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北京市1例人感染H9N2禽流感病例的流行病学调查与分析
目的 分析北京市人感染H7N9禽流感疫情强化监测中发现的1例人感染H9N2禽流感病例流行病学调查情况,为今后科学防控人感染H9N2禽流感疫情提供参考.方法 采用现场流行病学和实验室检测相结合的方法,收集病例流行病学资料,采集并检测病例、暴露环境和密切接触者等标本,分析流行病学特征和可能的感染来源.结果 病例发病第3日和第7日咽拭子标本检测均为H9N2禽流感病毒核酸阳性.病例发病前10天内无禽类接触史,但病例平时活动有暴露于H9N2禽流感病毒污染环境的可能.密切接触者在医学观察期内均未出现流感样症状.结论 该病例为北京市首例成人感染H9N2禽流感确诊病例,同时也是北京市第二例H9N2禽流感确诊病例.医疗机构加强流感样病例监测是及时发现人感染H9N2禽流感病例的重要手段.
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中国职业暴露人群感染H9N2禽流感病毒血清学调查
目的 评估我国职业暴露人群感染H9N2禽流感病毒的风险因素.方法 利用2009-2011年间在我国22个省(直辖市、自治区)采集的职业暴露人群血清13 715份,筛选了在我国主要流行的G9系毒株A/Chicken/AK4/Anhui/2011作为检测抗原,使用血凝抑制方法初筛和微量中和方法复核两种血清抗体检测方法,在我国大陆地区开展系统的H9N2禽流感病毒血清学研究.结果 H9N2禽流感病毒在中国职业暴露人群的中和抗体血清阳性率为0.41％(63份阳性血清标本).所有家禽职业暴露人群均有阳性血清标本检出,活禽市场暴露人群感染H9N2禽流感病毒风险显著高于其他职业暴露人群.结论 活禽市场是人感染禽流感病毒的重要暴露风险因素.加强H9N2禽流感病毒在我国职业暴露人群的监测,对于有效评估和防控禽流感对人类的危害具有重要的意义.
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广州市禽类从业人群禽流感病毒感染特征分析
目的 应用血清流行病学调查广州市禽类从业人群感染禽流感病毒H5N1、H9N2、H7N7的状况,分析其感染特征.方法 采集广州市与禽类接触相关的职业人群血清,包括农贸市场活禽零售与非禽类零售人群、企业化家禽养殖与农村家禽散养人群、活禽批发市场人群、野生鸟驯养人群、生猪屠宰人群以及一般人群,用血凝抑制试验、中和抗体试验检测H5、H9、H7 IgG抗体;使用logistic回归分析、χ2检验分析感染率分布.结果 2881名调查对象中检测出4例H5抗体阳性(0.14%);146例H9抗体阳性(5.07%),其中以活禽零售人群H9感染率高(14.96%),企业化家禽养殖人群为8.90%,活禽批发人群为6.69%,野生鸟驯养人群为3.75%,生猪养殖人群为2.40%,非禽类零售人群为2.21%,农村家禽散养人群为1.77%,一般人群为2.30%.而1926名禽类从业人群中H7抗体均为阴性.结论 人群中H5感染率较低,而H9感染率较高,未检测到H7感染;活禽零售、家禽批发、企业化家禽养殖等职业具有较高感染禽流感病毒的风险,其中以活禽零售感染风险高,且接触家禽时间越长感染风险越高.
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众生丸体内抗H9N2亚型禽流感病毒的研究
目的:研究众生丸对滴鼻感染H9N2亚型禽流感病毒的小鼠的治疗作用.方法:以利巴韦林及达菲为阳性对照,通过小鼠滴鼻感染H9N2亚型禽流感病毒,分别建立小鼠禽流感病毒性肺炎动物模型和禽流感病毒感染致小鼠死亡的动物模型,观察小鼠肺部病变和死亡情况,评价众生丸对感染H9N2亚型禽流感病毒小鼠的治疗效果.结果:众生丸高中低剂量均可显著降低禽流感病毒性肺炎小鼠的肺指数(P＜0.05,P＜0.01),能减少感染小鼠的死亡数,延长平均存活时间,但与病毒对照组比较无统计学差异.结论:众生丸对滴鼻感染禽流感病毒H9N2亚型的小鼠有一定的治疗作用.
