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应用脉冲场凝胶电泳技术对江西省霍乱暴发和常规监测菌株的分析
为了解江西省霍乱弧菌流行菌株的分子分型特征,分析爆发性流行和环境与食品监测菌株的特征及相关性,我们运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对江西省2004年部分O1群、O139群霍乱弧菌分离株进行了分子流行病学研究.
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广东省食品中单核细胞增多性李斯特菌脉冲场凝胶电泳技术分子分型的研究
目的 应用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对广东省食品中分离的单核细胞增多性李斯特菌(Lm)进行分子分型,并建立PFGE数据库.方法 参照美国PulseNet的Lm PFGE分子分型标准方法进行检测.应用BioNumerics软件对不同食物种类、时间和地点的分离株进行比对,分析菌株之间的相关性.结果 107株Lm分成41个PFGE型,型别较为分散;从鸡肉中分离的菌株数多(37株),PFGE分型也多(19个);冷藏和冷冻食品的分离率较高,其中有26株菌仅存在1～2个电泳条带的差异,相似度极高;韶关和惠州地区分离的Lm存在着地区特异性;随时间变迁,部分菌株仍存在不同程度的相关性.结论 广东省食品中分离的Lm在整体上表现出较大的遗传多样性,但部分菌株有不同程度的相关性.
关键词： 单核细胞增多性李斯特菌 脉冲场凝胶电泳技术 食品 分子分型 -
新建医院临床分离菌株的分子流行病学分析
目的：了解新建医院的常见致病菌分布及传播规律，对主要致病菌的流行病学特征及耐药性进行分析，为临床用药及预防细菌传播提供参考依据。方法对医院2012年5月－2015年5月送检标本中分离的病原菌进行流行病学分析，并对分离较多且具有相近多药耐药谱的鲍氏不动杆菌（MDR‐AB）及多药耐药铜绿假单胞菌（MDR‐PAE）菌株利用脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）进行同源性分析。结果新建医院的分离菌株与国内其他已展开工作的医院细菌分离情况大致相似，主要分离株为大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、金黄色葡萄球菌；对所分离的54株MDR‐AB及32株MDR‐PAE的流行病学分析表明，ABA多耐药菌株在医院内造成了流行，而PAE只是散发病例。结论新建医院内分离菌受国内大环境的影响，分离菌与其他医院大致相同；对多药耐药菌在医院的流行应给予足够的重视，加强针对性策略，以减少耐药率，减轻临床治疗负担。
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O139群霍乱弧菌分子流行病学研究
目的 分析2001-2006年广州地区霍乱暴发、散发事件及外环境监测中分离的O139群霍乱弧菌的致病相关基因型和PFGE型,追踪菌株的来源和变迁,探讨本地区O139群霍乱流行特点.方法 采用多重PCR方法检测O139群菌株的4种致病相关基因,应用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对菌株进行分子分型,采用软件BioNumerics Version 4.0对分型数据进行处理和分析.结果 广州地区O139群菌株中存在2种致病相关基因型,即A型和C型,18株感染者相关菌株中,除1株外,均为致病相关基因A型;10株珠江水分离株均为致病相关基因C型.28株O139群霍乱弧菌分为20个不同的PFGE型,归为4个聚类群(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ群).珠江水中O139群菌株存在PFGE克隆型的多样性.O139群暴发中分离的菌株PFGE型相同或相近,O139群散发疫情中的病例分离株与部分暴发株也具有相同或相近的PFGE型.结论 分子分型方法结合流行病学资料,可分析O139群霍乱菌株的流行特点,致病相关基因分型可代替噬菌体-生物分型来判断和区分O139群霍乱弧菌的流行株与非流行株,从而为霍乱的预防、控制和预警提供科学依据.
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布鲁菌病的实验诊断方法及布鲁菌的分子生物学分型方法研究进展
布鲁菌可引起人兽共患病布鲁菌病(简称布病),布病的临床实验室诊断和布鲁菌分型在布病的诊疗和防控中非常重要.布病的实验诊断方法包括细菌培养、免疫学诊断、分子生物学方法等,其中免疫学诊断方法包括试管凝集试验、虎红平板凝集试验、抗人球蛋白试验、酶联免疫吸附试验、免疫捕获凝集技术、补体结合试验、免疫胶体金技术、荧光偏振试验等,分子生物学方法包括聚合酶链式反应、环介导等温扩增技术、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等.布鲁菌的分子生物学分型方法包括聚合酶链式反应、脉冲场凝胶电泳技术、多位点序列分型、多位点可变数目串联重复序列分析、高变量八聚物寡核苷酸指纹分析等.
