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EB病毒LMP1 CTAR1、CTAR2的表达促使人鼻咽癌细胞HNE2增殖
探讨EB病毒LMP1不同结构域在鼻咽癌中的致瘤作用,为阐明鼻咽癌分子发病机理,寻找治疗鼻咽癌的分子靶提供实验依据.以转染空白载体为对照,利用电穿孔转染方法,建立稳定表达LMP1不同突变体的鼻咽癌细胞系HNE2-LMP1(1～815)、HNE2-LMP1(1～231)、HNE2-LMP1△187～351,并以这些细胞系为材料,用MTT法检测增殖期活细胞,BrdU掺入法检测细胞增殖状况,比较各组细胞的软琼脂集落形成率和裸鼠成瘤能力,以观察LMP1不同的结构域对鼻咽癌细胞生长的影响.LMP1(1～231)和LMP1△187～351在体外明显促进HNE2细胞增殖,HNE2-LMP1(1～231)、HNE2-LMP1△187～351平均吸光度(A)比值、BrdU掺入率、软琼脂集落形成率均高于HNE2-pSG5与HNE2(P＜0.01),而HNE2-LMP1(1～187)与HNE2-pSG5、HNE2相比,这些指标无明显差别.HNE2-LMP1△187～351和HNE2-LMP1(1～231)的裸鼠成瘤潜伏期、倍增时间与平均瘤重明显高于HNE2-pSG5鼻咽癌细胞系,其差异有显著的统计学意义(P＜0.05).而HNE2-LMP1(1～187)、HNE2-pSG5和HNE2鼻咽癌细胞系在潜伏期、倍增时间与平均瘤重方面两两比较,差异无显著的统计学意义(P＞0.05).EB病毒LMP1 CTAR1和CTAR2对HNE2细胞生长有明显促进作用,提示EB病毒LMP1可能在鼻咽癌的发生发展中起着重要的作用.
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EBNA1/IgA血清学状态及动态变化相关的鼻咽癌发病风险研究
分析EB病毒核抗原1-IgA抗体(EBNA1-IgA)的不同状态及变化趋势,并探讨人群的鼻咽癌发病风险.检测中山市小榄镇2009～2010年入组的16 695位30～59岁参加鼻咽癌筛查人群血清,按首次筛查和随访中EBNA1/IgA抗体状态将筛查人群进行分组,对照组为未参加筛查的两个镇区同年龄组人群,利用中山市肿瘤登记系统、死因登记系统随访至2014年12月31日,分析各组人群的鼻咽癌发病风险.与对照组相比,基线抗体阴性人群的发病风险比为0.46(95％CI 0.25～0.86),基线抗体阳性人群的发病风险比为31.1(95％CI 21.0～46.1);复查人群中上升组、持续阳性组的发病风险比分别为82.4(95％CI 36.1～188.2),26.4(95％CI 12.3～52.5),而下降组和波动组中未见病例.EBNA1/IgA基线阳性人群在5年中有很高的发病风险,复查人群中上升组和持续阳性组也有很高的发病风险,下降组和波动组发病风险较低.
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EB病毒DNA聚合酶基因的表达与纯化及其在鼻咽癌病人诊断中的应用
以Epstein-Barr病毒(EBV)DNA聚合酶为抗原,建立了简便、快速、敏感和特异的鼻咽癌诊断方法.构建原核表达载体pRSET-DNA聚合酶及其亚克隆pRSET-A1和pRSET-A2,在BL21(DE3)中表达的产物,经Western-blot检测其抗原性并用于检测鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)病人血清中的抗体.在NPC病人血清中存在抗EB病毒DNA聚合酶的IgG抗体,并证明DNA聚合酶的抗原性主要集中于后2/3片段(A2)上.Western-bolt检测A2/IgG抗体的敏感性和特异性分别为80%和100%.对46份NPC病人血清和46份非NPC头颈癌症病人血清,用ELISA检测A2/IgA,敏感度为89%,特异度为93%.初步建立了ELISA检测NPC病人血清中A2/IgG抗体的方法,获得较高的敏感性和特异性.
