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氨甲酰促红细胞生成素促进脑缺血后神经再生的实验研究
目的 观察氨甲酰促红细胞生成素(CEPO)对实验大鼠脑缺血后LINGO-1、生长相关蛋白(GAP-43)表达及脑梗死体积的影响,探讨CEPO对脑缺血后神经再生的促进作用.方法 将48只SD大鼠分为假手术组、缺血对照组及氨甲酰促红细胞生成素治疗组(简称CEPO治疗组),采用线栓法将缺血对照组、CEPO治疗组大鼠制成大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.各组大鼠于脑缺血90 min后拔出线栓,CEPO治疗组同时注射0.5 ml CEPO,缺血对照组及假手术组均注射0.5 ml生理盐水.于缺血再灌注第7天时处死各组大鼠,采用免疫印迹技术检测LINGO-1和活化型caspase-3表达;采用免疫组化染色技术检测GAP-43表达;采用甲酚紫染色法检测各组大鼠脑梗死体积及脑水肿情况.结果 假手术组、缺血对照组及CEPO治疗组LINGO-1表达值分别为(0.25±0.02)、(1.22±0.06)和(0.66±0.05),各组间差异均具有统计学意义(P＜0.05).假手术组大鼠脑皮质未见活化型caspase-3表达,缺血对照组缺血脑皮质活化型caspase-3表达值上升至(86.6±10.2)％,CEPO治疗组则下降至(40.3±8.7)％,各组间差异均具有统计学意义(P＜0.05).假手术组、缺血对照组及CEPO治疗组GAP-43阳性表达值分别为0、(55.02±1.62)个/HP和(72.11±3.23)个/HP,各组间差异均具有统计学意义(P＜0.05).另外CEPO治疗组脑梗死体积及脑水肿程度均显著小于缺血对照组(P＜0.05).结论 脑缺血后给予CEPO干预能抑制实验大鼠脑梗死部位LINGO-1及活化型caspase-3表达、促进GAP-43蛋白表达、减小脑梗死体积及脑水肿程度,从而发挥促神经再生作用.
关键词： 脑缺血 氨甲酰促红细胞生成素 生长相关蛋白-43 半胱氨酸蛋白酶-3 神经再生 -
黄连素对肝癌细胞生长的影响以及机理
目的:观察黄连素对肝癌细胞株3B生长的影响,并且探讨其作用的机理.为阐明黄连素作为一种新的治疗肝癌的药物提供理论依据以及实验室的结果.方法:应用不同浓度的黄连素作用于肝癌细胞后,通过细胞免疫组化SP法检测细胞膜表面的Caspase-3蛋白的表达,用流式细胞仪和荧光显微镜观察癌细胞凋亡的情况,并应用RT-PCR法检测Caspase-3 mRNA的含量.结果:黄连素对肝癌细胞株3B 的生长有明显抑制作用,并有浓度依赖性.在时间相同内,药物处理组的Caspase-3蛋白和mRNA的表达与空白对照组相比较均有显著性差异(P＜0.01);流式细胞仪分析存在G2/M阻滞,在G1峰前有明显的凋亡峰;荧光显微镜观察显示细胞形态发生凋亡特征性的改变:细胞膜完整,染色质浓缩,核碎裂,凋亡小体的形成.结论:黄连素能够有效地抑制肝癌细胞的生长,其机理是诱导细胞凋亡;而凋亡的机制可能是通过Caspase-3起作用.
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早产大鼠高氧暴露下肺组织TNF-α Caspase-3表达时相研究
目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及半胱氨酸蛋FB白酶-3(Caspase-3)在早产大鼠高氧肺损伤中的动态表达及其意义.方法孕21 d的SD早产大鼠生后第2天,随机分为空气组和高氧组(均n=40).高氧组大鼠予以85%高氧持续暴露,空气组大鼠置于空气中.于高氧暴露1d、4 d、7 d、14 d和21 d每组各处死8只大鼠,收集肺组织标本,苏木精-伊红染色观察肺组织病理形态学变化,双抗夹心ELISA法检测TNF-α含量,免疫组化和Western blot检测Caspase-3表达.结果高氧暴露4 d、7 d和14 d肺组织TNF-α和Caspase-3含量明显增高(均P＜0.01),且两者之间具有显著相关性(r=0.93,P＜0.01).结论TNF-α诱导Caspase-3过度表达导致细胞凋亡可能是早产大鼠高氧肺损伤的发病机制之一.
