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大肠杆菌O157:H7的致病基因与致病因子
本文介绍了与肠出血性大肠埃希菌O157:H7致病性有关的主要致病基因及其相应的致病因子,如使宿主粘膜细胞产生损伤的eae基因与intimin、由特异性噬菌体上slt基因编码的SLTs、O157:H7特异性质粒上溶血素基因编码的溶血素(hly)等.
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1999-2006年江苏省徐州市肠出血性大肠埃希菌O157:H7感染状况的流行病学研究
目的 探讨徐州市肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7(以下简称O157:H7)感染的流行特征,系统观察腹泻患者、宿主动物携带O157:H7的状况及其与发病的关系,为制定防制策略提供科学依据.方法 采用描述流行病学方法对徐州市近8年来O157:H7感染状况与流行特征进行分析.结果 1999-2006年徐州共累计报告O157:H7引起的感染性腹泻并发肾衰竭(HUS)131例,病死率87.79%.徐州市丰县、铜山县发病多,占全市发病的77.10%.6～9月份为发病高峰,占发病的77.10%.年龄以60岁以上老人为主,占发病总数的74.81%,职业以农民为主,占91.60%.男女性别比例为1:1.34.腹泻患者、宿主动物带菌率连续性监测结果证实了其与O157:H7感染关系.不同年份O157:H7毒力基因发生了变化.结论 O157:H7感染自1999、2000年爆发流行后,徐州市疫情一直稳定.尽管疫情发生原因复杂,传播机制不清,但与腹泻患者带菌率、宿主动物带菌率及菌株毒力基因阳性率、毒力基因变迁有关.腹泻患者带菌率、宿主动物带菌率可作为爆发疫情预警监测指标.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 腹泻病 动物 带菌率 预警监测 -
大肠杆菌O157：H7快速增菌培养基检测效果的研究
为了验证对于大肠杆菌O157：H7菌株特异性、复苏效果以及快速生长的特点，比较了3种培养基对于大肠杆菌O157：H7的增菌效果。研究结果表明，8h培养时间内，MicroFast?快速增菌培养基对于冷损伤和热损伤的大肠杆菌O157：H7菌株具有良好的修复和增殖效果。MicroFast?快速增菌培养基营养组分适合O157菌株的生长需求，在MicroFast?快速增菌培养基中，大肠杆菌O157：H7菌株的倍增时间为13.5min，远高于mEC+n的28min，且MicroFast?快速增菌培养基能够完全抑制部分G+细菌以及部分G-细菌的干扰，对于大肠杆菌O157：H7具有特异性的选择。故MicroFast?快速增菌培养基对于大肠杆菌O157：H7菌株具有良好的选择特异性，能够短时间内（8h内）有效富集培养大肠杆菌O157：H7菌株，是一种能够实现大肠杆菌O157：H7菌株快速高效、特异增殖的培养基，将其结合检测金标卡，能够实现8h内快速检测，结果可信可靠。
关键词： MicroFast?快速增菌培养基 大肠杆菌O157:H7 增菌 效果 -
戊二醛对大肠杆菌O157:H7杀灭效果及影响因素的研究
研究戊二醛对大肠杆菌O157:H7的杀灭效果及其影响因素,采用悬液定量杀菌试验方法进行了实验室观察.结果 ,以含150 mg/L戊二醛的消毒液对大肠杆菌O157:H7作用9 min,平均杀灭率为99.996%.在150 mg/L戊二醛浓度下,测得杀灭大肠杆菌O157:H7的D值为2.63 min、浓度系数1.11、温度系数为1.54.将含戊二醛150mg/L的溶液pH值调整为5、7、9时,作用5 min,平均杀灭率分别为96.54%、99.82%、100%.菌悬液中含20%以上小牛血清对含150 mg/L戊二醛杀灭该株大肠杆菌的效果有明显影响.结论 ,戊二醛消毒剂对大肠杆菌O157:H7杀灭效果明显受其浓度、作用时间、作用温度及有机物含量的影响.
