细胞形态比人脑微血管内皮细胞氧化损伤模型组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05);对纯化分离后的人脑微血管内皮细胞蛋白,建立了人脑微血管内皮细胞蛋白双向电泳,获得蛋白图谱;所得蛋白图谱通过软件分析得到红芪多糖药物干预试验组人脑微血管内皮细胞蛋白表达谱与模型组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05);分析得出两组有差异蛋白点有11个,采用MS技术鉴定得到7个差异蛋白质,经鉴定后指认这差异蛋白质分别为热休克蛋白70、谷胱甘肽合成酶、网腔钙结合蛋白、40S核糖体蛋白和78kDa葡萄糖调节蛋白,其中5个蛋白上调,2个蛋白下调.结论:红芪多糖对氧化低密度脂蛋白诱导的人脑微血管内皮细胞氧化损伤模型具有明显保护作用,作用机制可能主要是红芪多糖的抗氧化应激、清除自由基、抑制细胞凋亡以及调节内质网应激的作用机制.
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红芪多糖对链脲佐菌素诱导糖尿病模型大鼠视网膜VEGF与PEDF及CRP水平影响研究
目的:探讨红芪多糖(Hedysarum Polybotys sacce,HPS)对链脲佐菌素(Streptozotoein,STZ)诱导的糖尿病模型大鼠视网膜血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、色素上皮细胞衍生因子(Pigment epithlium-derived facto,PEDF)和血清C-反应蛋白(C-reactiveProtein,CRP)水平的影响及视网膜组织病理学的改变,并对红芪多糖的作用机制进行研究.方法:选取150只健康大鼠,按照随机数字表法分为实验组和对照组,对照组的25只大鼠给予柠檬酸缓冲液腹腔注射,实验组的125只大鼠给予链脲佐菌素腹腔注射.实验组动物模型制备成功后平均分为HPS低剂量组、HPS中剂量组、HPS高剂量组、空白组、多贝斯组,HPS组的大鼠分别给予50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg浓度的HPS灌胃,空白组与对照组给予等体积的生理盐水灌胃,多贝斯组给予90mg/kg的多贝斯灌胃,1次/天,连续灌胃8周.后一次灌胃结束后,取大鼠的血清进行CRP含量检测,同时摘取大鼠的眼球置于甲醛溶液中固定,然后剥取视网膜进行病理切片观察,并检测视网膜组织中VEGF、PEDF的水平.结果:血清CRP检测结果:与对照组相比,空白组大鼠血清CRP含量升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);与空白组比较,HPS组和多贝斯组血清CRP含量均降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);与多贝斯组比较,高、中、低浓度HPS组大鼠血清CRP含量降低均有统计学意义(P＜0.05);病理切片观察结果:与空白组比较,HPS各组大鼠视网膜受损程度均降低;与多贝斯组比较,HPS高剂量组大鼠的视网膜增厚程度明显,每一层的细胞排列较整齐.VEGF、PEDF检测结果:与对照组比较,空白组视网膜组织中VEGF水平升高,PEDF含量降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);与空白组比较,HPS各剂量组和多贝斯组VEGF水平降低,PEDF含量升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:红芪多糖能够降低大鼠血清CRP含量,使视网膜组织中VEGF水平降低,PEDF含量升高,遏制视网膜新血管的产生而起到保护视网膜的作用.
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红芪多糖对老年性痴呆细胞模型损伤保护作用的差异蛋白质研究
目的:研究红芪多糖对Aβ1-42诱导的AD细胞模型保护作用及差异蛋白质的影响.方法:采用Aβ1-42建立AD细胞模型,HRP作用48h后,收集细胞,提取细胞总蛋白.采用双向电泳方法建立SH-SY5Y细胞的蛋白表达谱,银染后扫描凝胶获得蛋白图谱.使用PD Quest软件分析找出模型组和HRP处理组间的差异蛋白点,计算差异蛋白的等电点和理论分子量,对差异明显的蛋白点进行质谱鉴定.采用生物信息学方法对鉴定成功的蛋白质进行蛋白-蛋白相互作用网络分析.结果:建立了SH-SY5Y神经细胞的双向电泳蛋白表达谱.差异分析结果显示,模型组与HRP处理组间有22个差异蛋白点.应用质谱方法成功鉴定了4个差异蛋白质,分别为胆碱激酶a、Rag调节蛋白复合体LAMTOR1、转录因子蛋白AP-2-δ和铁蛋白,且Rag调节蛋白复合体LAMTOR1与铁蛋白存在相互作用关系.结论:红芪多糖对AD细胞模型的保护作用与其能够调节胆碱激酶a、Rag调节蛋白复合体LAM-TOR1、转录因子蛋白AP-2-delta和铁蛋白的表达密切相关.