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多血清型副溶血性弧菌引起食物中毒的毒力基因检测和分子分型
目的 对一起多血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行毒力基因和分子分型研究.方法 按照GB/T4789-2008食品卫生微生物学检验方法对事件中可疑样品进行病原菌分离鉴定,对检出的副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)做血清分型;采用实时荧光PCR检测分离菌株的毒力基因,并用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)进行分子分型.结果 共检出12株VP(8株来自患者粪便、4株来自剩余食物).12株VP经毒力基因检测,tdh阳性检出9株,其中一株来自剩余食物,其余均为患者粪便中分离;trh毒力基因均为阴性;经PFGE分型12株VP分为6个PFGE带型,聚类分析相似性百分比为66.8％ ～ 100％.结论 该起食物中毒是由多血清型别VP引起的,其中O3:K6型VP污染的凉拌海蜇是引起本次食物中毒的重要原因食品.PFGE分型技术适用于多血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒事件的调查.
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丽水市中心医院分离的139株鲍曼不动杆菌的耐药特征及同源性分析
目的 了解丽水市中心医院临床分离鲍曼不动杆菌的耐药特征及通过脉冲场凝胶电泳技术了解菌株的分子流行病学特征.方法 收集丽水市中心医院分离的139株鲍曼不动杆菌,采用K-B法检测菌株对抗生素的耐药性;随机选取30株多重耐药鲍曼不动杆菌进行PFGE及聚类分析.结果 139株鲍曼不动杆菌感染患者中,＞60岁的比例较高,占66.19％;鲍曼不动杆菌的检出率在痰液标本中高(90.65％),主要分布于ICU.该菌对多粘菌素B均敏感,其余抗菌药物的耐药率均在66％以上.聚类分析表明,30株鲍曼不动杆菌共分为4个PFGE群,依次命名为A～D,其中A群为主要流行克隆,共23株,占76.67％.结论 鲍曼不动杆菌已成为丽水市中心医院感染的重要病原菌,在多个科室播散,主要分布于ICU病区.克隆菌株的播散是造成本院鲍曼不动杆菌分离率、耐药率上升的主要原因.
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永康地区106株鲍曼不动杆菌的耐药性及脉冲场凝胶电泳分析
目的 明确永康市第一人民医院临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性及通过脉冲场凝胶电泳技术了解菌株的同源性.方法 收集永康市第一人民医院分离的106株鲍曼不动杆菌,用琼脂稀释法进行体外药敏试验;利用限制性内切酶ApaI进行脉冲场凝胶电泳(PFGE),利用BioNumerics软件进行聚类分析.结果 106株鲍曼不动杆菌中98株为痰液标本,主要来自外科ICU(39株)和内科ICU(31株)病区.所有菌株对多粘菌素敏感,除头孢哌酮/舒巴坦外,其余抗菌药物的耐药率均在59％以上.利用PFGE技术将随机选取的30株菌分为4个脉冲群,脉冲群A为主要流行克隆.结论 鲍曼不动杆菌已成为永康市第一人民医院感染的重要病原菌,在多个科室播散,主要分布于内科ICU和外科ICU病区.本院鲍曼不动杆菌感染主要为A型克隆.
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深圳市龙岗区致泻大肠埃希菌的PFGE分子分型
目的 了解2010-2015年深圳市龙岗区致泻大肠埃希菌(DEC)的分子流行病学特征.方法 收集来自腹泻病人和健康人群的1714份粪便或肛拭子标本,对其进行DEC的分离培养,生化及PCR鉴定与分型,再利用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对DEC分离株进行分子分型.结果 共检出DEC阳性160人,检出率为9.3%,其中感染性腹泻病人中检出率为9.7%(117/1204);健康人群中检出率为8.4%(43/510).人群中DEC的检出类型以产毒性大肠埃希菌(ETEC)为主,占45.0%,其次为致病性大肠埃希菌(EPEC)和黏附性大肠埃希菌(EAEC),分别占32.5%、18.7%;腹泻人群和健康人群中检出类型差异有统计学意义(P<0.05),前者以ETEC为主(59.8%),后者以EPEC为主(60.5%).135株DEC样本菌株共分为123种PFGE带型,其中70株ETEC共分为60种PFGE带型,37株EPEC分为36个带型,23株EAEC分为22个带型,病人和健康人群之间检出了带型一致的EAEC菌株.结论 研究地区DEC的基因型多样,人群感染类型以ETEC为主.ETEC可能存在优势克隆菌株的感染流行,存在暴发感染的可能;腹泻人群和健康人群之间可能存在同源克隆菌株的感染.
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脉冲场凝胶电泳技术应用于沙门菌鉴定的方法研究
目的利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术和设备解决沙门菌鉴定困难的难题,探究简便、快速、准确的鉴定方法,确立积极有效检测鉴定手段和监控措施,防止食物中毒及传染病的暴发流行.方法根据测试菌不同,探讨PFGE技术实验条件,沙门菌的PFGE鉴定方法.结果经反复试验证实所建方法灵敏快速、准确可靠、分辨率高,实用性强.在没有图像分析仪的情况下,肉眼即可进行判断,可替代传统的血清学鉴定方法.结论脉冲场凝胶电泳基因分型及同源性鉴定方法分辨率高,应用性强,技术先进.