关键词： 戊二醛 杀菌效果 影响因素 大肠杆菌O157:H7 -
连续消毒中大肠杆菌O157:H7对消毒剂抗力变化与DNA关系的研究
为了解50代连续消毒中大肠杆菌O157:H7对4种消毒剂抗力的变化以及抗力与染色体DNA的关系,用4种消毒剂连续消毒大肠杆菌O157:H7 50代,用XbaⅠ酶切试验菌染色体DNA,对比消毒前后试验菌对4种消毒剂的抗力及染色体DNA的变化.结果,连续消毒50代后,试验菌对二氯异氰尿酸钠、碘伏、季铵盐的抗力增加,细菌染色体DNA XbaⅠPFGE 酶切图谱均发生一定的改变;试验菌对洗必泰的抗力不变,细菌染色体DNA XbaⅠPFGE 酶切图谱不变.结论,细菌染色体上携带有抵抗二氯异氰尿酸钠、碘伏、季铵盐的抗力的基因,连续消毒会使试验菌对此3种消毒剂的抗力增加,抗力增加的原因可能与细菌染色体DNA结构的改变相关.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 DNA 消毒剂 抵抗力 -
河南省睢县一起腹泻后并发急性肾功能衰竭爆发的调查
目的调查大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻的分布特征、临床特点及家畜、家禽的带菌状况和外环境污染程度.方法用现患调查方法,描述大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻的发病情况,分析引起流行的原因,用O157特异性筛查方法进行病原体分离培养,应用分子生物学、微生物学、细胞学技术进行病人、家畜、家禽的病原学分离、培养、毒素因子测定.结果睢县是河南省首先发现的疫区,从3月17日至7月6日共发生病人35例,合并急性肾功能衰竭32例,死亡28例,病死率87.50%,60岁以上发病占91%;从家畜、家禽分离出107株O157:H7菌株,从腹泻病人中分离出48株;微生物学、分子生物学及细胞学技术鉴定67株具有毒素基因;显示有5个毒素因子组合型.结论大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻并发急性肾功能衰竭是病人死亡的主要原因,家畜、家禽的高带菌率可通过污染水、食物传染给人,亦可通过蝇和日常生活接触感染.睢县疫情是一起大肠埃希菌O157:H7感染引起的溶血性尿毒综合征的爆发.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 溶血性尿毒综合征 聚合酶链反应 -
江苏省1999年大肠埃希菌O157:H7宿主动物带菌情况调查
目的了解江苏省不同地区大肠埃希菌O157:H7宿主动物带菌情况及其毒力基因阳性率.方法在不同流行强度的地区分别设立监测点,采集猪、鸡、羊、牛等家畜家禽粪便标本,用免疫磁珠法进行病原菌分离培养,并用多重引物聚合酶链反应进行毒力基因分析.结果 6个监测点共采集猪、鸡、羊、牛等家畜家禽粪便标本1 767份,共检出大肠埃希菌O157:H7 170株,总带菌率为9.62%.其中,以牛、羊带菌率较高,分别为19.05%和12.01%.对85株菌进行SLT1、SLT2、eaeA和hly 4种毒力基因的检测,56.47%的菌株毒力基因阳性,且以同时带有SLT2、eaeA和hly 3种毒力基因为常见,占带毒菌株的79.17%.结论宿主动物带菌率与当地疾病流行强度有关,即有确诊病人的地区宿主动物带菌率及菌株毒力基因阳性率高,其次为仅有零星病例的地区,而无相关病例的地区低.提示加强宿主动物大肠埃希菌O157:H7监测,对疫情的分析和疫情预测具有重要意义.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 宿主动物 带菌率 毒力基因 -
徐州市2000年肠出血性大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻的调查