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H1N1感染背景对H9N2感染家猪的免疫保护作用
为了探索H1N1病毒感染史对H9N2病毒感染家猪的影响,本研究采用H9N2病毒分别感染有/无H1N1病毒感染史的家猪,比较两组家猪鼻腔泄毒滴度及血清转阳情况.研究发现:与无感染背景的家猪相比,H1N1病毒预感染过的家猪在接种了H9N2病毒后未检测到呼吸道泄毒.尽管两组家猪都产生了H9N2抗体,但有H1N1感染史的家猪体内的H1N1抗体水平在H9N2接种后快速显著上升,这些H1N1抗体与H9N2病毒并无血清学交叉反应.本研究提示,在自然界中,H1N1病毒在猪群中的流行极有可能为H9N2病毒在猪中的感染及传播构筑了天然的屏障,从而延缓了H9N2禽流感病毒通过家猪这一宿主获得哺乳动物适应性的进程.
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青海湖地区5株H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列进化分析
2012年7～9月从来源于青海湖地区活禽市场的环境样本中分离到5株H9N2亚型禽流感病毒,为了了解其基因遗传进化情况,本研究通过RT-PCR技术扩增分离毒株的8个基因片段,并进行全基因序列测定.对其分子特征及全基因序列进行遗传进化分析.结果显示5株病毒的HA基因片段的核苷酸相似度为93.2％～99.1％.NA基因核苷酸的相似度为94.5％～99.8％.A/environment/qinghai/017/2012的裂解位点为PSKSSRGLF,其它4个毒株的HA裂解位点均为PSRSSRGLF.5个病毒的HA基因第226位受体结合位点均为L.M1基因片段中发生了N30D和T215A替换.遗传进化分析表明5株病毒同2005年湖南分离的A/chicken/Hunan/5260/2005(H9N2)毒株类似,为一种重配基因型禽流感病毒.其中HA、NA、NS基因片段属于Y280-like支系,MP基因片段属于G1-like支系,NP、PB1、PB2、PA四个基因片段属于F98-like支系.
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H9N2亚型禽流感病毒基因组的遗传进化分析
2009～2011年从江苏省、湖北省和安徽省等地来源于鸡、鸭、鹌鹑和鸽子的样品中分离鉴定出16株H9N2亚型禽流感病毒.通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出分离株的全基因片段,并对其进行测序及遗传进化分析.序列分析显示,16株病毒HA基因裂解位点氨基酸序列为P-S-R/K-S-S-R,符合低致病性禽流感的分子特征；226位均为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特性.M2基因均出现了对金刚烷胺产生耐药性的N31S突变.不同宿主来源的H9亚型AIV的主要分子特征一致.全基因遗传进化分析表明16株H9N2亚型禽流感病毒全基因发生了3配体重组,即以F98亚系AIV为骨架,HA来源于Y280亚系,PB2和M基因来源于G1亚系,形成了2种新的基因型.因此,要加强对H9N2亚型禽流感病毒的监测,密切关注它的重组趋势.
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鸡源H9N2亚型流行性感冒病毒神经氨酸酶基因序列分析
对1996～2001年间自中国部分养鸡场发病鸡或死亡鸡分离鉴定的8株H9N2亚型禽流感病毒的神经氨酸酶基因(NA),进行了扩增和序列测定,并分析和比较了其核苷酸和氨基酸的同源性.结果表明,NA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为97.1%～99.8%和95.7%～99.7%,说明NA基因稳定遗传,高度保守.与A/chicken/HongKong/G9/97相比较,发现中国大陆鸡源H9N2分离株的神经氨酸酶蛋白在其茎部的第63、64、65位点上都有3个氨基酸的丢失,而与中国邻近的韩国、巴基斯坦鸡源H9N2分离株的神经氨酸酶没有氨基酸的丢失,因此这些部位的氨基酸丢失可初步认为是中国大陆H9N2流感病毒分离株的一个标记.系统进化树分析表明,该8株病毒的NA基因属于相同的进化分支,即A/duck/HongKong/Y280/97-like分支,尚未发现NA基因属于A/quail/HongKong/G1/97-like分支的分离株.中国的H9N2分离株与韩国、巴基斯坦等地的H9N2分离株隶属于不同的进化亚分支,说明H9N2亚型禽流感的发生与流行和地域有一定的相关性.
