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孕期慢性应激对子鼠情绪及海马组织中单胺类神经递质的影响
[目的]观察大鼠孕期处于应激状态对其子代情绪的影响,从海马神经递质变化探讨其可能机制. [方法]建立孕期慢性不可预知温和应激大鼠(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型,采用放射免疫法测定母鼠血浆皮质酮水平,利用液体消耗实验、行为学旷场实验、悬尾实验进行子鼠情绪变化的测定,ELISA方法测定子鼠大脑海马组织中单胺类神经递质质量浓度,并分析其相关性. [结果]模型组母鼠皮质酮水平与对照组比较,差异有统计学意义(F=12.347,P=0.001),提示模型组大鼠处于应激状态.模型子鼠组的体重在PND 28和PND 42均低于对照子鼠组(P＜0.05);子鼠情绪变化:模型子鼠组水平及垂直运动得分低于对照子鼠组(P＜0.05);糖水消耗和1％蔗糖偏爱百分比模型子鼠组得分均低于对照子鼠组(P＜0.05);悬尾实验模型子鼠组较对照子鼠组静止时间长、挣扎次数低(P＜0.05).模型子鼠组单胺类神经递质(去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺)均下降. [结论]孕期慢性应激影响子鼠情绪变化,可能与母体血浆皮质酮升高,与子鼠海马组织中枢神经递质降低有关.
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孕哺期至成年前铝暴露对子鼠空间学习记忆能力和海马miR-132转录的影响
[目的]探讨孕哺期至成年前持续铝暴露对子鼠空间学习记忆和海马miR-132转录的影响.[方法]将12只清洁级健康SD孕鼠随机分为3组,每组4只.各组饮水中氯化铝浓度分别为0、600、1000 mg/L,即对照组、低铝组、高铝组.母鼠从妊娠第0天至子鼠出生第21天染毒.从每组中随机选择8只子鼠(4雌4雄,同一窝别雌雄比为1:1)延续同组剂量继续染毒至成年(出生第90天),每2周称一次体重,子鼠处死前收集24h尿液,Morris水迷宫实验检测空间学习记忆能力.处死后光镜观察海马组织的病理变化,采用石墨炉原子吸收法测定尿铝和脑铝含量,用实时荧光定量PCR方法检测海马组织中miR-132转录水平.[结果]与对照组比较,高铝组子鼠出生后0～12周体重均降低(均P＜0.01).水迷宫结果显示:与对照组相比,染毒组在第3天和第4天逃避潜伏期延长(均P＜0.01),高铝组子鼠首次达台时间延长及穿越平台次数减少(P＜0.05,P＜0.01).低铝组、高铝组子鼠尿铝和脑铝水平分别为(11.84±1.03)、(16.32±1.32)μg/L,(12.69±0.43)、(16.61±0.93) μg/g,均高于对照组(均P＜0.01).与对照组比较,染毒组海马神经细胞出现核固缩,染色加深,数量减少和排列紊乱变形等病理改变;miR-132在低铝组、高铝组中的相对转录水平分别为1.48±0.35、1.62±0.38,与对照组(1.00±0.12)比较,miR-132在染毒组中转录水平均升高(P＜0.05,P＜0.01).[结论]持续铝暴露损害子鼠的空间学习记忆能力,可能与海马组织中的miR-132转录水平升高有关.
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慢性疼痛对孕鼠及其子代认知功能的影响
目的:通过构建孕期小鼠慢性疼痛模型,观察慢性疼痛对孕鼠及子鼠认知功能的影响.方法:将交配成功的母鼠随机分为正常组、假手术组和慢性疼痛组,每组10只.慢性疼痛组母鼠足跖关节皮内注射无菌完全弗氏佐剂100μl(即500μg),诱导产生关节炎性痛.用水迷宫实验检测动物认知能力.结果:定位航行实验中慢性疼痛组孕鼠平均逃避潜伏期比假手术组长(P ＜0.001).空间搜索实验中慢性疼痛组孕鼠穿越平台次数、平均游速、在原平台象限停留的时间比率及游程比率均低于假手术组(P＜0.05).子鼠出生后第3周,慢性疼痛组子鼠平均逃避潜伏期比假手术组长(P＜0.01),穿越平台次数少于假手术组子鼠(P＜0.05),平均游速、在原平台象限停留的时间比率和游程比率与假手术组子鼠比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:孕期慢性疼痛会导致母体认知能力的下降,也会影响其子代幼年期的认知功能.