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福州市体检人群EB病毒VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG调查分析
目的 调查EB病毒VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG在福州体检人群中的分布规律.方法 采用ELISA法检测2010年8月至2014年9月13433例体检者血清VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG,统计其阳性率及不同性别、年龄组的区别,采用圆分布资料平均角假设检验分析阳性检出集中趋势.结果 福州地区体检人群血清VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG阳性率比较,差异有统计学意义(P ＜0.001),但三者的性别差异无统计学意义(P＞0.05),三者阳性率及VCA-IgA临界百分率随着年龄的增长而生高,＞60岁年龄组阳性率明显增高(P＜0.05),而EA-IgA临界率则随着年龄的增长而降低;VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG无显著集中趋势(P＞0.05).结论 中老年人应联合检测VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG三项指标并定期复查,以利于鼻咽癌高危人群早期发现.
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五厂家EB病毒抗体检测试剂盒血清学诊断鼻咽癌的比较
目的 通过比较EB病毒抗体检测试剂盒血清学诊断鼻咽癌的准确性和检测结果的一致性,为试剂盒在临床上的使用选择和性能改进提供依据.方法 使用五厂家的EB病毒衣壳抗原IgA和IgG抗体检测试剂盒(VCA IgA和VCA IgG试剂盒)、核抗原I IgA和IgG抗体检测试剂盒(EBNA1 IgA和EBNA1IgG试剂盒)、早期抗原IgA和IgG抗体检测试剂盒(EA IgA和EA IgG试剂盒)以及Zta IgA抗体检测试剂盒,分别检测33例鼻咽癌患者(NPC)、30例健康体检者(HD)和41例非鼻咽癌的其他肿瘤患者(NNPC)血清或血浆样本.结果 A厂家的VCA IgA试剂盒灵敏度高于其他厂家同品种试剂盒,但对于NNPC特异度低(36.6％);而D厂家VCA IgA试剂盒的特异度高(97.6％),且对HD的特异度均大于90％.B和D厂家的EBNA1 IgA试剂盒间阳性、阴性符合率分别为92.1％和100.0％.A和E厂家的EA IgA试剂盒的灵敏度均较低而特异度高,试剂盒间阳性符合率低(39.4％),阴性符合率高(98.6％);而VCA IgG试剂盒的灵敏度高但特异度低.A和C厂家的EBNA1IgG试剂盒的灵敏度高(100.0％,97.0％)但特异度低(3.3％,13.3％).C厂家EA IgG试剂盒检测所有样本结果均为阴性.结论 五个不同厂家VCA LgA、EA IgA试剂盒诊断鼻咽癌的准确性和检测结果的一致性存在差异,特别是A厂家和其他国内厂家同品种试剂间差异明显,需根据临床目的进行选择.三家国产VCA IgA试剂盒的灵敏度需进一步提高.相反,EBNA IgA试剂盒诊断鼻咽癌的准确性和结果一致性较好.单独使用VCA IgG和EBNA1 IgG试剂盒血清学诊断鼻咽癌的特异度差,其判读界值可能需根据检测且的进行调整.
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探讨EB病毒抗体对鼻咽癌筛查和疗效的临床价值
EB病毒(epstein-barr virus,EBV)属疱疹病毒科,为线形双链DNA病毒,人类是EBV唯一天然宿主.EBV在口咽部上皮细胞内增殖,然后感染淋巴细胞.据报道,我国95％以上人群在3～5岁时已感染了EBV[1].这些被感染的B淋巴细胞大量进入血液循环而造成全身性感染,并可长期潜伏在人体淋巴组织中,当机体免疫功能低下时,潜伏的EBV活化形成复发感染.鼻咽癌与EBV感染的关系十分密切,绝大多数鼻咽癌患者中均具有较高的抗EBV抗原的抗体[2].
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EB病毒膜抗原BLLF1基因转基因小鼠的制备
将Epstein-Barr病毒(EBV)膜抗原(MA)BLLF1基因用显微注射法导入昆明种小鼠受精卵的雄性原核以制备转基因小鼠模型.共注射受精卵450枚,存活291枚,植入假孕母鼠的输卵管使之发育,产出仔鼠12只.注射后卵的存活率和仔鼠出生率为65%和4%.用PCR法分析显示5只有BLLF1基因整合,整合率为42%.结果表明携带BLLF1基因的转基因小鼠已经制备成功.该转基因小鼠可作为研究EB病毒致病机理,特别是与自身免疫病关系的动物模型.
