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061固相细胞计数法--一种快速检测单细胞细菌的食品微生物新检测方法
固相细胞计数(SPC)是一项新技术,可在单细胞水平快速检测细菌而不需要生长相.滤过样品后,存留的微生物在滤膜上进行荧光标记,采用激光扫描设备自动计数.每个荧光点可直观地由通过计算机驱动的流动台连接到ChemScan上的落射荧光显微镜来检测.根据所使用的荧光标记,在几小时内可获得有关微生物特性及生理状态的信息.尽管SPC初建议用于测定水中及其他液体样品中活细菌总数,但如果可以从不能滤过的基质中分离出细菌,它将是检测及计数食物样品中细菌的有效技术.尤其对于生长缓慢的微生物,检测用时短使该方法明显优于传统平板计数法.本文讨论了SPC的基本原理以及检测副结核分枝杆菌(My-cobacterium paratuberculosis)的可能性,后者是牛奶中生长缓慢的细菌的代表菌.
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牛乳中副结核分枝杆菌套式PCR检测方法的建立
目的 建立牛乳中副结核分枝杆菌套式PCR检测方法,以便快速检测牛奶中副结核分枝杆菌 方法 在制备的液体培养基中培养副结核分枝杆菌T、P18、P10,提取基因组DNA,应用DNAstar引物设计软件,根据副结核分枝杆菌独特的稳定性插入片段IS900设计内、外引物,建立检测牛乳中副结核分枝杆菌的套式PCR方法,并对该法的敏感性、特异性进行验证.结果 用所建立的方法已成功扩增出目的基因,大小与预期一致；该法的敏感性为102个细菌/ml,特异性试验结果显示,除含副结核分枝杆菌的乳样为阳性外,含其他细菌的乳样均为阴性,表明本方法特异性强.结论 已成功建立套式PCR检测方法,可用于牛乳中副结核分枝杆菌的检测.
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73例克罗恩病与副结核分枝杆菌感染的相关性研究
目的 明确中国CD患者与副结核分枝杆菌(MAP)的相关性.方法 收集73例回结肠型CD患者及40名健康对照者的外周血,分离单核细胞层进行MAP的培养,每隔2周肉眼观察培养管中的菌落生长情况,共培养16周.培养结束后通过巢式PCR检测培养管中特异的MAP DNA(IS900).计量资料采用方差分析,计数资料采用卡方检验.结果 经过16周的培养,113管分枝杆菌生长指示管中均未发现MAP菌落.所有CD患者和健康对照者外周血中均未检测到IS900.结论 MAP可能与我国回结肠型CD的发病没有相关性.
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检测克罗恩病肠组织中副结核分枝杆菌DNA发现的新序列
克罗恩病(CD)目前病因未明,与副结核分枝杆菌(Mycobacterium paratuberculosis,MP)的关系一直是研究的热点.本研究旨在通过采用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)TaqMan技术检测CD与肠结核(intestinal tuberculosis,ITB)患者肠道病变组织MP,探索CD病原学诊断的试验方法,为ITB和CD的鉴别诊断提供实验依据.
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克罗恩病肠粘膜匀浆和副结核杆菌接种地鼠的对比研究
克罗恩病(Crohn's Disease,CD)是一种病因未明的胃肠道慢性炎性肉芽肿疾病.早期研究发现,其病理改变与Johne's病相似,怀疑副结核分枝杆菌(Mycobacterium Paratu-berculosis,MP)为其致病菌[1].
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病原菌耐药信号传导机制及多抗原肽疫苗研究进展与发展趋势
细菌耐药性是当前人类面临的重大医学问题之一.接种疫苗是预防各种传染病为经济和有效的措施,也是预防和控制耐药性病原菌感染相关传染病的有效途径 文中介绍了病原菌耐药相关信号传导机制及新型多抗原肽疫苗研究进展,并分析了其发展趋势,以供相关领域研究者参考.
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唐山市人群结核分枝杆菌基因型分析
目的 初步探讨唐山市结核分枝杆菌基因型特征.方法 选取结核分枝杆菌基因组中的10个数目可变串联重复序列(variable number of tandem repeats,VNTRs)位点,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、琼脂糖凝胶电泳技术和BioNumerics(Version 3.0)软件,对从2012年唐山市结核病医院确诊的肺结核患者痰液中分离培养获得的结核分枝杆菌进行基因分型.结果 125株结核分枝杆菌具有明显的多态性,共分成5个不同的基因群,大的一个群包含87株,占69.6％,其他型别呈散在分布.结论 唐山市结核分枝杆菌的基因型具有明显的多态性,且具有成簇性分布的特点.