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川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型caspase-3和NF表达的影响
目的:观察川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型损伤段半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和神经丝蛋白(NF)表达的影响.方法:SD大鼠88只,随机分为空白对照组,生理盐水组和川芎嗪组.采用改良ALLEN氏打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型.采用改良Rivlin斜板实验和BBB评分对大鼠脊髓功能进行行为学评分.在建模后1h,3h,6h,1d,3d,7d,14d和21d获取损伤段脊髓标本,HE染色观察其组织病理变化;免疫组织化学染色检测caspase-3和NF-L,NF-H,NF-M表达,并进行相关分析.结果:随着时间推移,术后斜板临界度数和BBB评分均逐渐升高,且术后7,14和21d,川芎嗪组斜板临界度数和BBB评分均较对照组高(P＜0.05).术后3,7和14d,川芎嗪组caspase-3表达值较生理盐水组低(p＜0.05),NF表达值较生理盐水组高(P＜0.05).改良Rivlin斜板临界角度与NF的表达正相关:BBB评分值与NF的表达正相关,与caspase-3的表达负相关;Caspase-3的表达与NF的表达负相关.结论:川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型损伤段脊髓有保护作用,可能与川芎嗪增加NF表达,抑制caspase-3表达有关.
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脊伤颗粒对大鼠急性脊髓损伤后运动功能及Caspase-3表达的影响
目的 研究脊伤颗粒对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后运动功能及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响.方法 随机抽取大鼠32只作为假手术组,其余118只大鼠采用改良Allen'S打击器制作大鼠SCI模型,将造模成功的96只大鼠随机分为模型组、甲基强的松龙组(下称甲强龙组)、脊伤颗粒组.分别给予假手术组、模型组生理盐水灌胃,甲强龙组尾静脉注射药物,脊伤颗粒组予以相应药物灌胃.在给药后1、3、7、14 d的4个不同时间点采用BBB行为学功能评分;再分批处死大鼠,取出SCI组织用HE染色观察其病理变化,用免疫组化染色检测Caspase-3表达阳性细胞,原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞.结果 (1)BBB运动功能评分方面,与假手术组比较,模型组评分低(P＜0.01);与模型组比较,脊伤颗粒组、甲强龙组评分高(P＜0.05);与甲强龙组比较,SCI后1、3d,脊伤颗粒组评分偏低,(P＜0.05),SCI后7、14 d脊伤颗粒组评分偏高(P＜0.05).(2)在平均积分光密度值和细胞凋亡率方面,与假手术组比较,模型组数值偏高(P＜0.01);与模型组比较,甲强龙组、脊伤颗粒组平均数值低(P＜0.05);与甲强龙组比较,SCI后1、3d,脊伤颗粒组平均数值偏高(P＜0.05),SCI后7、14 d,脊伤颗粒组平均数值偏低(P＜0.05).结论 脊伤颗粒能部分恢复SCI后模型大鼠的运动功能并可明显抑制细胞Caspase-3表达和细胞凋亡.
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半夏泻心汤预防应激性胃黏膜损伤及对Bcl-2和Caspase-3的影响
目的 观察预先给予半夏泻心汤对束缚水浸应激大鼠胃黏膜上皮细胞B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)、Bax mRNA表达、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,探讨半夏泻心汤抗应激性胃黏膜损伤的作用机制.方法 40只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药组(半夏泻心汤组)、西药组(奥美拉唑组).每组动物相应药物灌胃3d.大鼠束缚水浸应激(WRS)造模.观察大鼠胃黏膜损伤指数(UI);RT-PCR法检测各组大鼠胃黏膜中Bcl-2、Bax mRNA表达水平;western-blot法检测胃黏膜活化的Caspase-3表达变化.结果 与空白组比较,模型组UI明显升高(P＜0.0l),Bcl-2mRNA表达显著减弱(P＜0.01),Bax mRNA、活化的Caspase-3表达明显增强(P＜0.01);与模型组比较,中药组、西药组UI明显降低(P＜0.01),胃黏膜中Bcl-2 mRNA表达显著上调(P＜0.01),活化的Caspase-3表达显著下调(P＜0.01).结论 半夏泻心汤可显著对抗应激性胃黏膜损伤,其抗损伤发生的机制之一可能是通过上调胃黏膜中Bcl-2 mRNA表达,下调活化的凋亡执行因子Caspase-3的表达,从而抑制胃黏膜上皮细胞的过度凋亡,发挥胃黏膜抗应激性损伤的作用.