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RAG基因与B细胞淋巴瘤
重组活化基因(RAG)在介导抗原受体决定区复杂多样的DNA重组中发挥着重要作用,并可通过:1)RAG综合体识别和切断BCL-2基因致t(14,18)易位；2)RAG1/2协同诱导激活型胞啶脱氨酶作用引起染色体易位；3)RAG2蛋白降解异常导致V(D)J异常重排；4)EB病毒感染导致RAG1/2基因的再表达等方面促进淋巴瘤的发生.
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11O例Epstein-Barr病毒感染及其相关疾病分析
目的 探究EB病毒与疾病的相关性.方法 对兰州市城关区人民医院经免疫酶染色法测定EBV IgG、IgA及IgM/VCA任一项或一项以上阳性的110例EB病毒感染者的相关疾病进行回顾性分析.结果 在110例EB病毒感染所涉及到的18种相关疾病中,以呼吸系统疾病为多,占32.73%.其次是血液、消化、心血管及单核吞噬细胞系统等疾病.结论 EB病毒感染可导致机体多系统损害.
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EB病毒病毒壳抗原、核心抗原重组蛋白的制备及在鼻咽癌血清学诊断中的应用
目的 探讨EB病毒(EBV)病毒壳抗原(VcA)-BFRF3和核心抗原(NA)1-BKRF1重组蛋白在鼻咽癌(NPC)血清学诊断中的应用.方法 以EBV DNA为模版,用PCR扩增目的基因BFRF3和BKRF1,捅入大肠杆菌表达载体pET.51b后转化大肠杆菌JM109,诱导重组蛋白表达.表达产物经SDS-PAGE、免疫印迹分析鉴定,金属螯合亲和层析纯化后,分别制备用BFRF3、BKRF1及BFRF3,BKRF1作为包被抗原的ELISA试剂,检测NPC患者和正常人群EBV-IgA抗体.结果 大肠杆菌高效表达BFRF3和BKRF1重组蛋白,表达产物相对分子质量分别为20000和29000,均有良好免疫反应性;BKRF1的NPc诊断灵敏度(71.20%,178,250)明显高于BFRF3(64.80%,162,250)(P<0.01),但两者NPc诊断特异性差异无统计学意义(P>0.05);相对于单独应用一种抗原,联合两种重组抗原的方法诊断NPC具有高灵敏度(84.80%,212,250)和相对低的特异性(82.00%,328,400)(P<0.01).结论 NA1-BKRF1诊断NPC的灵敏度高于VCA-BFRF3,两种抗原联合使用,可提高诊断灵敏度,但特异性明显降低.
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EB病毒潜伏膜蛋白1羧基端活化区域2蛋白特异性结合短肽的筛选
目的 利用噬菌体12肽库筛选能与EB病毒潜伏膜蛋白1(LMPl)羧基端活化区域(CTAR)2蛋白特异性结合的短肽.方法 用纯化的CTAR2蛋白筛选噬菌体12肽库.通过夹心ELISA方法分析噬菌体克隆与CTAR2蛋白的亲和力.利用硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定,并对阳性克隆进行测序及序列分析.结果 CTAR2蛋白对噬菌体12肽库进行3轮筛选,第3轮的产率是第1轮的143倍[(3.0×10-6)/(2.1×10-8)],噬菌体克隆得到较好的富集.ELISA方法提示筛选出来的噬菌体克隆能与CTAR2蛋白高效结合.硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100％.测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列:GLKHHSPGLLLY.结论 筛选出与CTAR2蛋白特异性结合的短肽序列GLKHHSPGLLLY,为研究LMP1致瘤机制和开发拮抗LMP1蛋白的小分子短肽类药物提供实验依据.
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血清VCA-IgA对鼻咽癌的诊断价值
目的探讨血清VCA-IgA与鼻咽癌的关系.方法测定血清VCA-IgA检测所得结果,并对临床怀疑鼻咽癌者作病理活检确诊后进行比较,从而说明测定血清VCA-IgA阳性特别注意要排除鼻咽癌,要定期复查.防止漏诊.在高危人群中检测血清VCA-IgA筛选鼻咽癌作用十分重要.
