影响中药质量的七大因素

数千年来,中药对保障国人的健康和民族的繁衍昌盛发挥着巨大的作用.中药质量的优劣是关系到临床疗效和中药国际化的大问题.在此,从以下几个方面简单概括影响中药质量的因素.品种中药的品种真伪、质量优劣都能影响临床疗效,有的甚至危害人民的生命安全.中药的发展和应用经历了长期的实践过程.由于各地用药习惯、自然条件等不同,使中药一药多源、同名异物、同物异名、外形相近药效不同的现象十分常见.如白附子,历代本草都为毛茛科植物黄花乌头的块根入药,而后来很多地方用天南星科植物独角莲的块根作白附子用,两者疗效明显不同;五加科的人参,功能大补元气、强心固脱、生津安神,市场上曾有用商陆科植物商陆的根冒充,一旦误用,极为有害;贯众,历代本草贯众的记载不尽相同,据调查,全国以贯众之名药用的植物有11科、18属、58种之多,品种不同,质量常有差异.

商陆中具环氧合酶抑制作用的脑苷类

美商陆培养基中的三萜苷

商陆皂苷甲泻下作用研究

目的：通过复方地芬诺酯致便秘小鼠排便实验及小肠推进实验，研究商陆皂苷甲（EsA）的泻下作用。方法向复方地芬诺酯致便秘小鼠腹腔注射不同浓度 EsA 并灌服墨汁，每2 h收集一次粪便，连续收集10 h，记录每只小鼠首粒黑便出现时间，粪便阴干后称量每一时段内的排便量并计算总排便量；向复方地芬诺酯致便秘小鼠腹腔注射不同浓度 EsA 并灌服墨汁，给药25 min 后脱椎处死，测量并计算小肠推进率。结果与模型对照组比较，EsA 高、中剂量组小鼠首粒黑便出现时间缩短，总排便量增加，差异有统计学意义（P <0.05）。小肠推进实验中，EsA 高、中、低剂量组小鼠小肠推进率与模型对照组比较差异均无统计学意义（P >0.05）。结论排便实验结果表明：高、中剂量的 EsA 对复方地芬诺酯致便秘小鼠有一定的泻下作用；小肠推进实验结果表明：EsA 对复方地芬诺酯致便秘小鼠没有促进小肠推进的作用。

商陆醋炙前后化学成分和药效比较

目的:比较商陆醋炙前后化学成分和药效的变化情况.方法:按2010年版《中国药典》商陆项下醋炙法制备醋商陆.采用硫酸-香草醛比色法测定总皂苷含量;HPLC-ELSD测定商陆皂苷甲含量,色谱条件为Lichrospher-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.4％乙酸(65∶ 35),流速1.0 mL·min-1,柱温40℃,进样量20 μL,ELSD条件为漂移管温度90℃,载气流速2.5L·min-.SD大鼠随机分成生理盐水组、阳性药组(氢氯噻嗪)、生商陆组和醋商陆组,以生理盐水形成盐水负荷模型,用大鼠代谢笼法观察大鼠0～5h尿量;ICR小鼠随机分成生理盐水组、阳性药组(芒硝)、生商陆组和醋商陆组,采用墨汁推进法比较生商陆和醋商陆对小鼠小肠推进率的影响.结果:商陆经醋炙后总皂苷质量分数由1.66％升至1.91％,商陆皂苷甲质量分数由0.64％增至0.82％,大鼠排尿量增多,小鼠小肠推动作用减弱.结论:商陆醋炙后总皂苷和商陆皂苷甲含量均升高,泻下作用缓和,长于利尿逐水.

商陆药理作用及毒性研究进展

查阅了近20年有关商陆药理效应,毒性作用及不良反应的报道.药理研究发现具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫等多重疗效,临床主要用于治疗血小板减少性紫癜、急慢性肾炎、肾水肿、银屑病等病症.其在抗炎和免疫方面的作用尤为突出,多糖和皂苷类成分能够广泛调节多种细胞因子.目前已有关于商陆急性中毒的临床报道,表现为不同程度的交感神经兴奋和胃肠道刺激症状,甚至可能引起死亡.毒性表现涉及消化、中枢神经、心血管、呼吸等多系统;动物实验也证实其毒性,甚至有潜在突变性.为此,在商陆的研究中需要特别关注毒性与减毒的研究,以达到临床使用安全有效的目的.