关键词： 半夏泻心汤 胃黏膜损伤 凋亡 B细胞淋巴瘤基因-2 半胱氨酸蛋白酶-3 -
来曲唑通过下调bcl-2和上调caspase-3的表达促进人子宫肌瘤细胞调亡
目的 探讨来曲唑对人子宫肌瘤细胞增殖和凋亡以及bcl-2和caspase-3表达的影响. 方法 来曲唑处理原代培养的人子宫肌瘤细胞,用MTT法测定细胞生长曲线,流式细胞术测定细胞凋亡率,放射免疫法测定培养基中雌二醇水平,用实时定量聚合酶链反应和蛋白印迹检测bcl-2和caspase-3表达. 结果 来曲唑呈浓度和时间依赖性抑制子宫肌瘤细胞的增殖,降低子宫肌瘤细胞的凋亡率,同时呈浓度依赖性降低子宫肌瘤细胞雌二醇的分泌.来曲唑呈浓度依赖性降低bcl-2的表达,增加caspase-3的表达. 结论 来曲唑抑制子宫肌瘤细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与来曲唑减少雌二醇的分泌、降低bcl-2表达和增加caspase-3表达有关.
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FGF-1对TGF-β1诱导的H9c2心肌细胞凋亡与Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9表达的关系研究
目的 观察酸性成纤维细胞生长因子(FGF-1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用及对半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,并探讨可能机制.方法 体外培养H9c2细胞,随机分为5组:模型组,肝素(Heparin)组、FGF-1组、FGF-1/Heparin组和正常对照组.采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色分析检测H9c2细胞的存活率,TUNEL染色检测H9c2细胞凋亡指数和Western blot分析检测H9c2细胞Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9的表达.结果 模型组H9c2细胞存活率与正常对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),模型组降低;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞存活率与模型组比较,差异有统计学意义(P <0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组均升高.模型组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与正常对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),模型组升高;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与模型组比较,差异有统计学意义(P <0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组降低.结论 FGF-1对TGF-β1诱导的H9c2心肌细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达有关.
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人参皂苷Rg1对脑缺血再灌注大鼠大脑细胞死亡方式的影响
目的 探讨人参皂苷Rg1 (ginsenoside Rg1)对脑缺血再灌注大脑皮层细胞死亡方式的影响.方法 健康SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(Model组)、人参皂苷Rg1 10、20、40 mg/kg处理组、尼莫地平处理组(阳性对照组),每组15只.各组于术前5d至取材当日分别注射生理盐水(Sham、Model组)、人参皂苷Rg1(Rg1处理组)、尼莫地平(阳性对照组).采用右侧大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型,动物清醒后进行神经功能评分和TTC染色验证模型是否成功;采用免疫组化法和免疫印迹法定性定量检测大脑皮层缺血再灌注24h后多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(poly ADP-ribose polymerase-1,PARP-1)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达.结果 免疫组化和免疫印迹结果显示,Sham组大脑皮层区可见PARP-1、及少量caspase-3阳性细胞;Model组可见大量PARP-1阳性细胞及caspase-3阳性细胞;人参皂苷Rg1处理组神经功能缺损评分及PARP-1、caspase-3的表达显著低于Model组.结论 人参皂苷Rg1预处理对大鼠脑缺血再灌注具有保护作用,其机制可能与下调脑组织PARP-1、caspase-3的表达,对抗脑细胞凋亡和胀亡有关.