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维吾尔族鼻淋巴瘤25例临床病理分析
目的探讨鼻淋巴瘤在新疆维吾尔族人群中的临床及病理特点.方法应用组织病理学、免疫组化、原位杂交技术观察25例鼻淋巴瘤的临床及病理形态学特征.结果本组25例中NK/T细胞淋巴瘤17例,非特殊外周T细胞性淋巴瘤4例,B细胞性淋巴瘤4例.其中17例有EBV感染.结论新疆维吾尔族人鼻淋巴瘤以NK/T细胞型为主,大多数有EBV感染.
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胃淋巴上皮瘤样癌15例临床病理分析
目的 探讨胃淋巴上皮瘤样癌(LELC)的临床病理学特点.方法 分析15例胃淋巴上皮瘤样癌的临床病理学特点,免疫组化法检测其免疫表型,比较其与相同分化程度和病理分期的非淋巴上皮瘤样胃腺癌的淋巴结转移率和预后.原位杂交法检测肿瘤组织中EB病毒的感染情况.结果 15例胃淋巴上皮瘤样癌均有显著的淋巴样间质,即大量淋巴细胞、浆细胞弥漫浸润,淋巴滤泡形成,癌细胞呈条索状、不规则的腺管或单个散在分布于大量淋巴细胞背景中.免疫组化:腺上皮细胞CK8/18、AE1/AE3和EMA(+),间质淋巴细胞CD20和CD3(+).15例均无胃周围淋巴结转移,与同病理分期(T4aN0期)的非淋巴上皮瘤样胃低分化腺癌比较,差异显著(P＜0.05).3例肿瘤细胞EBER(+).结论 胃淋巴上皮瘤样癌是一种罕见类型的低分化腺癌,部分有EB病毒感染,具有特殊的临床病理学特点.
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老年人EBV阳性的弥漫性大B细胞性淋巴瘤伴显著类上皮肉芽肿反应及T细胞克隆性扩增
目的 探讨老年人EBV阳性的弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)的组织形态特征、免疫组化、诊断与鉴别诊断、治疗与预后.方法 对1例淋巴结发生的老年人EBV阳性的DLBCL行HE和免疫组化染色,同时行TCR基因和免疫球蛋白基因的克隆分析.结果 患者男性,60岁.颈部、腋窝及锁骨上窝淋巴结肿大3个月.组织学表现为富于组织细胞与T细胞的大B细胞性淋巴瘤(THRBCL),肿瘤显示NF-κb途径激活,同时伴有显著类上皮反应及T细胞克隆性扩增.结论 老年人EBV阳性的DLBCL是新近发现的一类EBV阳性的单克隆性B淋巴细胞增生性疾病,其临床和病理特征独特,需与伴有肉芽肿反应的EBV阳性的淋巴组织增生性疾病或淋巴瘤进行鉴别,本例同时伴有显著类上皮肉芽肿反应和克隆性T细胞扩增非常罕见.
关键词： EB病毒 老年人EBV阳性的DLBCL 临床病理 -
老年人EBV阳性的弥漫性大B细胞性淋巴瘤临床病理观察
目的 探讨EB病毒阳性的老年人弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)的组织形态特征、免疫组化、诊断与鉴别诊断,观察治疗及预后情况.方法 对2例老年人EBV阳性的DLBCL行HE和免疫组化染色观察,收集临床资料并随访.结果 患者年龄分别为58岁和72岁,无免疫缺陷及淋巴瘤病史.病理改变主要为大小差别较大的异型淋巴细胞弥漫浸润,散在少数R-S样细胞,可见广泛的地图样肿瘤性坏死及血管中心性浸润.免疫组化显示异型肿瘤细胞CD20弥漫强(+),80％ ～ 90％肿瘤细胞胞核EBV原位杂交呈中～强(+).随访3～6个月,1例死亡.结论 老年人EBV阳性的DLBCL罕见,是近正在被逐渐认识的新淋巴瘤类型,其临床和病理特征独特,诊断需与淋巴瘤样肉芽肿和EBV阳性的霍奇金淋巴瘤鉴别.