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慢性疼痛对孕鼠及其子代抑郁行为的影响
目的:构建孕鼠慢性疼痛动物模型,观测慢性疼痛对孕鼠及其子代抑郁行为的影响.方法:将交配成功的母鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和慢性疼痛组(n=10).慢性疼痛组母鼠足跖关节皮内注射无菌完全弗氏佐剂100 μl[500 μg·(100 μl)-1]诱导产生关节炎痛,疼痛可覆盖母鼠整个孕期(22 d左右)及产后1周.用糖水消耗实验、旷场实验在不同时间点分别检测母鼠及子鼠的抑郁行为表现.结果:(1)母鼠:在造模后第12、18天及产后第6天,糖水实验中慢性疼痛组小鼠糖水偏好度与假手术对照组比较均显著降低(P ＜0.01),旷场实验中慢性疼痛组小鼠直立次数和中央区活动距离与假手术对照组比较均显著降低(P ＜0.05或P＜0.01),余时间点3组各指标相比差异无统计学意义(P＞0.05).(2)子鼠:慢性疼痛组子鼠在出生后3周时其糖水偏好度、直立次数、中央区活动距离均低于假手术对照组(P ＜0.05或P＜0.01),在出生后6周时其糖水偏好度及直立次数低于假手术对照组(P ＜0.05或P＜0.01),余时间点3组各指标相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:慢性疼痛对孕鼠及其子代的抑郁行为有促发作用.
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孕鼠维生素D缺乏对子鼠骨发育相关基因BMP-2、Cbfal、Dmp1表达的影响
目的:研究大鼠孕期维生素D缺乏对其子鼠骨发育相关基因BMP-2、Cbfa1、Dmp1表达的影响.方法:成熟雌性SD大鼠36只随机分为模型组和对照组各18只,模型组以不含维生素D的大鼠饲料避光喂养,对照组以标准饲料正常光照喂养.两周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕20天(E20 d)、生后1天(B1 d)和生后7天(B7 d)子鼠左侧股骨.通过Real-TimePCR方法分别比较模型组和对照组胚胎和新生鼠长骨中BMP-2、Cbfa1、Dmp1基冈在3个时间点表达的差异.结果:BMP-2 mRNA、Cbfa1 mRNA及Dmp1 mRNA在E20 d、B1 d和B7 d的表达,模型组均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:BMP-2、Cbfa1、Dmp1均为骨发育相关基因,孕鼠维生素D缺乏可下调子鼠长骨中BMP-2、Cbfa1、Dmp1的表达水平,从而可能影响子鼠骨骼的发育.
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孕鼠维生素D缺乏对子鼠长骨维生素D受体蛋白表达的影响
目的:研究大鼠孕期维生素D(VitD)缺乏对其子鼠长骨中维生索D受体(VDR)蛋白表达的影响.方法:成熟雌性SD大鼠36只随机分为模型组和对照组各18只,模型组以不含VitD的大鼠饲料避光喂养,对照组以标准饲料正常光照喂养.2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕20天(E20d)、生后1天(B1d)和生后7天(B7d)子鼠左侧股骨.用Western blotting方法检测子鼠股骨VDR蛋白水平的表达.结果:VDR蛋白在E20d、B1d和B7d子鼠股骨的表达量,模型组均显著低于对照组(P均<0.05).结论:孕鼠VitD缺乏可下调子鼠长骨VDR蛋白表达水平,可能为子鼠骨骼发育不良机制之一.