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TFP5通过特异性抑制CDK5/p25活性抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡
目的 探讨TEa5 (p35的一个裂解片段)特异性抑制细胞周期蛋白依赖蛋白激酶5(CDK5)/p25活力后在1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的PC12细胞凋亡过程中的保护作用及其机制. 方法 使用100 μg/Lβ神经生长因子将体外常规培养的PCI2细胞诱导分化为多巴胺能神经元,加入不同浓度MPP+(0、100、200、300、400、600、800、1000μmol/L)处理,应用CCK8法检测细胞活力,以明确MPp+诱导PC12细胞凋亡的合适浓度.将诱导分化后的PC12细胞分为4组:PBS+ PBS组、MPP++ PBS组、MPP++ TFP5组和MPP++ CDK5抑制剂Roscovitine组;TFP5与Roscovitne提前12h加入培养基中预处理(终浓度分别为100 nmol/L、10 nmol/L).分别应用流式细胞仪及Hoechst33258染色检测细胞凋亡情况,应用Western blotting检测细胞中p35/p25、半胱氨酸蛋白酶-3、裂解半胱氨酸蛋白酶-3蛋白表达水平. 结果 CCK8法检测结果显示:Mpp+浓度为300 μmol/L时,PC12细胞的存活率为(64.84±1.58)％.流式细胞仪检测结果显示:MPP++PBS组细胞凋亡率[(25.61±2.74)％]高,MPP++TFP5组细胞凋亡率[(13.33±1.24)％]较低,比较差异有统计学意义(P＜0.05).Hoechst33258染色结果显示:MPP++PBS组细胞核固缩及碎裂明显,较多凋亡小体形成,而MPP++ TFP5组与MPP++ Roscovitine组仅有少量凋亡小体形成.Western blotting检测结果显示:与PBS+PBS组比较,MPP++PBS组、MPP++TFP5组、MPP++ Roscovitine组p25蛋白表达水平均明显增高,差异均有统计学意义(P＜0.05).MPP++PBS组裂解半胱氨酸蛋白酶-3蛋白表达水平较PBS+PBS组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);MPP++ TFP5组裂解半胱氨酸蛋白酶-3蛋白表达水平较MPP++PBS组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 TFP5通过特异性抑制CDK5/p25表达,减少裂解半胱氨酸蛋白酶-3蛋白的产生,对Mpp+诱导的PC12细胞凋亡起抑制作用,从而对细胞产生保护作用.
关键词： 帕金森病 TFP5 细胞周期蛋白依赖蛋白激酶5 半胱氨酸蛋白酶-3 -
多巴胺能神经元对鱼藤酮敏感性的增龄改变及其机制
目的 研究鱼藤酮对不同月龄SD大鼠多巴胺能神经元的影响及其机制.方法 3、12、20月龄雄性SD大鼠各40只,按照随机数字表法分为自然增龄组和鱼藤酮处理组,每组20只.自然增龄组皮下注射无鱼藤酮的混合溶剂,处理组皮下注射鱼藤酮[1.0 mg/(kg·d)],连续给药30d,每周停药1d,构建大鼠鱼藤酮染毒模型.大鼠黑质切片采用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色；测定黑质组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性；Western blotting检测黑质部位caspase-3表达水平.结果 鱼藤酮处理后各月龄大鼠TH阳性细胞计数均比相应自然增龄组降低,且20月龄大鼠降低为明显,差异均有统计学意义(P＜0.05).自然增龄组3月龄大鼠黑质组织SOD和CAT活性高,20月龄大鼠有所下降,而鱼藤酮处理后各月龄大鼠SOD、CAT活性均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blotting结果显示,鱼藤酮处理组各月龄大鼠剪切活化的caspase-3的表达较自然增龄组均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05),其中20月龄大鼠为明显.结论 鱼藤酮可诱导大鼠TH阳性细胞随年龄增加而减少,氧化应激水平的增高和caspase-3的激活可能参与了SD大鼠对鱼藤酮敏感性随年龄增加的作用机制.