关键词： EB病毒 老年人EBV阳性的DLBCL 临床病理 -
原发性睾丸NK/T细胞淋巴瘤3例临床病理观察
目的 探讨原发性睾丸NK/T细胞淋巴瘤的临床病理特点、诊断与鉴别诊断及预后.方法 收集3例原发性睾丸NK/T细胞淋巴瘤的临床资料,观察其组织学形态、免疫组化,并复习相关文献,探讨该肿瘤的病理诊断与鉴别诊断要点.结果 3例均为老年男性,发生于左、右及双侧睾丸各1例.镜下睾丸正常结构破坏,残余曲细精管间距离增宽,肿瘤细胞弥漫生长,可见明显的嗜血管现象;肿瘤细胞由小、中、大混合组成,核呈圆形、不规则形、杆状,胞质透亮或浅嗜酸性,核分裂象易见.免疫组化:瘤细胞CD2、胞质型CD3、CD43、CD45RO、CD56、TIA-1和perforin(+),CD57、CD20、CD79a、PLAP、CK、MPO、bcl-2和TDT(-).原位杂交EBV编码RNA(+).结论 原发性睾丸NK/T细胞淋巴瘤罕见,病情进展快,预后差.结合组织学形态及免疫组化染色CD2、CD3和CD56及原位杂交EBV编码RNA检测有助于诊断.
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原发性肺淋巴上皮瘤样癌临床病理观察
目的 探讨原发性肺淋巴上皮瘤样癌(LELC)的临床病理学特征、诊断与鉴别诊断、治疗与预后.方法 对1例LELC组织行HE及免疫组化EnVision两步法染色,结合相关文献对LELC进行回顾性分析.结果 患者左肺上叶肿物,镜下肿瘤组织无腺癌及鳞状细胞癌分化特征.癌细胞呈合胞体状聚集成堆,细胞核呈空泡状,核仁明显红染,其间可见不同程度淋巴细胞、浆细胞浸润及纤维性间质包绕.免疫组化:癌细胞CK强(+),CK7、CK5/6、TTF-1、CD31、CD79a、CD68、CD34、CD3、CD20、HMB45均为(-),Ki-67指数为60％,原位杂交检测EBV小RNA(EBER)为阳性.结论 LELC与EB病毒感染有关,病理组织学及免疫组化是其主要确诊方法.该病对化疗较敏感,宜采用手术为主的多方法综合治疗,预后较好.
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EBV阳性T细胞淋巴组织增殖性疾病3例临床病理观察
目的 探讨EBV阳性T细胞淋巴组织增殖性疾病的临床病理特征.方法 报道3例EBV阳性T细胞淋巴组织增殖性疾病,从临床表现、病理形态学、免疫表型、EBER原位杂交和T细胞受体基因重排等方面进行研究,并结合相关文献进行讨论.结果 1例成人型系统性EBV阳性T细胞淋巴组织增殖性疾病以发热起病,肝脾受累明显,肝窦和脾窦内小淋巴细胞浸润伴较多嗜血细胞,免疫组化示浸润淋巴细胞以T细胞为主,EBER(+),基因重排未见单克隆条带.2例种痘水疱病样淋巴瘤以面部、躯干及四肢反复出疹样皮损伴破溃、痂皮形成为主要表现,真皮及皮下脂肪组织内见小～中等大小淋巴细胞浸润,以血管中心性浸润为特征,表达T细胞抗原和EBER,2例均显示TCR受体基因单克隆性重排.结论 EBV阳性T细胞淋巴组织增殖性疾病临床表现不特异,组织学易误诊为炎性反应性病变或嗜血细胞综合症,T细胞受体基因重排能够帮助明确本类疾病的恶性本质.
关键词： T细胞淋巴组织增殖性疾病 EB病毒 临床病理特征 免疫组化 T细胞受体基因重排 -
鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤中EB病毒感染与survivin的关系
目的 讨论EB病毒感染与survivin在鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤中的相关性.方法 ①用原位杂交方法检测57例鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤组织中EB病毒的表达;②用免疫组化法EnVision二步法检测57例鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤中LMP1和survivin的表达.结果 ①57例鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤中EB病毒、LMP1和survivin阳性率为80.7％(46/57)、56.1％(32/57)和75.4％(43/57);②LMP1的表达与survivin的表达有相关性(P＜0.05),而EB病毒与survivin表达无显著相关性(P＞0.05).结论 鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤EB病毒感染与survivin无显著相关性.
关键词： EB病毒 survivin 鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤