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H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列测定方法的建立
建立以Sanger测序为基础的H9N2亚型禽流感病毒全基因组测序方法.从GenBank和GISAID数据库中选取2000至2012年中国地区和中国国家流感中心病毒序列数据库中H9N2亚型禽流感病毒的8个片段基因序列,通过比对分析在相对保守的区域设计分段扩增引物,共16对.选用1株病例分离毒株和4株环境分离毒株对引物进行验证和进一步优化.优化后的16对引物能够有效扩增5株H9N2亚型禽流感病毒,仅个别反应出现非特异扩增.所有获得的目的片段仍能有效进行后续测序实验.建立了一种能够有效获得新型重配H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列的Sanger测序方法,为该病原分子流行病学研究和开展风险评估提供技术支撑.
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犬流感研究新进展
目前已发现多种亚型流感病毒可感染犬,包括H1、H3、H5和H9亚型.其中H3N8和H3N2亚型流感病毒可在犬群中流行,主要引起呼吸道症状.犬流感出现不仅威胁犬的健康,也给公共卫生带来了威胁.本文从生态学特征、病原性、诊断及预防控制等方面对犬流感的新研究进展进行了综述.
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2016-2017年南通市外环境样本禽流感监测
目的 了解南通市活禽养殖及销售环境中禽流感的携带情况及流行规律,为监控和防治人感染禽流感疫情提供基础资料.方法 采集活禽养殖场及交易市场外环境标本,运用RT-PCR技术检测甲型流感病毒核酸并分型.结果 602份外环境样本中,检出甲型流感阳性样本89份,阳性率为14.8％;其中33份样本可同时检出2种型别,合并感染的样本中以H7N9和H9N2合并感染居多,共20份,占合并感染总数的60.6％.65份样品中检出H7N9,40份样品中检出H9N2,13份样品中检出H9N9,4份样品中检出H5N1.多种家禽混合样本中禽流感检出率较高,宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭样本以及清洗禽类的污水中检出率较高.结论 H7N9和H9N2为当前本地区禽流感主要型别,流行季节以冬春季为主,对禽类市场、家庭养殖户和养殖场的管控仍需加强.
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H9N2禽流感病毒相关性新型人感染禽流感研究进展
2013年以来,中国出现人感染H7N9禽流感流行,疫情呈现出明显的季节性高发,随后局部地区出现人感染H10N8禽流感病例报告,两种病毒部分内部基因来自H9N2禽流感病毒,且均存在受体结合特性差异和蛋白关键位点变异.但从流行情况来看,人感染H9 N2和H10N8禽流感病例在人间均呈现高度散发,流行强度明显低于H7N9禽流感,未发生H7N9禽流感类似的家庭聚集性疫情.3种病毒产生流行病学差异的根本原因尚不明确,也不确定是否会再次重配产生新毒株引发新疫情.因此,应提高对新型禽流感病毒的认识,加强禽流感病毒的流行病学调查和病原学监测,以应对新型流感病毒可能引发的流感大流行.