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P38通路对帕金森病小鼠模型黑质环氧合酶-2、半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响
目的 研究P38MAPK通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)所致亚急性帕金森病(PD)小鼠模型中对黑质环氧合酶-2(COX-2)、半胱氨酸蛋向酶-3(caspase-3)表达调控作用.方法 采用MPTP制备PD小鼠模型,观察行为学、免疫组化和免疫蛋白印记法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、COX-2、caspase-3和磷酸化P38MAPK(P-P38MAPK)的变化,及给予P38MAPK抑制剂SB203580后对上述变化的影响.结果 模型7 d组小鼠出现典型的PD样症状,黑质区TH阳性神经元和蛋白水平分别下降约65%和75%(P<0.01);模型3 d组小鼠黑质区COX-2、P-P38MAPK、caspase-3阳性细胞数及蛋白水平显著增加.TH阳性神经元明显丢失;经P38MAPK抑制剂SB203580处理后,上述变化均显著减轻(P<0.01).结论 在MPTP所致亚急性小鼠PD模型中,P38MAPK通路对黑质区炎症与凋亡可能有重要调控作用,SB203580对PD小鼠具有一定神经保护作用.
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天津医科大学硕士研究生导师胎鼠神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经红蛋白及半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响
目的 研究胎鼠神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经红蛋白(Ngb)及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的影响.方法 40只SD大鼠随机分为正常对照组(Normal组)、脊髓损伤组(SCI组)、神经干细胞组(NSCs组)、神经干细胞标记组(BrdU+NSCs组).采用电控SCI打击装置制作模型,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法标记处于对数生长期的NSCs,SCI后即刻进行NSCs移植.免疫组化法观察BrdU标记NSCs的存活、迁移及Ngb和caspase-3的表达,改良Rivlin法观察大鼠后肢运动功能的恢复情况.结果 BrdU+NSCs组在损伤脊髓区域可检测到BrdU标记的阳性NSCs.BrdU+NSCs组和NSCs组各时间点caspase-3免疫阳性细胞光密度值均比SCI组减少(P＜0.01),Ngb免疫阳性细胞光密度值比SCI组明显增加(P＜0.01),且Ngb表达高峰延长至伤后第14天;移植后第7、14、28天,后肢运动功能评分比SCI组明显升高(P＜0.01).BrdU+NSCs组与NSCs组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 体外培养的胚胎大鼠NSCs可在SCI区域存活、迁移,并能通过上调Ngb的表达来抑制大鼠SCI后神经细胞的凋亡,从而促进大鼠瘫痪肢体功能的恢复.
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三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的影响——附18例报告
目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞凋亡的影响.方法:对18份RA滑膜组织进行原代培养,采用四甲基偶氮唑盐法检测加入0 μmol/L、0.10 μmol/L、0.40 μmol/L、0.80 μmol/L As2O3对RA滑膜细胞活力影响,用流式细胞仪分析加入不同浓度As2O3后早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞、活细胞、坏死细胞所占的比例,观察加入不同浓度As2O3后RA滑膜细胞的半胱氨酸蛋白酶-3的活性变化.结果:与同一时段无加入As2O3的RA滑膜细胞比较,加入0.10 μmol/L、0.40 μmol/L、0.80 μmol/L As2O3 的 RA滑膜细胞活力明显下降(均为P＜0.05).RA滑膜细胞中的早期凋亡细胞及坏死细胞所占比例随As2O3浓度升高而增高,活细胞所占比例随As2O3浓度升高而降低(均为P＜0.05),其中,As2O3浓度为0.80 μmol/L组的早期凋亡细胞及坏死细胞所占比例高、活细胞所占比例低(均为P＜0.01).半胱氨酸蛋白酶-3活性随As2O3浓度增加而增加(均为P＜0.05).结论:As2O3可抑制RA滑膜细胞的活力,在达到一定的药物浓度后可对滑膜细胞产生致死效应.As2O3所诱导滑膜细胞凋亡可能与半胱氨酸蛋白酶-3的活性增高有关.
