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大肠杆菌O157:H7的致病基因与致病因子
本文介绍了与肠出血性大肠埃希菌O157:H7致病性有关的主要致病基因及其相应的致病因子,如使宿主粘膜细胞产生损伤的eae基因与intimin、由特异性噬菌体上slt基因编码的SLTs、O157:H7特异性质粒上溶血素基因编码的溶血素(hly)等.
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非 O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株eae 基因分型分析
目的：了解我国不同来源非O157产志贺毒素大肠埃希菌（ Shiga toxin-producing Esche-richia coli， STEC）分离株携带的eae基因型别。方法 PCR扩增eae全长基因，扩增产物经测序并拼接后在美国国立生物技术信息中心（ NCBI）中进行BLASTn比对，判定其eae基因型别，并与GenBank中已公布的30种 eae 不同型别的序列及产志贺毒素大肠埃希菌主要流行血清型（ O157∶H7， O26∶H11， O103∶H2， O111∶H8， O145∶H28， O45∶H2， O121∶H19）代表性基因组测序菌株的eae序列用Neighbor-Joining法构建系统发生树，分析其进化关系。根据mlst．ucc．ie数据库提供的大肠埃希菌多位点序列分型（ multilocus sequence typing， MLST）方案对菌株进行MLST分型分析，确定菌株等位基因型及序列类型，并用BioNumerics软件构建小生成树（ minimum spanning tree， MST），分析携带eae基因的非O157 STEC分离株与溶血性尿毒综合征相关大肠埃希菌（ HUS-associated en-terohemorrhagic E．coli，HUSEC）、E．coli MLST数据库中所有人源流行血清群O26、O103、O111、O121、O145、O157 STEC菌株的进化关系。结果10株不同来源的非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株经扩增拼接后均获得了约2．8 kb的eae基因全长序列，分为3种已知的eae基因型别，其中以β1型为主（6／10），2株θ型，2株γ1型。某些eae序列与主要流行血清型STEC的eae序列完全一致。10株菌分为7个ST型，与HUSEC、人源流行血清群STEC菌株具有相近的进化关系。结论我国非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株eae基因存在一定程度的多样性，eae阳性菌株具有潜在的高致病性。
关键词： 非O157产志贺毒素大肠埃希菌 eae基因 MLST 分型 -
肠致病性大肠埃希菌分离株血清型多样性分析
目的 了解不同来源肠致病性大肠埃希菌(EPEC)分离株的血清型.方法 采用特异性PCR方法检测大肠埃希菌不同O抗原编码基因,并以全套O抗血清复核确定O血清群;以PCR扩增和测序H抗原编码基因,经序列比对后确定H型.结果 331株EPEC分离株中,共检测到81种O血清型,其中优势O血清群为O51,占6.0％ (20/331),O145占4.5％(15/331);共检测到25种H型,其中优势H型为H11(8.2％)、H2(7.9％)和H19(7.9％).常见的血清型为O51∶H7和O26∶H11.来自腹泻患者、健康从业人员、动物和生肉类的EPEC分离株中,分别检测到63种、22种、25种和17种O血清群.腹泻患者、动物和生肉类中的优势血清群/型分别为O51(8.7％)、O145(15.7％)和O76∶H7(21.2％),而健康人员的分离株无明显优势血清群.结论 我国EPEC菌株的血清型呈现极大的多样性,无明显的优势血清群(型),传统上依靠血清群(型)对EPEC进行判断的方法存在局限性.
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四川泸县艾伯特埃希菌的分离与鉴定
目的 利用艾伯特埃希菌检测技术调查泸县地区家禽中艾伯特埃希菌的带染情况.方法 采集市售鸭肠及鸡肠,肠内容物经EC肉汤增菌后,PCR检测eae基因,阳性增菌液接种麦康凯琼脂,挑取不发酵乳糖、eae阳性菌落进一步通过16S rDNA测序及MLST分析,确认为艾伯特埃希菌.结果 本研究从147份鸡肠及内容物中检出12株疑似艾伯特埃希菌,经16S rDNA测序、MLST聚类分析表明该12株菌与艾伯特埃希菌参考菌株具有高度亲缘性,可证实为艾伯特埃希菌.结论 本研究证实了泸县地区家禽中存在艾伯特埃希菌,表明艾伯特埃希菌检测技术有效可行,具有推广应用价值;获得的菌株为进一步推广研究艾伯特埃希菌生物学特征、流行病学等提供资源.