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双重荧光实时RT-PCR技术鉴定H9N2亚型禽流感病毒
采用双重荧光实时RT-PCR技术,建立一种简便易行的HgN2亚型禽流感病毒的快速鉴定方法.通过比对GenBank甲型禽流感病毒H9N2亚型的HA和NA基因序列,设计特异性针对HA和NA的引物,分别选用FAM和JOE两种不同荧光标记探针,构建双重实时荧光PCR一步法反应体系,同时检测样本中的HA和NA基因.结果显示:扩增曲线和特异性实验结果显示,该体系具有很好的扩增效率,且仅特异性识别H9N2亚型AIV的HA、NA基因,与相关病毒或其他亚型无交叉反应.采用重组质粒pMD19-T构建HA、NA阳性质粒,10倍梯度稀释液为模板,进行荧光定量PCR.结果证实,本研究所建立的双重荧光定量RT-PCR体系敏感性能达到10个RNA拷贝数.采用本方法检测60份感染动物样品及60份环境样品,与传统PCR方法相比,检测敏感性提高了100倍;与病毒分离鉴定方法比较,二者的鉴定结果完全吻合.该方法具有特异性强、灵敏度高、快速易操作等优点,是H9N2亚型禽流感病毒鉴定的有效方法.
关键词： 禽流感病毒 H9N2 双重荧光实时RT-PCR技术 -
流感世界大流行的预测与应对措施
许多人认为,1997和1999年接连发生在我国香港的H5N1和H9N2亚型禽流感事件是下一次流感世界大流行(pandemic,简称大流感)到来的前奏.这无疑给我们敲响了警钟.本文以近年来流感病毒的研究进展为基础,结合作者所在研究小组的一些科研成果,对下一次大流感究竟会在何时、何地发生,病毒株会是哪一种亚型等问题作了预测;同时提出应对措施,加强流感的监测力度和投入是当务之急.
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湖南省2005-2017年人感染禽流感流行病学特征分析
目的 对湖南省发现的所有人感染禽流感病例进行流行病学特征分析,为防控策略的制定和调整提供科学依据.方法 对疫情概况、病例三间分布和暴露史进行描述,并报道家庭聚集性病例.结果 湖南省已发现人感染H5N1病例6例,人感染H5N6病例4例,人感染H7N9病例99例,人感染H9N2病例6例.病例主要发生在11月至次年4月.H5N1病例分布在5个市州,H5N6病例分布在4个市州,H9N2病例分布在3个市州,H7N9病例分布在13个市州.4种亚型人感染禽流感在男性和女性中均有发生.H5N1、H5N6和H9N2病例年龄较小,H7N9病例以中老年为主.51.0％的病例为农民.95.5％的病例有禽类或禽类污染的环境暴露史.湖南省已发现H5N1、H5N6疑似家庭聚集性病例和H7N9确诊家庭聚集性疫情.结论 禽类和禽类环境是人感染禽流感病毒的主要来源,开展环境监测有利于疾病的预测预警.禽流感病毒存在有限非持续的人传人现象,密切监测病毒基因变化,对密切接触者实行医学观察,对于防止二代病例发生有重要意义.
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长沙市首例人感染H9N2禽流感病毒的HA基因序列特征分析
目的 对长沙市首例人源H9N2禽流感病毒进行病毒分离与HA基因特征序列分析.方法 用细胞培养法在可疑病例标本中分离H9N2禽流感病毒毒株,RT-PCR方法扩增禽流感病毒HA基因全长并测序,对所得结果进行氨基酸同源性与进化树分析.结果 分离的毒株命名为A/Hunan/44558/2015,GenBank登录号为KX595338.毒株存在2处新发突变位点,HAT197D、HAD483N,第313位出现与湖南省人源H9N2毒株A/Lengshuitan/11197/2013相同的糖基化位点NCS.与A/Wild Chicken/Shanghai/C1/2014和A/Envionnment/ Hunan/28028/ 2014的同源性分别为97.9％和97.6％.进化树分析分离的毒株处于Y280分支.结论 发现病毒2处新的基因突变位点,与2014年湖南省环境源毒株同源性较高,存在基因交换重组,从分子水平揭示病毒HA基因的进化趋势.