商陆不同炮制品对大鼠的利尿作用及其对睾丸、肾脏水通道蛋白的调节作用

目的:研究商陆生品及不同炮制品的利尿作用,初步探究其利尿作用机制.方法:采用水负荷大鼠模型,将80只SD大鼠随机分为空白组、模型组、商陆皂苷甲(EsA)组、生品组、不同炮制品(醋炙、醋煮、水煮、清蒸)组,每组10只.同时进行正常状态大鼠利尿实验,将70只SD大鼠随机分为空白组,EsA组,生品组及不同炮制品(醋炙、醋煮、水煮、清蒸)组,每组10只.各给药组的剂量分别为0.005,1.8,1.8,1.8,1.8,1.8 g·kg-1,通过给予水负荷模型大鼠及正常大鼠不同的药物,分别测定排尿量,并进行水负荷大鼠大鼠睾丸水通道蛋白9(AQP9)因子表达、肾组织AQP2和AQP4因子的表达试验及正常大鼠睾丸AQP9因子的表达试验.结果:综合6h总尿量,EsA,商陆生品及不同炮制品均对水负荷大鼠表现出利尿作用;对于正常大鼠仅醋煮品表现出利尿作用.聚合酶链式反应(PCR)技术中对于水负荷大鼠,AQP2 mRNA表达均显著降低,AQP4和AQP9 mRNA表达大部分无显著变化;对于正常大鼠,醋煮组AQP9 mRNA表达显著降低,其余各组无显著变化.结论:商陆对于水负荷大鼠表现出利尿作用,但对正常大鼠利尿作用不明显;商陆的利尿作用可能与AQP2和AQP9 mRNA表达下降有关.

商陆水溶性浸出物、商陆皂苷甲含量变异规律与优良种源筛选

目的:为商陆种质资源利用与优良品种选育提供依据.方法:收集全国主分布区商陆野生种质资源23份,考察其经纬度、海拔、农艺性状,用热浸法测定块根水溶性浸出物含量,用HPLC-ELSD法测定块根商陆皂苷甲含量,用DPS 6.55,Excel 2003软件进行单因素方差分析、相关性分析、主成分分析与聚类分析.结果:商陆不同种源间农艺性状存在显著差异(P＜0.05),其中福建、广两种源生长势好,植株高大,茎粗,叶片大而多狭长,块根产量高;不同种源间水溶性浸出物、商陆皂苷甲含量也存在显著差异(P＜0.05),2个成分变异规律相似,与种源地、经纬度、海拔、农艺性状存在相关性,其中陕西、浙江种源含量较高;与株高、茎粗、叶片长、叶片宽、叶柄长、块根纵径、块根横径、块根产量呈负相关关系,与根形指数、纬度、海拔呈正相关关系,与叶形指数、经度相关性较低;12个生长与成分性状指标可简化为5个主成分,累计贡献率达93.611 9％;23个种源可划分为5类.结论:高纬度、高海拔种植商陆有利于块根中水溶性浸出物与商陆皂苷甲含量积累;共筛选出5个农艺性状优良种源与4个高成分含量优良种源,可作为高产、优质商陆品种选育备选种质.

商陆致大鼠肾损伤的代谢组学研究

目的:通过代谢组学研究大鼠给予商陆后尿液代谢产物的变化,探讨商陆肾损伤机制.方法:大鼠随机分为商陆组和对照组,每天灌胃给予20g/kg商陆或纯水,连续49d.采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)检测20、48d尿液中代谢产物变化.结果:给药20d后,商陆组与对照组大鼠的尿液代谢谱明显分开.与对照组比较,商陆可引起尿液中α-酮戊二酸、柠檬酸、苹果酸等显著上升,而异亮氨酸、肌酐、甘氨酸等则显著降低.其中α-酮戊二酸等产物的上升提示商陆可能通过三羧酸循环的紊乱,引起线粒体、细胞凋亡.甘氨酸的降低可能与氧化应激相关.结论:大剂量商陆可引起大鼠体内代谢产物的明显变化,其肾损伤机制可能是通过影响三羧酸循环、氨基酸代谢等通路,进而引起氧化应激反应及细胞凋亡的发生.

商陆中商陆皂苷A的含量测定

目的:利用HPLC-ELSD测定不同产地商陆药材中商陆皂苷A的含量以控制其质量.方法:采用HPLC-ELSD含量测定法,Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以甲醇-水-冰醋酸(68:31:1)为流动相.结果:商陆皂苷A在4.05～20.24 μg呈线性,回收率为98.8%,RSD 1.4%.测定11个不同来源的药材,其商陆皂苷A的含量在0.32%～1.11%.结论:本法可快速、准确测定商陆药材中商陆皂苷A含量,可用于商陆药材的质量监控.