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TNF-α诱导人肺微血管内皮细胞凋亡Caspase-3活性的研究
目的：探讨凋亡“核心蛋白酶”-半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)凋亡中的作用。方法体外培养HPMVECs，空白对照组置于CO2培养箱中常规培养， TNF-α组分别以10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL浓度刺激HPMVECs，使用MTT比色法检测各组细胞活性，AnnexinⅤ/PI双染色联合流式细胞术检测细胞凋亡率，流式细胞术检测Caspase-3的活性。结果空白对照组的细胞凋亡率及Caspase-3活性低；空白对照组和TNF-α组(10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL)比较，100 ng/mL TNF-α组的相对细胞活性低，而细胞凋亡率及Caspase-3活性高，TNF-α诱导HPMVEC凋亡时呈现出浓度依赖性，随着时间的延长，Caspase-3活性逐渐升高(P<0.05)。结论 TNF-α诱导人肺微血管内皮细胞凋亡呈现浓度依赖性，Caspase-3可能参与了这一细胞凋亡过程的调控。
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全脑缺血损伤大鼠大脑海马CA1区神经细胞的死亡机制研究
目的:探讨全脑缺血损伤时大鼠大脑海马CA1区神经细胞的死亡机制.方法:采用双侧颈总动脉夹闭的方法制作大鼠全脑缺血模型,成功制造模型后分别于缺血0、5、10、15、20、25、30 min进行取材.采用TTC染色和脑组织含水量进行模型鉴定;采用光学、电子显微镜技术观察全脑缺血大鼠的大脑海马CA1区的形态学变化;分别采用免疫组化和免疫印迹方法检测大鼠大脑海马CA1区的多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(poly adenosine diphosphate ribose polymerase-1,PARP-1)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达情况.结果:PARP-1阳性表达定位于海马CA1区神经细胞核,Caspase-3阳性表达定位于细胞质.PARP-1的免疫印迹在缺血0min组大脑海马CA1区呈微弱表达(0.023 3±0.035 1),而5 min时PARP-1的表达增强(0.710 0±0.112 7),至15 min时呈高表达(1.063 3±0.090 7),持续至30 min(1.490 0±0.183 3),且与0 min组比较差异有统计学意义(P=0.000).而缺血0 min时大脑海马CA1区Caspase-3则呈阴性表达,于缺血5 min时可见阳性表达(0.080 0±0.020 0),持续至30 min(0.270 0±0.052 9),且与0 min组比较差异有统计学意义(P=0.006).结论:细胞胀亡参与了全脑缺血性损伤大鼠海马CA1区神经细胞死亡,其原因是由PARP-1的过度激活所导致.
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地塞米松诱导的危重病性肌病的细胞死亡方式
目的 探讨地塞米松诱导的危重病性肌病的细胞死亡方式.方法 将SD大鼠分为健康对照组和实验组；实验组义分为7、9、11d3个时相点(n=10).实验组采用5 mg/kg地塞米松连续腹腔注射,每天1次,健康对照组腹腔注射等量的生理盐水.采用肌功能缺损评分判定肌功能缺损情况.利用免疫组化和Western blot检测比目鱼肌active caspase-3、PARP、pULK的表达情况.结果 ①健康对照组无肌肉功能缺损症状；而实验组7d时大鼠70％出现肌肉功能缺损症状,9、11d时全部出现明显的肌肉功能缺损症状,以11d时相点缺损程度为严重.②各组active caspase-3、PARP均为阴性表达；健康对照组可见少量pULK阳性表达细胞,实验组pULK表达显著增强,以11d时相点表达增强为明显.结论 地塞米松诱导的危重病性肌病中无active caspase-3、PARP表达,以pULK表达为主,提示该病可能以自噬性死亡为主要死亡方式.