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父源性十溴联苯醚暴露下调雄性子鼠睾酮水平和精子数
目的 观察父源性( F0 代雄性小鼠)十溴联苯醚(PBDE-209)暴露对胎鼠(F1 代)体格发育状况及出生后70 (PND70)天F1 代雄性子鼠脏器系数、睾酮水平、精子数和睾丸组织形态的影响. 方法 4周龄雄性小鼠,按小鼠每日体重进行灌胃染毒,随机分为玉米油组( 0 mg/kg )、低剂量组(100 mg/kg)、中剂量组(300 mg/kg)和高剂量组(500 mg/kg) ,连续染毒6周. 染毒结束前1 d与健康雌鼠1: 2合笼,观察F1 代胎鼠体格发育和PND70天F1 代雄性子鼠脏器系数、睾酮水平、精子数和睾丸组织形态变化. 结果 高剂量组F1 代胎鼠体重、体长和肛殖距(肛门到生殖器距离)降低(P<0. 05),雌雄比增加(P<0. 05);与玉米油组比较,高剂量组PND70天雄性子鼠睾丸系数、附睾系数、肝脏系数、肾脏系数、附睾尾精子数和血清睾酮水平明显降低(P <0. 05);雄性仔鼠HE染色显示中、高剂量组精子数目减少,间质间隙明显增宽,基底室出现空腔,支持细胞和间质细胞数减少等. 结论 F0 代雄性小鼠暴露PBDE-209 可能会影响F1 代子鼠体格发育,还可能会使PND70天雄性子鼠的精子数、睾酮水平降低,以及睾丸形态结构发生改变.
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尿道下裂子鼠生殖结节中的间充质-上皮转化作用
目的 观察尿道下裂子鼠生殖结节中成纤维细胞的间充质-上皮转化现象,探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)导致尿道下裂的机制.方法 取孕SD大鼠,随机分为DBP组和对照组.于怀孕第13 ～ 19天,DBP组按照800 mg/kg体重DBP溶入玉米油(DBP和玉米油总剂量为3 ml/kg体重)后灌胃,对照组按照3 ml/kg体重玉米油灌胃.怀孕19 d取出子鼠,鉴别出DBP组中发生尿道下裂的雄性子鼠及对照组中的雄性子鼠并分为尿道下裂组和正常对照组,提取两组子鼠的生殖结节.用组织块法原代培养子鼠生殖结节中的成纤维细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,划痕实验检测细胞迁移能力变化,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的mRNA表达,Western blot检测E-cadherin、Vimentin的蛋白表达.结果 对照组的尿道开口于生殖结节顶端,而尿道下裂组的尿道开口于生殖结节腹侧,肛门生殖结节距离[(1.43±0.04) mm]明显小于对照组[(2.27±0.09) mm,P=0.023].子鼠尿道下裂发生率为40.5％.与对照组比较,尿道下裂组生殖结节成纤维细胞形态发生了变化,细胞呈多边型,丝状伪足变短,细胞排列较紧密,平均迁移距离缩短[12 h:(0.17±0.04) mm比(0.14±0.03) mm、24 h:(0.26±0.05) mm比(0.20±0.04) mm,P=0.041],E-cadherin的mRNA和蛋白相对表达量增加、Vimentin的mRNA和蛋白相对表达量降低(E-cadherin、Vimentin mRNA相对表达量:1.00±0.00比1.43±0.31(P =0.034)、1.00 ±0.00比0.51±0.12(P =0.031);E-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量:0.15 ±0.06比1.59 ±0.84(P =0.005)、1.88 ±0.45比0.30±0.13(P =0.003).结论 DBP在诱导子鼠发生尿道下裂的过程当中,促进了子鼠生殖结节中成纤维细胞的间充质-上皮转化作用,这可能与导致尿道下裂的发生有关.