商陆提取物醋制前后毒性作用的比较研究

目的:提取分离获得商陆的毒性成分,并比较其醋制前后毒性的变化.方法:采用黏膜刺激性反应、小鼠腹腔炎症模型及离体巨噬细胞释放NO模型,比较商陆毒性成分醋制前后的致炎毒性变化.结果:商陆毒性成分具有显著的致炎毒性,可导致家兔眼结膜水肿、小鼠腹腔渗出液中PGE2含量升高以及巨噬细胞释放NO含量升高；经醋制后,对家兔眼结膜刺激性减弱,使小鼠腹腔渗出液中PGE2含量降低、巨噬细胞释放NO含量降低.结论:醋制法能够降低商陆毒性成分的毒性作用.

尿液NGAL,KIM-1,IL-18在商陆所致的大鼠肾损伤中的变化特征及其联合检测的意义

目的:探讨肾损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤因子-1(KIM-1)、白介素-18(IL-18)在商陆所致的大鼠肾损伤中的变化特征及其联合检测的意义.方法:Wistar大鼠随机分为商陆水煎液高、低剂量(生药40,20g· kg-1 ·d-1)组和对照组,连续灌胃35 d.于第7,14,21,28,35,42 d采集血/尿样,并分批解剖处理.生化分析仪检测血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、血肌酐(CR),尿液uTP,uALB含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿液NGAL,KIM-1,IL-18浓度.光镜/电镜下观察肾脏病理组织形态学改变.ROC曲线比较各血清/尿液指标及联合检测的曲线面积.结果:给予大鼠40,20 g·kg-1商陆水煎液35 d可致肾损伤,以肾小管上皮细胞变性、蛋白管型为主要病理表现,恢复期部分损伤可逆.与对照组相比,各剂量组BUN,CR,uTP多呈下降趋势,第21天uALB显著升高且持续至给药末.NGAL,KIM-1,IL-18第7天即开始升高,第14天起各剂量组均有显著性差异(P＜0.01),恢复期高剂量组KIM-1仍有显著变化.ROC分析三者的曲线面积为0.846,0.837,0.863(P＜0.01),远远高于BUN,CR等.而联合检测的面积达0.947.结论:尿液NGAL,IL-18,KIM-1能在一定程度上预测或提示肾损伤的发生、发展,具有较高的敏感性和部位特异性.其联合检测更能提高检验效能.

商陆中皂苷类化学成分研究

综合采用柱色谱方法对商陆Phytolacca acinosa的正丁醇部分化学成分进行研究,并利用现代波谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定.从正丁醇部分共分离得到6个化合物,分别鉴定为商陆皂苷U(1),商陆皂苷A(2),E(3),H(4),phytolaccasaponin N-2 (5),phytolaccasaponin N-3 (6).其中化合物1为新的三萜皂苷类化合物,命名为商陆皂苷U,化合物5,6首次从该植物分离得到.

醋制对商陆及商陆正丁醇部位中皂苷类成分含量的影响

为研究醋制对商陆及商陆正丁醇部位皂苷类成分的影响,比较商陆中主要毒性成分商陆皂苷B(EsB)和商陆皂苷C(EsC)醋制前后含量的变化,依据商陆《中国药典》醋炙工艺,将商陆正丁醇部位进行模拟醋制;采用液质联用法对商陆正丁醇部位醋制前后皂苷类成分进行研究;采用HPLC-ELSD方法检测毒性成分EsC和EsB在商陆生品、醋制品中的含量,考察商陆醋制前后的含量变化.结果显示,商陆正丁醇部位中除商陆皂苷甲(EsA)以外,各商陆皂苷类成分含量均不同程度下降,皂苷类化合物组成显著变化,但醋制后未见新化合物生成;含量测定发现生商陆中EsC和EsB的质量分数分别为0.12％,0.20％,醋制后下降为0.48％,0.094％.表明醋制能够显著改变商陆及商陆正丁醇部位中皂苷类成分的组成,显著降低毒性皂苷EsC和EsB的含量,表明商陆采用醋制法炮制的科学性.

