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非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株脉冲场凝胶电泳分析
目的 对国内不同宿主来源的非O157产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)分离株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,以初步建立中国非O157 STEC菌株的基础数据库,了解其分子流行病学特征.方法 参照PulseNet非O157 STEC的PFGE实验方法对76株非O157 STEC分离株进行分析,并使用BioNumerics软件进行聚类.结果 在PulseNet推荐的电泳参数和内切酶XbaⅠ情况下,菌株酶切片段分布均匀,条带易于识别.76株非O157 STEC分离株产生62种PFGE带型,初步聚类为A～M 13个群,不同来源菌株的PFGE带型分布广泛,但均具有某些优势的PFGE聚类群.结论 国内不同来源的非O157 STEC呈高度多态性,PulseNet推荐的PFGE电泳参数和内切酶XbaⅠ适用于中国非O157 STEC菌株的分析.
关键词： 非O157产志贺毒素大肠埃希菌 脉冲场凝胶电泳 分子分型 -
我国5个地区27株人源非O157产志贺毒素大肠埃希菌分子特征初步分析
目的 了解我国5个地区人源性非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株的分子生物学特征. 方法 对来源于5个地区的27株腹泻患者和健康人的非O157产志贺毒素大肠埃希菌进行血清分型、stx1和stx2基因检测及亚型分析、eae等黏附基因和其他毒力基因检测,并对菌株进行多位点序列分型(MLST)分析. 结果 27株非O157 产志贺毒素大肠埃希菌分为16种O∶H血清型;11株携带stx1a亚型,12株携带stx1c亚型,2株携带stx2e亚型,携带stx1a+stx2b、stx2d、stx2g亚型各1株;eae、efa1、saa、paa、toxB、astA及ehxA基因的检测率分别为18.5%、18.5%、29.6%、22.2%、11.1%、11.1%及25.9%.MLST将27株菌分为16种不同的ST型.结论 我国5个地区人源性非O157产志贺毒素大肠埃希菌菌株在血清型、志贺毒素亚型及毒力基因等方面存在多样性.
关键词： 非O157产志贺毒素大肠埃希菌 志贺毒素 血清分型 多位点序列分型 -
非 O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株eae 基因分型分析
目的：了解我国不同来源非O157产志贺毒素大肠埃希菌（ Shiga toxin-producing Esche-richia coli， STEC）分离株携带的eae基因型别。方法 PCR扩增eae全长基因，扩增产物经测序并拼接后在美国国立生物技术信息中心（ NCBI）中进行BLASTn比对，判定其eae基因型别，并与GenBank中已公布的30种 eae 不同型别的序列及产志贺毒素大肠埃希菌主要流行血清型（ O157∶H7， O26∶H11， O103∶H2， O111∶H8， O145∶H28， O45∶H2， O121∶H19）代表性基因组测序菌株的eae序列用Neighbor-Joining法构建系统发生树，分析其进化关系。根据mlst．ucc．ie数据库提供的大肠埃希菌多位点序列分型（ multilocus sequence typing， MLST）方案对菌株进行MLST分型分析，确定菌株等位基因型及序列类型，并用BioNumerics软件构建小生成树（ minimum spanning tree， MST），分析携带eae基因的非O157 STEC分离株与溶血性尿毒综合征相关大肠埃希菌（ HUS-associated en-terohemorrhagic E．coli，HUSEC）、E．coli MLST数据库中所有人源流行血清群O26、O103、O111、O121、O145、O157 STEC菌株的进化关系。结果10株不同来源的非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株经扩增拼接后均获得了约2．8 kb的eae基因全长序列，分为3种已知的eae基因型别，其中以β1型为主（6／10），2株θ型，2株γ1型。某些eae序列与主要流行血清型STEC的eae序列完全一致。10株菌分为7个ST型，与HUSEC、人源流行血清群STEC菌株具有相近的进化关系。结论我国非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株eae基因存在一定程度的多样性，eae阳性菌株具有潜在的高致病性。
关键词： 非O157产志贺毒素大肠埃希菌 eae基因 MLST 分型