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不同来源肠致病性大肠杆菌(EPEC)分离株eae基因分析
目的 了解我国不同来源肠致病性大肠杆菌分离株携带的eae基因型别. 方法 PCR扩增eae基因,扩增产物测序后在NCBI中进行BLASTn搜索比对,确定其基因型别,并用大似然法构建eae基因进化树,分析eae基因各型别间的相互关系. 结果 130株EPEC菌株中,100株获得了1.8 kb序列,共分为18种eae基因型别,其中以β1型为主,占37％(含37株菌).人源和动物源EPEC菌株存在相同的eae型别. 结论 我国EPEC分离株的eae型别呈多样性.
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肠出血性大肠杆菌O157:H7的紧密黏附素基因eae的测序及生物信息学分析
目的 克隆编码肠出血型大肠杆菌O157:H7的紧密黏附素eae基因,并对其进行测序及生物信息学分析,为研究EHEC与宿主细胞相互作用奠定基础.方法 利用PCR技术扩增eae基因,经过纯化,将其定向插入克隆载体PMD19-T simple vector并进行测序,应用生物信息学软件分析其生物学特性.结果 用PCR方法扩增eae基因,大小为2802 bp,编码934个氨基酸,用DNAstar5.0软件分析紧密黏附素(Intimin)蛋白的生物活性,在202～210、510～520、716～735个氨基酸残基的肽链上,显示该蛋白具有良好的亲水性,在175～220、300～315、550～610、710～780、825～880个氨基酸残基的肽链上具有良好的柔韧性,在220～300、615～710个氨基酸残基的肽链上,显示该蛋白具有良好的抗原性.结论 本研究用PCR法扩增出了O157:H7的eae基因,成功构建了肠出血性大肠杆菌O157:H7紧密黏附素eae基因的重组质粒,并分析了黏附素蛋白的亲水性、柔韧性、抗原性,为进一步研究大肠杆菌O157:H7黏附素的致病机制奠定了基础,为下一步表达出Intimin蛋白,进一步研究该蛋白与宿主细胞的粘附、免疫原性、抗原抗体反应提供了理论依据.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 eae基因 克隆 序列测定 生物信息学分析 -
四川荥经县艾伯特埃希菌的分离与鉴定
目的 按照自贡市疾病预防控制中心编制的艾伯特埃希菌的检测程序,对四川荥经县采集的鸡肠样品中艾伯特埃希菌的携带情况进行检测,了解该地区家禽中艾伯特埃希菌的携带情况及菌株特征.方法 采集荥经县农贸市场、棒棒鸡店铺、活鸡宰杀点的新鲜鸡肠样品163份,按照艾伯特埃希菌的检测程序对样品进行检测,鸡肠内容物经EC肉汤增菌后,PCR检测eae基因,eae阳性样品的增菌液接种于麦康凯琼脂,37℃,24 h培养后挑取不发酵乳糖、eae阳性的疑似菌株,使用多重PCR检测及多位点序列分析(MLST)对疑似菌株进行鉴定.结果 白贡市疾病预防控制中心编制的艾伯特埃希菌的检测程序可行有效,在荥经县共采集了新鲜的鸡肠样163份品,从3份样品中分离到3株疑似艾伯特埃希菌菌株,经多重PCR检测及多位点序列分析(MLST)鉴定,3株疑似菌株均为艾伯特埃希菌.本次采集的样品艾伯特埃希菌的检出率为1.84％ (3/163).结论 四川荥经县地区鸡肠中存在艾伯特埃希菌,分离到的菌株丰富了艾伯特埃希菌生物学特征、流行病特征研究的菌株数据库.