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H9N2亚型禽流感病毒HA基因的原核表达及其免疫反应性分析
目的 对禽流感病毒HA基因进行原核表达并对其产物进行免疫反应性分析.方法 采用PCR方法扩增禽流感病毒A/Ck/GS/2/99(H9N2)的HA基因(1 723bp);并将该片段克隆至pET-28 a(+)质粒,构建重组质粒pET-HA, 用该重组质粒转化E.coli BL 21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.7 mmol/L的IPTG诱导表达7h.结果 成功构建了表达载体pET-HA,该载体能高效表达HA蛋白,相对分子质量约62kDa,在约62kDa处出现一条明显的特异性蛋白条带.结论 成功表达了禽流感病毒HA蛋白,该蛋白纯化产物能与H9亚型的AIV鸡血清发生特异性反应.
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我国鸡源与人源H9N2亚型流感病毒聚合酶PB1基因的关系分析
目的通过对1996～2001年自我国部分养鸡场分离鉴定的8株H9N2亚型鸡流感病毒聚合酶PB1基因测序,了解鸡源与人源H9N2 亚型流感病毒聚合酶PB1基因的关系.方法病毒在鸡胚中传代,自收获的尿囊液提取RNA,通过RT-PCR,扩增聚合酶PB1基因片段,并进行序列测定,测序结果采用PHYLIP软件在Internet 网上分析处理,并用TreeView软件绘制系统进化树.结果 8株H9N2亚型鸡流感病毒聚合酶PB1基因的核苷酸同源性为97.4%～99.7%,与三株人源H9N2 病毒A/Guangzhou/333/99、A/Hong Kong/1073/99、A/Hong Kong/1074/99的同源性分别为90.6%～91.9%、90.4%～91.5%、90.2%～91.3%.该8株鸡源H9N2病毒PB1基因属于相同的进化分支,即A/duck/Hong Kong/Y280/97-like分支,而与该3株人源株H9N2 病毒属于不同的进化分支;尚未发现PB1基因属于A/quail/Hong Kong/G1/97或A/duck/Hong/Y439/97分支的鸡源分离株.结论在我国养鸡业流行的H9N2病毒分离株与目前已分离的人源株H9N2病毒其PB1基因属于不同的进化亚分支,人源株H9N2病毒PB1基因不是来源于鸡源H9N2病毒.
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成都市首例人感染H9N2禽流感病例调查与分析
目的 总结分析成都市首例人感染H9N2禽流感病例流行病学调查结果,为今后科学应对类似疾病提供参考.方法 采用现场流行病学和实验室检测相结合的方法,收集病例临床和流行病学资料,采集并检测病例、相关环境等标本,分析可能的感染来源、流行病学特征和临床特征.结果 病例发病前10天内有禽类接触史,其标本经检测为H9N2禽流感病毒阳性;病例长期患有慢性疾病,此次发病后进展较快,经积极治疗无效后死亡;其居住环境、家中剩余鸡肉和周边市场检出H9禽流感阳性.结论 该病例感染来源为周边市场感染H9N2禽流感病毒的鸡;对严重基础疾病者,感染H9N2禽流感病毒可导致重症或诱发死亡.
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H9N2亚型禽流感病毒非结构蛋白基因的克隆及原核表达
目的:为防控禽流感在家禽和水禽中的流行,从而控制对人的感染,探讨一种能区别自然感染鸡和疫苗免疫鸡的鉴别诊断方法.方法:采用RT-PCR方法扩增禽流感病毒H9N2的NS1基因(660 bp);并将该片段克隆至pET-28(a)质粒中,构建重组表达载体pET-NS1,转化E.coli BL 21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.7 mmol/L的IPTG诱导表达6 h,并应用Western-blot方法分析表达产物的反应原性.结果:pET-NS1载体能高效表达NS1蛋白,相对分子质量约25 000,纯化产物能与该亚型的AIV活病毒感染鸡血清发生特异性反应而与灭活病毒免疫鸡血清不发生反应.结论:NS1基因在大肠埃希氏菌中的表达产物可用来鉴别禽流感免疫鸡群和感染鸡群.