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红芪多糖对早期糖尿病肾病db/db小鼠肾组织中MMP-2及TIMP-1 mRNA和蛋白表达的影响
目的:通过研究红芪多糖对早期糖尿病肾病(DN) db/db小鼠肾组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)及基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)表达的影响,探讨HPS延缓早期DN进展的作用机制.方法:50只SPF级雄性db/db糖尿病肾病模型小鼠用随机数字表法分为5组:红芪多糖200、100、50 mg/kg剂量组、替米沙坦组(5 mg/kg)和模型组(等体积0.9％),每组10只;10只雄性db/m小鼠,作为正常对照组,给予等体积0.9％ NS灌胃.所有小鼠在6周龄开始进入实验,连续灌胃8周,于治疗前及治疗后每2周检测血糖浓度,第4周末及第8周末收集小鼠24h尿液,ELISA法检测24h尿微量白蛋白水平.第8周末框后静脉取血,血清用于检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN).处死小鼠,剥离肾脏,左肾皮质用于RT-PCR、Westernblotting检测肾组织MMP-2及TIMP-1 mRNA和蛋白的表达量.结果:与正常组比较,模型组小鼠血糖、血脂、Scr、BUN和24h尿微量白蛋白水平显著升高;MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平显著下降,TIMP-1mRNA和蛋白的表达水平明显升高.与模型组比较,各治疗组血糖数值均有所下降,但无统计学意义;除红芪多糖50mg/kg剂量组外,其余各治疗组小鼠血脂、Scr、BUN和24h尿微量白蛋白水平均明显下降;MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平明显升高,TIMP-1 mRNA和蛋白的表达水平明显降低,以红芪多糖100mg/kg剂量组疗效为明显.结论:红芪多糖能够防治db/db小鼠早期DN,其机制可能与红芪多糖抑制TIMP-1并上调MMP-2 mRNA和蛋白在肾脏的表达水平有关.
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红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病心肌组织TGF-β1与Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
目的:通过研究红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病心肌组织中TGF-β1与Collagen Ⅰ表达的影响,探讨其对db/db小鼠心肌纤维化的作用.方法:将60只6周龄雄性db/db小鼠随机分为5纽:模型组、红芪多糖200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg剂量组和罗格列酮4mg/kg组;正常组为12只同周龄同背景的非转基因雄性db/m小鼠.连续灌胃干预8周,于给药前及给药后第2、4、6、8周末检测各组小鼠空腹血糖及体重;Masson染色观察小鼠左心室心肌胶原纤维化程度;Western blot、RT-PCR法检测心肌组织TGF-β1与Collagen Ⅰ的蛋白和mRNA表达.结果:干预治疗8周后,红芪多糖200mg/kg、100mg/kg剂量组和罗格列酮4mg/kg组血糖较模型组明显下降;Masson染色可见亮绿色胶原纤维在模型组心肌细胞间及血管周围较正常组明显增多且呈堆积状分布;模型组TGF-β1与Collagen Ⅰ蛋白及mRNA表达水平与红芪多糖50mg/kg剂量组无显著差异,其余各治疗组较模型组明显降低,其中红芪多糖200mg/kg剂量组和罗格列酮4mg/kg组改善更明显.结论:红芪多糖对db/db小鼠心肌纤维化具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制TGF-β1的异常表达而降低Collagen Ⅰ降解实现的.
关键词： 红芪多糖 糖尿病心肌病 TGF-β1 collagen Ⅰ db/db小鼠 -
红芪多糖对脑微血管内皮细胞氧化损伤保护作用的差异蛋白质研究
目的:研究红芪多糖(Hedysari Radix polysaccharides,HRP)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞(Human bain microvascular endothelial cells,HBMEC)氧化损伤模型的保护作用及对其蛋白表达谱的影响.方法:采用50 μg/ml ox-LDL建立HBMEC氧化损伤模型,使用红芪多糖对细胞模型进行干预,药物作用24h后,采用MTT检测细胞存活率,倒置相差显微镜观察细胞形态.以40 μg/ml的红芪多糖干预HBMEC氧化损伤模型24h后,使用细胞裂解液提取细胞总蛋白并纯化.应用双向凝胶电泳分离纯化后的细胞总蛋白,考马斯亮蓝染色后扫描细胞总蛋白图谱,使用PD Quest 8.0软件分析药物组与模型组间的差异蛋白点,应用质谱技术鉴定差异明显的蛋白点.结果:与氧化损伤模型组比较,红芪多糖组(40μg/ml)细胞存活率明显升高,细胞数目明显增多,细胞形态较模型组明显改善.红芪多糖组(40 μg/ml) HBMEC细胞蛋白表达谱发生明显改变,分析得出11个差异蛋白点,采用质谱方法成功鉴定了7个差异蛋白质,分别为热休克蛋白70、谷胱甘肽合成酶、网腔钙结合蛋白、26S蛋白酶调节亚基、γ-烯醇酶、40S核糖体蛋白和78kDa葡萄糖调节蛋白,其中5个蛋白高表达,2个蛋白低表达.结论:红芪多糖对ox-LDL诱导的HB-MEC氧化损伤模型具有明显保护作用,其机制与调节内质网应激及能量代谢、清除自由基、抑制细胞凋亡及抗氧化应激密切相关.