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补肾益冲丸对妊娠大鼠子代毒性的相关研究
目的:观察补肾益冲丸对妊娠大鼠子代的相关毒性影响.方法:60只育龄动情SD大鼠2:1雌雄同笼,将妊娠母鼠随机分为高、中、低剂量中药组及生理盐水组,自妊娠第1天给妊娠大鼠灌胃至分娩当天.观察分娩第1天及存活15天鼠龄子鼠的一般发育情况、血液相关指标、主要脏器系数及病理检查.结果:低剂量中药组15天鼠龄予鼠尾长较生理盐水组长(P＜0.05);中、低剂量中药组的体格发育、血液指标与生理盐水组均无显著差异.各中药组的子鼠平均活胎数、脏器系数与对照组均无显著差异;病理检查均未发现明显异常.结论:临床等倍剂量的补肾益冲丸对妊娠大鼠的子代无明显毒性作用,其临床剂量口服对子代是安全的.
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链脲霉素实验性大鼠妊娠糖尿病对子鼠心肌细胞超微结构的影响
目的:通过研究链脲霉素(streptoaotocin,STZ)实验性大鼠妊娠糖尿病对子鼠在不同孕期心肌细胞超微结构的影响,探讨妊娠糖尿病致胎儿心脏发育异常的发生机制.方法:将54只SD孕鼠分为STZ注射组(30只)和柠檬酸缓冲液注射组(24只)作对照观察,按取材时孕龄不同将两组又分为第13、16和19天3个亚组.对STZ注射组孕鼠,给予新配质量分数为2%STZ溶液,按STZ 40mg/kg,一次性腹腔注射,3 d后空腹尾静脉采血监测血糖,并测尿糖、体质量.对照组用同样方法注射等量的柠檬酸钠缓冲液.孕鼠于孕龄第13、16、19天随机分批剖宫,取子鼠心脏组织做超微结构观察.结果:STZ注射组子鼠心肌细胞超微结构可见不同程度病理变化:细胞间连接较少、间隙宽窄不一,肌束排列不规整,胞膜结构不完整;胞质电子密度较高,线粒体肿胀呈空泡状气球样变,嵴减少,粗面内质网减少、扩张,可见脂质样小滴;胞核大小不一,不规则圆形,核膜结构不清,核染色质分布不均,可见异染色质;胞外基质可见有胶原纤维排列成束状,毛细血管腔外可见红细胞,有细胞器崩解痕迹.结论:STZ实验性大鼠妊娠糖尿病可致子鼠心肌发生超微结构的异常改变,可能为糖尿病母亲致儿心脏畸形的病理基础.
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丰富环境提升孕期应激子鼠学习能力和海马Arc的相关性研究
目的 从子鼠海马中细胞骨架蛋白Arc的变化,来探讨丰富环境方式对孕期慢性应激所产子鼠学习能力影响的干预机制.方法 建立孕期慢性应激大鼠模型,并采用丰富环境干预子鼠,利用水迷宫和Y-迷宫测定子鼠学习记忆能力、RT-PCR和Western Blotting测定海马中Arc表达情况.结果 模型组母鼠皮质酮增高,提示模型组母鼠处于应激状态.丰富环境后,子鼠血浆皮质酮降低(P＜0.05);水迷宫中逃避潜伏期和跨平台次数、Y-迷宫中所需的训练次数和正确反应率情况均转好(P均＜0.05);经丰富环境后,模型子鼠组海马组织Arc mRNA和蛋白表达增高(P均＜0.05).结论 丰富环境可以作为孕期受到应激因素影响学习能力提高的手段,与血浆皮质酮降低及海马突触相关蛋白Arc升高有关.
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丰富环境对孕期慢性应激所致子鼠学习能力影响的干预机制研究
目的 从子鼠海马中核转录因子NF-κB的变化,来探讨丰富环境对孕期慢性应激子鼠学习能力的干预机制.方法 建立孕期慢性应激大鼠模型,并采用丰富环境干预子鼠,利用水迷宫和y-迷宫测定子鼠学习记忆能力、RT-PCR和Western Blotting测定海马中NF-κB表达情况.结果 模型组母鼠皮质酮增高,提示模型组大鼠处于应激状态.丰富环境后,子鼠血浆皮质酮降低(P＜0.05);水迷宫中逃避潜伏期和跨平台次数、y-迷宫中所需的训练次数和正确反应率情况均转好(P均＜o.05);模型子鼠组海马NF-κB表达增高(P均＜0.05).结论 丰富环境可以提高孕期受到应激因素影响的学习能力,与血浆皮质酮降低及海马NF-κB升高有关.