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苓桂术甘汤含药血清对TGF-β1诱导的大鼠心肌细胞株H9c2凋亡的影响
目的:观察苓桂术甘汤含药血清对转化生长因子-β1(Transforming growth factor,TGF-β1)诱导的大鼠心肌细胞H9c2凋亡的影响,探讨苓桂术甘汤抗心肌细胞凋亡的机制.方法:分别用苓桂术甘汤(2.1、4.2、8.4 g/kg)大鼠含药血清(10％)与大鼠心肌细胞H9c2共培养12 h后,加入TGF-β1 (20 ng/ml)继续培养12 h.用MTT法检测心肌细胞H9c2的存活率、Hoechst 33258荧光染色法观察细胞形态学变化、流式细胞术(Annexin V/PI双染色法)检测细胞凋亡率、ELISA法检测H9c2细胞半胱氨酸蛋白酶-3和半胱氨酸蛋白酶-8的表达量.结果:与正常对照组比较,TGF-β1模型组H9c2细胞存活率明显降低,细胞染色质边聚,细胞核致密浓染且固缩并呈现蓝白色,细胞凋亡率明显升高,半胱氨酸蛋白酶-3、半胱氨酸蛋白酶-8表达量明显升高;与TGF-β1模型组比较,苓桂术甘汤(4.2、8.4 g/kg)含药血清组细胞存活率均明显升高,苓桂术甘汤(2.1、4.2、8.4 g/kg)含药血清组凋亡率由(25.7±1.1)％分别下降至(22.2±1.0)％、(14.7±0.9)％和(10.1±1.3)％;苓桂术甘汤(2.1、4.2、8.4 g/kg)含药血清组半胱氨酸蛋白酶-3的表达量由(33.1±1.0)pmol/l分别明显下降至28.9 ±2.0、27.5±2.8和(24.2±2.3)pmol/L,苓桂术甘汤(4.2、8.4 g/kg)含药血清组半胱氨酸蛋白酶-8的表达量由(20.8±2.4)pmo1/L分别明显下降至(16.4±1.3)、(13.7±0.7)pmol/L.结论:苓桂术甘汤含药血清能够明显抑制TGF-β1诱导的大鼠心肌细胞H9c2的凋亡,该作用与其抑制半胱氨酸蛋白酶-3和半胱氨酸蛋白酶-8表达有关.
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吗啡缺氧预处理对兔缺氧/复氧肾脏损伤的保护作用和caspase-3的影响
维持机体氧供与氧耗相对平衡是防治缺氧/复氧损伤的重要措施.吗啡可降低代谢,降低氧耗.细胞凋亡是缺血再灌注损伤发病机制中的重要环节,半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)是凋亡的关键酶和执行者.本文拟通过观察缺氧/复氧损伤肾脏组织中caspase-3蛋白的变化,探讨吗啡缺氧预处理发挥肾脏保护作用的可能机制.经自制面罩吸入8% O2 3 h后吸入空气复氧3 h,建立全身缺氧/复氧肾损伤兔动物模型,缺氧/复氧结束后分别取肾脏组织,采用Envision两步法行caspase-3免疫组化染色.实验结果表明:正常对照组肾脏组织中极少的caspase-3阳性细胞表达.单纯缺氧/复氧组和吗啡缺氧预处理组阳性蛋白表达指数分别为(29.3±5.7)%和 (12.16+1.23)%(P＜0.05).结果提示:吗啡缺氧预处理可以下调兔肾脏缺氧/复氧损伤时caspase-3的表达,进而对缺氧/复氧损伤肾脏组织发挥保护作用.
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早期应用z-VAD-fmk对新生鼠HIBD的保护作用及其机制研究
目的 观察半胱氨酸蛋白酶(Caspase)抑制剂z-VAD-fmk对于缺血缺氧性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)大鼠脑组织的保护作用,并探讨其机制.方法 7d龄Wistar大鼠60只,随机分为对照组、HIBD组和阻断组,各20只.HIBD组及阻断组制作HIBD模型,对照组大鼠分离但不结扎左侧颈总动脉,术后亦不进行缺氧处理.阻断组在建模后给予z-VAD-fmk,连续7d.第8天处死全部动物.分别采用TUNEL法和RT-PCR法检测三组动物脑组织中神经细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)和Caspase-3 mRNA.结果 对照组、HIBD组、阻断组AI值分别为0.15±0.02、21.36±2.45、10.42±1.62,三组相比差异有统计学意义(P均＜0.05).三组脑组织中Caspase-3 mRNA的相对表达量分别为0.016±0.003、0.561±0.067、0.216±0.036,三组相比差异有统计学意义(P均＜0.05).AI值随Caspase-3mRNA的升高而升高,随其降低而降低,二者之间具有正相关关系(r=0.628,P＜0.05).结论 z-VAD-fmk对HIBD大鼠脑组织有一定的保护作用,其机制可能是降低脑组织中Caspase-3 mRNA的表达,减轻神经细胞凋亡.