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红芪多糖对人肺腺癌A549细胞蛋白表达图谱影响的研究
目的:研究红芪多糖(Hedysari Radix polysaccharide,HRP)对人肺腺癌A549细胞蛋白双向电泳图谱的影响.方法:以300μg／ml红芪多糖体外作用于A549细胞后提取细胞总蛋白,使用丙酮沉淀法和2-DE Cleanup Kit对蛋白进行纯化.采用双向凝胶电泳分离纯化后的细胞总蛋白,银染显色并扫描凝胶图片,使用PDQuest 8.0图像分析软件对不同处理组双向凝胶电泳图谱进行对比分析,筛选出差异蛋白点,并分析差异蛋白的理论等电点和分子量.结果:应用双向电泳方法建立了A549细胞分辨率较高和重复性较好的蛋白表达图谱.红芪多糖处理可使A549细胞2-DE图谱中35个蛋白点发生明显变化,其中24个表达上调,8个表达下调,3个仅在对照组中表达,并分析得出了35个蛋白点的理论等电点和分子量.结论:红芪多糖可使人肺腺癌蛋白表达图谱发生明显改变,应用蛋白质组学筛选出的35差异蛋白点可能是红芪多糖抑制人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的关键调控蛋白质.
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红芪多糖对S180细胞体内化疗增效作用的差异蛋白质研究
目的:研究红芪多糖对S180瘤细胞化疗协同增效作用的差异蛋白质.方法:以环磷酰胺和红芪多糖联合环磷酰胺治疗S180荷瘤小鼠14天后测定小鼠免疫器官指数及抑瘤率,利用双向电泳分离提取的瘤细胞总蛋白,考染显色后应用PDQuest8.0软件分析电泳图谱,找出差异表达的蛋白质.结果:与环磷酰胺(20 mg/kg)组相比,红芪多糖(200 mg/kg)联合环磷酰胺(20 mg/kg)可明显抑制小鼠S180瘤生长(P＜0.05),显著减轻环磷酰胺所致免疫器官指数的下降(P＜0.01)；建立了背景清晰、重复性好、分辨率高的S180瘤细胞双向电泳图谱,环磷酰胺组与红芪多糖联合环磷酰胺组蛋白质点数分别为:776±22和721±16；平均匹配率分别为:91.13％和89.37％.比较分析环磷酰胺组与红芪多糖联合环磷酰胺组双向电泳图谱,筛选出差异明显的蛋白质点28个,其中8个表达上调,19个表达下调,1个仅在环磷酰胺组表达.结论:红芪多糖联合环磷酰胺可减轻其对S180荷瘤小鼠的免疫抑制作用,增强环磷酰胺对S180瘤细胞的化疗效果,其作用可能与筛选出的28个差异蛋白质点有关,对这些差异蛋白质点的鉴定将为揭示红芪多糖的化疗协同增效作用提供实验依据.
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红芪多糖3促进小鼠胸腺细胞增殖的差异蛋白质点分析
目的:寻找红芪多糖3( HPS-3)作用后小鼠胸腺组织差异表达的蛋白质点,探讨HPS-3提高免疫力的分子生物学水平机制.方法:正常小鼠给予不同剂量的HPS-3,测定胸腺、脾脏指数及T淋巴细胞增殖能力,并运用双向凝胶电泳技术对胸腺组织蛋白进行分离,银染显色、Image Scanner获取凝胶图谱后,通过PD Quest软件对其进行分析、寻找差异蛋白质点.结果:HPS-3 (50mg/kg)对小鼠胸腺指数、脾脏指数及T淋巴细胞增殖能力无显著影响,而100 mg/kg HPS-3能显著增加小鼠胸腺、脾脏指数,增强T淋巴细胞增殖反应.实验所得2-DE图谱经PD Quest软件分析得出以下结果:空白组分离得到1129个蛋白点,HPS-3组得到1167个蛋白质点,仅在空白组出现的蛋白质点有316个,仅在HPS-3组出现的蛋白点有354个,两组共有的蛋白点中表达量差异两倍以上的有192个.结论:HPS-3能促进胸腺细胞增殖,显著影响小鼠胸腺细胞蛋白质表达.
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不同红芪多糖抗肿瘤和免疫调节作用研究
目的:观察不同单体红芪多糖(HPS)的抗肿瘤和免疫调节作用.方法:不同HPS作用于S180荷瘤小鼠,观察其生存质量,计算抑瘤率和胸、脾指数.测定脾淋巴细胞转化功能、NK细胞和LAK细胞活性及红细胞天然免疫活性.结果:不同HPS均可提高荷瘤小鼠生存质量,抑制肿瘤生长,增强淋巴细胞转化功能、NK细胞和LAK细胞活性.改善红细胞天然免疫功能,但以HPS-3的作用佳.结论:HPS-3具有一定的抑制肿瘤生长和改善荷瘤机体免疫状态作用.