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孕鼠手机辐射暴露对子鼠前额叶皮质中5-HT2C受体的影响
目的:探讨孕鼠手机辐射暴露对子鼠前额叶皮质中5-HT2C受体表达水平的影响.方法:27只SPF级SD孕鼠平均随机分为3组:A组(不辐射)、B组(辐射6 h/d,21 d)和C组(辐射24 h/d,21 d),每组9只孕鼠;待子鼠出生后每组随机留养72只,在出生后第1d、7d、30 d和60 d取子鼠前额叶皮质.运用免疫组织化学方法标识5-HT2C受体表达,并通过图像分析软件对阳性表达进行IOD值分析;运用实时荧光定量PCR法检测5-HT2C受体mRNA的相对表达水平.结果:5-HT2C受体阳性标识主要集中在神经元胞质内,阳性表达的IOD值和实时荧光定量PCR法检测5-HT2C受体表达水平的结果是一致的:与A组相比,B、C两组的表达水平均显著升高(P＜0.05);且C组水平高于B组(P＜0.05).结论:孕鼠手机辐射暴露可导致子鼠前额叶皮质5-HT2C受体表达水平升高.
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被动吸烟对子鼠海马神经元内钙/钙调蛋白激酶的影响
本文通过建立实验组孕鼠被动吸烟模型,21 d后剖腹产,取子鼠脑组织,采用HE染色、Nissl染色、免疫组化染色和计算机图像分析等方法,探讨子鼠海马神经元内钙/钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)的表达变化.结果显示:CaMK Ⅱ免疫阳性产物分布于子鼠大脑海马神经元胞质内,胞核呈阴性.对照组和实验组子鼠海马神经元内CaMK Ⅱ平均光密度分别为0.310 ±0.057和0.192±0.029(P＜0.05).上述结果证实:孕鼠妊娠期被动吸烟使子鼠海马神经元内CaMK Ⅱ表达减少,可能对子鼠学习记忆能力有一定影响.
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宫内暴露氟他胺对子鼠子宫和卵巢发育及氧化应激的影响
目的:探讨氟他胺染毒孕鼠对子代雌鼠子宫、卵巢发育及其氧化应激的影响,为生殖系统畸形的发生机制研究提供线索.方法:8周龄自然受孕ICR雌性小鼠40只,设实验组和对照组,每组20只,实验组在孕12～18 d连续7d进行300 mg/(kg·d)氟他胺灌胃,对照组以等体积大豆油灌胃.于子鼠出生7周后观察雌鼠外形,称体质量,取子宫、卵巢并称子宫、卵巢的质量,计算脏器指数.取小鼠子宫、卵巢组织制作切片,观察其病理学改变并对各级卵泡计数.而后每组随机检测12只子鼠子宫、卵巢中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的含量,并用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测子宫和卵巢中氧化应激基因Noxo1、Sod1及Gpx1的mRNA表达水平.结果:实验组雌性子鼠与对照组相比外观无明显差异,但体质量降低(P＜0.05),子宫与卵巢的脏器系数与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).卵泡计数结果显示,实验组原始卵泡数量和成熟卵泡数量比对照组少(P＜0.05).实验组雌性子鼠子宫中SOD活性、GSH-Px含量低于对照组(P＜0.05),MDA含量高于对照组(P＜0.05).实验组卵巢中SOD活性和GSH-Px含量低于对照组(P＜0.05),MDA含量与对照组间的差异无统计学意义(P＞0.05).实验组子宫中Noxo1mRNA表达水平升高,Sod1 mRNA的表达水平降低,Gpx1 mRNA的表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).实验组卵巢中Noxo1 mRNA表达水平升高、Gpx1 mRNA的表达水平降低(P＜0.05),Sod1 mRNA的表达水平与对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:氟他胺染毒孕鼠可致子代雌鼠子宫和卵巢发育异常,并抑制其子宫和卵巢的抗氧化应激能力.