目的了解徐州市丰县和铜山县肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7引起的出血性结肠炎(HC)在腹泻病患者中所占的比例,以及临床症状和肾功能变化的情况.方法使用EHEC O157胶体金快速检测试剂筛选粪便标本,阳性者使用免疫磁珠方法分离病原菌.对经过细菌学证实的EHEC O157:H7引起的HC患者,进行临床症状的观察和生化检验指标分析.结果 2000年5月份,丰县由EHEC O157:H7引起的HC占腹泻病患者0.98%,6月份铜山县的HC患者占腹泻病患者5.89%.在出现腹泻病症状的同时,18.5%患者的肾功能已经出现异常,表现为尿蛋白、血清肌苷或血尿素氮等指标的升高.在27例HC患者中,有14和13例分别分离到不产生志贺毒素和产生志贺毒素的EHEC O157:H7菌株.根据分离菌株是否产生志贺毒素将患者分为两组进行比较,尿蛋白阳性患者的比例分别为4/13和1/14,血小板减少患者的比例分别为6/13和3/14.统计学分析有显著意义.提示分离到产生志贺毒素的EHEC O157:H7菌株的患者,发生肾功能异常的可能性较大.结论此次调查证实了EHEC O157:H7感染所引起的HC在整个腹泻病患者中所占的比例随季节的变化而不同,感染产生志贺毒素EHEC O157:H7菌株的患者,发生肾功能异常的可能性要比不产生志贺毒素的大,还证实了在该菌感染的初期,患者的肾功能就已经出现了异常.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 志贺毒素 腹泻病 -
我国部分产生志贺毒素肠出血性大肠埃希菌O157:H7脉冲电场凝胶电泳分型
目的探讨我国部分地区产生志贺毒素的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7菌株的分布、流行以及分型情况.方法用脉冲电场凝胶电泳(PFGE)方法进行分型,辅以药物敏感性试验对51株产生志贺毒素的EHEC O157:H7菌株进行研究.结果根据细菌染色体DNA的XbaI酶切图谱,可将从江苏省徐州市等地分离的51株产生志贺毒素的EHEC O157:H7菌株分成8个PFGE型别(PFGE1～PFGE8),宁夏菌株为PFGE1型和2型,徐州菌株有6个PFGE型.1986～1988年的分离菌株属于PFGE7型,1999、2000年病人分离株的优势型别分别是PFGE5型与3型.1999年爆发性流行期间从患者分离的5株菌属于PFGE 5型,从家畜家禽的粪便、食品、蔬菜等标本分离的19株菌,可以分为PFGE3～6等4个型别,其中,PFGE5型占优势(10株菌).结论爆发性流行的发生与携带病原菌的家畜家禽粪便污染的食品、蔬菜等有关,从我国部分地区分离的EHEC O157:H7菌株的PFGE型别有地区性差异.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 脉冲电场凝胶电泳 分型 志贺毒素 -
肠出血性大肠埃希菌O157:H7引起的溶血性尿毒综合征患者血清抗体调查
目的对1999年某地出现的一批先有腹泻病症状后继发急性肾功能衰竭(肾衰)的患者进行血清学调查和诊断.方法使用基因克隆表达纯化的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)-溶血素(Hly)和EHEC O157脂多糖(LPS)为抗原,对采集自42例肾衰患者的血清标本进行蛋白印记试验.结果 EHEC-Hly的检测发现,IgG抗体阳性21份,阳性率50.0%; IgM抗体阳性16份,阳性率38.1%;在11份标本中同时检测到IgG和IgM抗体,阳性率26.2%;检测到IgG或IgM抗体阳性的标本26份,阳性率61.9%.EHEC O157 LPS的检测发现,24份标本分别检测到IgG和IgM抗体,阳性率各为57.1%;在29份标本中检测到IgG或IgM抗体,阳性率69.0%;在20份标本中检测到IgG和IgM抗体,阳性率47.6%.在42份血清标本中同时检测到EHEC-Hly和O157 LPS的特异性抗体的标本22份,阳性率52.4%;检测到EHEC-Hly或O157 LPS的特异性抗体的标本34份,阳性率81.0%.结论结合细菌学和血清学诊断结果、临床症状和流行病学分析,可以认为这些患者感染了EHEC O157:H7.在分离不到病原菌的情况下,检测患者血清标本的EHEC-Hly和/或EHEC O157 LPS的特异性抗体,不失为一种可以考虑的诊断方法.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 溶血性尿毒综合征 溶血素 脂多糖 -