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四种重要致病性分枝杆菌DHPLC检测鉴别方法的建立
目的 运用多重核酸扩增(PCR)联合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography, DHPLC)分析技术原理,针对结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、禽分枝杆菌以及副结核分枝杆菌建立多重PCR-DHPLC快速检测方法,实现同时检测鉴别四种重要致病性分枝杆菌.方法 根据四种分枝杆菌特异基因序列分别设计菌种特异核酸扩增引物,通过筛选优化试验建立四重核酸扩增体系,对核酸扩增产物采用DHPLC设备进行检测分析,每一菌种的核酸扩增产物分别形成DHPLC特征峰图.对结核分枝杆菌等51株分枝杆菌标准株和分离株样品以及沙门氏菌等22株常见微生物样品进行特异性检测试验;对四种分枝杆菌特异的核酸扩增产物分别制备克隆质粒,通过对梯度稀释的阳性质粒的检测试验,进行多重PCR-DHPLC灵敏度测试;对疑似病人痰液样品和疑似发病牛的组织样品进行检测,并与细菌分离培养法进行比较以验证临床检测效果. 结果该方法能快速检测鉴别上述四种分枝杆菌,检测灵敏度达到10~2～10~3基因拷贝,从131份疑似病人临床样品中检出91份结核分枝杆菌阳性,从40份来自疑似发病牛群的临床样品中检出31份牛分枝杆菌阳性,检出率均高于细菌分离培养法.结论 研究表明所建立的多重PCR-DHPLC方法能快速检测鉴别四种重要致病性分枝杆菌,为人畜结核、副结核病诊断提供一种新型分子生物学技术手段.
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副结核分枝杆菌SOD基因在大肠杆菌中的表达
目的 构建副结核分枝杆菌SOD基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得表达.方法 以BamH I和EcoR I双酶切pGEM-T-SOD和pET-28a(+),并将纯化的SOD基因亚克隆至pET-28a(+)中,构建原核表达质粒pET-28a-SOD,并将其转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western bloting分析.结果 成功地构建出原核表达质粒pET-28a-SOD,并表达了约26.5kDa融合外源蛋白带,且具有牛副结核分枝杆菌抗原反应性.结论 副结核分枝杆菌SOD基因在大肠杆菌中获得了表达,并具有抗原反应性,为进一步研究SOD作为诊断试剂或亚单位疫苗奠定了基础.
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野生动物与副结核病
副结核病(Paratuberculosis),或称约内氏病(Johne's disease,JD),是一种由副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.Paratuberculosis,MAP)引起的以慢性增生性、顽固性肠炎和进行性消瘦为特征的传染病[1,2].
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基于PCR检测和基因测序分析的鹿源副结核分枝杆菌鉴定及亚型分型
目的 快捷、准确地鉴定马鹿副结核分枝杆菌基因型和亚型,为马鹿副结核病防控工作提供理论依据.方法 从疑似感染副结核病马鹿的病料样品中提取其DNA,参照副结核分枝杆菌插入序列IS900鉴定引物、亚型分型引物,PCR扩增、测序及GenBank中BLAST比对.结果 所测2份病例与副结核分枝杆菌核苷酸同源性均在99％以上,属于副结核分枝杆菌,采用亚型分型鉴定,属于Ⅱ型(牛型)副结核分枝杆菌.结论 结合发病马鹿的临床症状、病理变化、抗酸性染色,证实该马鹿感染牛型副结核病.
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副结核分枝杆菌诊断技术的研究进展
本文介绍了长期以来一直危害世界畜牧业发展的副结核病的诊断方法,包括:临床症状、直肠粘膜粪便检菌法、细胞免疫测定法、单向辐射溶血试验、微量间接溶血试验、细菌分离鉴定法、变态反应、琼脂扩散试验、补体结合试验、ELISA法、DNA探针和PCR方法等.在日益增长的牛奶检测和进口种牛迅速增加的情况下,目前迫切需要建立早期的快速、准确的诊断方法,这对于预防和清除副结核菌、保护人们身体健康和促进我国畜牧业的快速健康发展具有重要指导意义.