商陆醋炙前后对动物黏膜刺激性比较研究

目的:研究商陆醋炙前后对动物黏膜刺激性的变化.方法:采用大鼠和小鼠胃肠道试验及家兔眼结膜刺激性试验,观察商陆醋炙前后对动物黏膜的刺激性变化.结果:经醋制后,商陆对动物黏膜的刺激性显著减弱.结论:醋制法能够降低商陆对动物黏膜的刺激性作用.

商陆正丁醇部位醋制前后肠道毒性变化研究

为探索商陆毒性部位炮制前后对肠道毒性变化的影响,提取分离获得了商陆正丁醇毒性部位,在整体动物模型水平,灌胃给药后观察小鼠肠道肿胀程度,测定小鼠肠道不同部位的含水量及粪便的含水量,考察商陆正丁醇部位炮制前后对腹泻及肠道肿胀的影响;在细胞水平,采用MTT法,测定肠细胞HT-29,IEC-6的IC50,比较醋制前后商陆正丁醇部位的毒性变化.结果显示商陆正丁醇部位能够导致肠道肿胀,表现为引起十二指肠、空肠的水肿,且可导致粪便含水量增加引起腹泻,可抑制肠细胞HT-29,IEC-6增殖,表明其具有肠细胞毒性,对HT-29细胞的IC5014.59 mg·L-1,IEC-6 IC5043.77 mg·L-1;经醋制,小鼠肠道肿胀程度显著减弱,肠道和粪便的含水量明显降低,对HT-29和IEC-6的抑制作用减轻,对HT-29细胞的IC5058.51mg·L-1,IEC-6 IC5084.37 mg·L-1.由此可知,醋制法具有降低商陆正丁醇部位的毒性作用.

商陆多糖的提取及含量测定

目的从商陆中提取多糖,并测定其含量.方法用水提醇沉法提取商陆多糖,用酚-硫酸比色法测定多糖含量.结果测得商陆中多糖含量16.2481%,平均回收率为98.43%,RSD=1.29%(n=5).结论商陆多糖含量较高,可进一步开发利用.

商陆培养细胞对6β-santonin的生物转化

目的利用商陆培养细胞对6β-santonin (1)进行生物转化,以获得多种利于进一步进行结构改造的衍生物.方法将底物1与商陆培养细胞共孵化,采用色谱分离技术得到产物,通过理化性质和光谱数据对产物进行结构鉴定.结果与商陆培养细胞共孵化7 d后,底物1转化为5个产物(2～6),其中3为新化合物.结论利用商陆培养细胞可对6β-santonin进行选择性还原及羟基化反应,可为其进一步化学结构改造提供有价值的中间体.

基于转录组测序挖掘商陆皂苷甲生物合成相关基因

为研究商陆皂苷甲的生物合成途径,利用Illumina HiSeq 4000高通量测序技术对商陆幼苗进行转录组测序,得到9.60 Gb clean data,经Trinity软件组装后获得63 957条unigenes,平均长度988.82 bp,其中24 517条unigenes (38.33％)能被Nr、Swiss-Prot、COG、KOG、Pfam、GO、KEGG等公共数据库注释.对注释得到的unigenes进行KEGG代谢通路分析,发现商陆转录组中有53个unigenes参与萜类骨架合成通路,有8个unigenes参与三萜合成通路,还有417个unigenes参与商陆其他次生代谢途径.进一步分析参与商陆皂苷甲生物合成后修饰酶相关基因,发现有130个unigenes可能具有CYP450的功能,参与商陆次生代谢产物的氧化/羟基化修饰;有46个unigenes与糖基转移酶UGT相关.商陆转录组数据的获得为研究商陆皂苷甲和其他次生代谢产物的生物合成途径奠定了基础,也为商陆药材品质的形成提供理论依据.

HPLC－UV法测定商陆中商陆皂苷甲的含量

目的：建立商陆中商陆皂苷甲的HPLC－UV测定方法。方法用Alltima C18色谱柱（4．6 mm ×250 mm，5μm），流动相：乙腈－0．1％磷酸水＝40∶60，流速：0．8 mL? min－1，检测波长：203 nm，考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度与回收率、稳定性以及重现性。结果商陆皂苷甲在0．15～3．86μg内，线性关系良好，定量下限0．039μg，精密度良好（日内、日间 RSD 分别为1．12％和1．89％），平均回收率为98．61％。10个不同产地样品中商陆皂苷甲的含量为0．05％～0．42％。结论本方法简单，重复性好，适合用于商陆药材的质量控制。