大肠杆菌O157∶H7 OI115岛的多态性分析
目的 研究大肠杆菌O157:H7测序菌株EDL933的OI115岛在肠杆菌科细菌中的分布.方法 用PCR和杂交方法检测OI115岛的21个基因,同时进行该岛序列测定.结果 OI115岛和SPI-1毒力岛的分布特点相似,具有种属局限性.仅在大肠杆菌中存在,在EPEC、ETEC、EAggEC均可检测到该岛的缺失形式,在沙门菌、志贺菌、耶尔森、摩根菌等其他肠杆菌科细菌中未发现该岛的存在.在不同类别的致泻性大肠杆菌中,OI115岛也各有特点,共检测到该岛的3种存在形式.产生志贺毒素的大肠杆菌O157:H7菌株、2株EAggEC和2株不典型大肠杆菌均具有完整的OI115岛.在不产生志贺毒素的大肠杆菌O157中具有H5、H12、H29、H42、H11、H19、H26、H10、H21鞭毛型的菌株缺失了第3基因簇,具有H16鞭毛型的菌株第2、第3基因簇同时缺失.结论 本研究发现,OI115岛在致泻性大肠杆菌中分布广泛,可能和病原菌的进化有关.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 基因组岛 Ⅲ型分泌系统 -
多重PCR-DHPLC技术检测肠出血性大肠杆菌O157:H7基因型的方法学研究
目的 开发肠出血性大肠杆菌O157:H7的多重PCR-变性高效液相色谱(DHPLC)检测方法 .方法 以编码大肠杆菌0157抗原的rfbE 基因、编码毒力因子的类志贺毒素(SLT)基因为目的 基因,选择2对引物,建立并优化了大肠杆菌O157:H7的多重PCR-DHPLC检测体系.扩增产物分别为224 bp和499 bp.结果 采用37株细菌验汪了该多重PCR具有良好的特异件.PCR榆测的灵敏度可达到4 CFU/ml.结论 实验证明,研究建立的多重PCR-DHPLC方法 可特异、灵敏地实现对大肠杆菌O157:H7的检测.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 多重PCR 变性高效液相色谱 -
用Red系统敲除大肠杆菌O157:H7的ecs4553以及ecs4563基因
目的:用Red系统快速敲除肠出血性大肠杆菌O157:H7中的分子伴侣基因,构建EHEC O157:H7的突变体.方法:本研究首先合成一对引物(每一条的5'端与ecs4553或者ecs4563基因同源,3'端与卡那霉素抗性基因同源),用pKD4为模板扩增出带有卡那霉素抗性基因的PCR产物,然后电击转化至大肠杆菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过卡那霉素抗性基因两侧的ecs4553或者ecs4563基因序列在体内与ecs4553或者ecs4563基因发生同源重组,置换掉基因组中的ecs4553或者ecs4563基因,后利用卡那霉素抗性基因两端的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将卡那霉素抗性基因剔除.结果:获得了ecs4553或者ecs4563基因被精确敲除且不带卡那霉素抗性基因的EHEC O157:H7突变菌株.结论:为进一步研究EHEC O157:H7的致病机制奠定了基础.
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CTB-mST2融合蛋白在大肠杆菌表达及其生物活性鉴定
目的:表达霍乱毒素B亚单位(CTB)和大肠杆菌突变的热稳定肠毒素(mST)的融合蛋白,并进行抗原性和免疫原性的分析.方法:通过连接肽(linker)将CTB基因和串连的mST连接,然后插入表达载体pET-22b(+),获得克隆,经IPTG诱导获得CTB-mST2融合蛋白.采用多因素正交优选法优化了培养基及培养条件,对表达产物进行包涵体复性后,经过亲合层析纯化得到融合蛋白,并对该融合蛋白抗原性和免疫原性进行了分析.结果与结论:构建了高效表达工程菌,经摇瓶培养,在优化培养基及培养条件下融合蛋白表达量可达320 mg/L,占总蛋白40%.融合蛋白免疫小鼠,可获得高滴度抗CTB和ST血清;将融合蛋白与灭活的O157∶ H7菌体组合免疫小鼠,可产生对O157∶ H7毒株攻击的保护力.本研究可为构建抗ETEC和EHEC复合疫苗提供依据.
关键词： 霍乱毒素B亚单位 大肠杆菌热稳定肠毒素 大肠杆菌O157:H7 疫苗 -
大肠杆菌O157:H7新蛋白Ecs4563的基因克隆、表达及纯化
目的:克隆、表达并纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7新预测分子伴侣蛋白Ecs4563,以进一步开展其结构与功能的研究.方法:利用PCR方法从EHEC O157:H7基因组中扩增出分子伴侣基因ecs4563,构建重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现诱导表达,采用Western印迹法进行鉴定,通过Ni2+螯合柱纯化获得目的蛋白.结果:构建了pET-24a-ecs4563重组质粒,实现了目的蛋白的融合表达,Ni2+金属螯合法纯化了目的蛋白,通过Western印迹法验证了融合蛋白的特异性.结论:得到了新预测分子伴侣Ecs4563,为下一步研究蛋白功能,进一步研究EHEC O157:H7的致病机制奠定了基础.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 ecs4563基因 克隆 基因表达 Ⅲ型分泌系统 -
大肠杆菌O157:H7多克隆抗体纯化
目的 制备大肠杆菌O157:H7多克隆抗体,比较3种纯化方法对抗体性能的影响,为食品检验、临床和血清学检验O157:H7奠定基础.方法 应用传统方法制备大肠杆菌O157:H7多克隆抗体,利用盐析法、亲和层析法和抗原吸附法对其进行纯化,采用SDS-PAGE、Bradford法、ELISA等实验技术检测纯化后抗体的纯度、比效价、交叉反应性,从而比较3种纯化方法的纯化效果.结果 获得效价1:131072的大肠杆菌O157:H7抗血清.亲和层析法所得纯化产物纯度较高,抗体解链为分子量约55 kDa和25 kDa的蛋白,抗原吸附法所得产物纯度次之,盐析法所得产物的纯度较差,有多条杂蛋白条带.抗原吸附法所得纯化产物比效价较高为349.3,并且与其他5株细菌的交叉反应情况相对反应较小.结论 亲和层析法和抗原吸附法纯化抗体均有一定的优越性,抗原吸法得到的抗体使用性能较好.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 多克隆抗体 纯化 -
复合探针实时荧光PCR检测大肠杆菌O157:H7
目的建立一种快速、准确、特异的肠出血性大肠杆菌O157:H7的定量检测方法.方法以rfbE基因作为待检靶基因,根据复合探针荧光定量分析原理设计检测引物和探针,建立检测大肠杆菌O157:H7的实时荧光定量PCR方法.并对本方法检测的特异性、灵敏度、重复性等进行评价.结果所有O157:H7的检测结果均为阳性,而所有其它菌株检测结果均为阴性;该方法检测的灵敏度可达10 cfu·mL-1,定量检测的批间和批内差异均小于5%.在模拟污染牛奶中,可检出1×101 cfu·μL-1的细菌.结论本文建立的复合探针实时荧光定量PCR技术能快速准确、特异、敏感地对大肠杆菌O157:H7进行定量分析,为大肠杆菌O157:H7的检测提供了新的方法.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 实时荧光PCR 复合探针法 -
大肠埃希菌O157:H7志贺毒素Ⅱ变种的分布
目的了解徐州地区E.coli O157:H7分离菌株Stx2毒素变种Stx2vha在人及畜禽中的携带分布情况.方法用特异性探针Southern杂交检测菌株中是否携带Stx2vha毒素变种.结果66株分离株中35株为Stx2vha毒素变种阳性,占53%,13株为Stx2原毒素阳性,占19.7%,17株为Stx2毒素阴性,占25.8%,另有1株不同于其它菌株是否为新的毒素变种需进一步确证.35株Stx2vh阳性菌株在羊、病人、牛、猪、鸡的分离率分别为37.1%,25.7%,17.1%,11.4%,4.5%.结论含有Stx2vh毒力基因菌株是徐州地区O157:H7菌株的优势菌型,主要宿主动物为羊.
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大肠杆菌O157:H7Stx2毒素B亚单位基因的克隆、序列分析及表达载体的构建
目的克隆出血性大肠杆菌O157:H7的Stx2毒素B亚单位基因,进行序列分析并构建表达载体.方法利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157:H7染色体基因组中扩增出Stx2毒素B亚单位基因,并连接至质粒载体上,进行序列测定和分析,亚克隆构建表达载体,经SDS-PAGE电泳分析目的蛋白表达量.结果所克隆的基因序列与Genbank上基因序列高度同源,所表达目的蛋白约占宿主菌蛋白的20%.结论为进一步的疫苗研究奠定了基础.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 Stx2毒素B亚单位 序列 -
一起感染性腹泻暴发的流行病学调查分析
目的查明感染性腹泻病因、传播途径以及有关影响因素,完善有效控制该病流行的策略.方法用样本估计总体发病水平推断流行强度;流行因素采用病例对照调查,并进行危险因素的单因素分析和多因素Iogistic回归分析;病原学检测使用免疫磁株法.结果流行区内罹患人数达294 636例,93例伴急性肾功能衰竭.优势菌为志贺氏菌属,占检出病原菌总数的65.67%(88/134),大肠杆菌为流行过程的次优势菌株,检出34株,占25.37%,出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7是重症病例重要病原.吃剩饭菜、无防蝇设备和饭前洗手3项因素对腹泻病发生和流行有意义.结论通过卫生宣教、外环境灭蝇、灭蛆及合理治疗腹泻病人控制疫情.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 腹泻病 流行因素
