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间充质-上皮转化的生物学作用及其影响因素
细胞可塑性是机体多种生物学过程的基础。其中，上皮表型和间充质细胞表型的相互转化是不可忽视的生物学过程。间充质细胞向上皮细胞转化在胚胎发育早期阶段就已开始，并且参与了肾脏等多个器官的形成。此外，间充质上皮转化还参与了机体组织的损伤修复以及肿瘤的发生发展过程。研究表明，多种因素可以促进间充质-上皮转化进程，可能成为促进组织损伤修复和抑制肿瘤生长的治疗靶点。
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尿道下裂子鼠生殖结节中的间充质-上皮转化作用
目的 观察尿道下裂子鼠生殖结节中成纤维细胞的间充质-上皮转化现象,探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)导致尿道下裂的机制.方法 取孕SD大鼠,随机分为DBP组和对照组.于怀孕第13 ～ 19天,DBP组按照800 mg/kg体重DBP溶入玉米油(DBP和玉米油总剂量为3 ml/kg体重)后灌胃,对照组按照3 ml/kg体重玉米油灌胃.怀孕19 d取出子鼠,鉴别出DBP组中发生尿道下裂的雄性子鼠及对照组中的雄性子鼠并分为尿道下裂组和正常对照组,提取两组子鼠的生殖结节.用组织块法原代培养子鼠生殖结节中的成纤维细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,划痕实验检测细胞迁移能力变化,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的mRNA表达,Western blot检测E-cadherin、Vimentin的蛋白表达.结果 对照组的尿道开口于生殖结节顶端,而尿道下裂组的尿道开口于生殖结节腹侧,肛门生殖结节距离[(1.43±0.04) mm]明显小于对照组[(2.27±0.09) mm,P=0.023].子鼠尿道下裂发生率为40.5％.与对照组比较,尿道下裂组生殖结节成纤维细胞形态发生了变化,细胞呈多边型,丝状伪足变短,细胞排列较紧密,平均迁移距离缩短[12 h:(0.17±0.04) mm比(0.14±0.03) mm、24 h:(0.26±0.05) mm比(0.20±0.04) mm,P=0.041],E-cadherin的mRNA和蛋白相对表达量增加、Vimentin的mRNA和蛋白相对表达量降低(E-cadherin、Vimentin mRNA相对表达量:1.00±0.00比1.43±0.31(P =0.034)、1.00 ±0.00比0.51±0.12(P =0.031);E-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量:0.15 ±0.06比1.59 ±0.84(P =0.005)、1.88 ±0.45比0.30±0.13(P =0.003).结论 DBP在诱导子鼠发生尿道下裂的过程当中,促进了子鼠生殖结节中成纤维细胞的间充质-上皮转化作用,这可能与导致尿道下裂的发生有关.
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Twist沉默介导的间充质-上皮转化对乳腺癌干细胞特性的影响
目的 观察Twist沉默介导的间充质-上皮转化(MET)对乳腺癌干细胞特性的影响.方法 小干扰RNA(siRNA)转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测细胞中Twist及MET相关分子[Slug、Snail以及波形蛋白(Vimentin)]的mRNA和蛋白的表达;显微镜观察Twist沉默后细胞的形态变化;流式细胞仪检测CD44+ CD24细胞比例;体外球体形成实验检测细胞自我更新能力;体内有限稀释实验检测细胞启动肿瘤能力.结果 si-Twist组与对照组比较,Twist基因的mRNA(0.24±0.04,P＜0.01)和蛋白表达量明显降低;细胞表现为上皮样形态,排列规则、细胞间连接紧密、成团生长;间质相关分子Slug、Snail、Vimentin mRNA(0.25±0.05,P＜0.01;0.34 ±0.03,P＜0.01;0.44±0.04,P＜0.01)和蛋白表达量明显降低;上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA(58.71±1.27,P＜0.01)和蛋白表达量明显升高;肿瘤干细胞的百分比明显降低[(63.30±0.80)％比(86.50±0.70)％,P＜0.01];球体形成能力明显降低[(46.67±2.52)个比(109.67±2.52)个,P＜0.01];肿瘤起始细胞数目明显减少(1/122 851比1/20 064,P＜0.01).结论 MDA-MB-231细胞中Twist沉默后,细胞发生MET,体外自我更新和体内成瘤能力下降.
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肿瘤发展过程中间充质-上皮转化的研究进展
间充质-上皮转化(MET)与其相反过程上皮-间充质转化(EMT)共同参与细胞可塑性的调节,使其保持相对平衡,并且在胚胎发生和肿瘤进展等方面起至关重要的作用.肿瘤发展过程中的MET与肿瘤转移灶的形成密不可分,这其中涉及众多与MET相关的分子蛋白、细胞间的相互作用、肿瘤干细胞以及肿瘤微环境等方面的内容.我们从与MET相关的细胞表型、分子蛋白、肿瘤干细胞以及肿瘤微环境等方面进行深入探讨,综合MET在肿瘤发生过程中的新研究进展,将对寻求关键靶点来抑制肿瘤细胞的运动与转移能力和实施有效的治疗方案起到重要的理论指导意义.
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miR －200c 对三阴乳腺癌细胞株 MDA －MB －231放疗敏感性的影响
目的：探讨miR－200c对三阴乳腺癌细胞株MDA－MB－231放疗敏感性的影响及潜在的机制。方法将细胞株分成3组，未处理组是指未感染任何慢病毒的原始细胞，miR－NC组是指感染阴性对照慢病毒的细胞，miR－200c组是指利用包装有has－miR－200c的慢病毒感染MDA－MB－231细胞，并建立稳定过表达miR－200c的细胞株模型。 qRT－PCR和Western blot检测间充质－上皮转化（ MET）的标记分子及共济失调毛细血管扩张突变基因蛋白（ ATM）分子的表达；克隆形成实验检测转化后细胞的放射敏感性。结果过表达miR－200c的MDA－MB－231细胞发生间充质样形态向上皮样形态的转变，伴随着MET相关基因的显著改变（ P＜0.05）；转化后细胞的放射敏感性增加；转化后细胞的ATM总蛋白及磷酸化蛋白水平显著减少。结论 miR－200c过表达诱导乳腺癌细胞发生间充质－上皮转化，增加细胞的放疗敏感性，这种作用可能与细胞内ATM表达的下调有关。
