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左归丸含药血清对骨髓间充质干细胞GPR48、BSP表达影响的实验研究
目的:通过左归丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞GPR48、BSP、BGP的实验研究,探究左归丸对治疗骨质疏松症的疗效机制.从而为“肾藏精”这一理论提供实验依据.方法:将SPF级大鼠分为正常组、左归丸组、诱导液组、阳性药物组骨疏康组、福善关,对大鼠进行灌胃5天.制备含药血清,并观察左归丸含药血清对骨髓间充质干细胞的影响.结果:与正常组和阳性药物组及诱导液组相比,左归丸组的蛋白表达水平明显上升.结论:①G蛋白偶联受体GPR48的变化可能引起骨质疏松症的发生;②左归丸能够有效治疗骨质疏松,这种作用可能通过G蛋白偶联受体GPR48信号通路来实现.
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Wnt3a对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及机制研究
目的 探讨Wnt3a对人骨髓间充质干细胞成骨分化及Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 采用成骨诱导培养基联合Wnt3a蛋白(10 ng/mL)诱导人骨髓间充质干细胞分化,通过镜下形态学和茜素红染色评价成骨分化水平.采用实时PCR及Western blotting法检测Wnt3a干预下骨髓间充质干细胞分化过程中第1、5、10、15和20天RUNX2、β-catenin及BSP的表达情况.结果 Wnt3a干预下充质干细胞向成骨细胞分化程度明显高于对照组.Wnt3a能提高RUNX2、β-catenin及BSP mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.05),表达于干预第10天时达到高峰,随后呈轻度下降趋势.结论 Wnt3a通过激活Wnt/β-catenin信号通路调控人骨髓间充质干细胞成骨分化.
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益肾化痰法对乳腺癌骨转移患者血液PTHrP、FGF-β、BSP水平的影响及作用机制分析
目的:分析益肾化痰法方对乳腺癌骨转移患者血清血液PTHrP、FGF-β、BSP水平的影响及作用机制.方法:以河南中医药大学第三附属医院收治的乳腺癌骨转移患者90例为研究对象,采取数字表随机分组法分为观察组与对照组各45例,对照组实施常规乳腺癌骨转移治疗方法,观察组以对照组为基础使用益肾化痰方,对比两组患者血液PTHrP、FGF-β、BSP水平改变与差异及不良反应发生率.结果:干预前两组的PTHrP细胞阳性率无明显差异,P>0.05,干预后两组患者阳性率均降低,但观察组阳性率(69.42±3.12)％低于对照组(77.53±4.01)％,两组相比P<0.05;干预前两组患者的FGF–β细胞阳性指数无明显差异,P>0.05,干预后两组的细胞阳性指数均下降,但观察组的阳性指数(5.02±0.94)分低于对照组(6.80±0.82)分,两组相比P<0.05;干预前两组的BSP细胞阳性率无明显差异,P>0.05,干预后两组患者阳性率均降低,但观察组阳性率(61.31±6.45)％低于对照组(70.40±6.10)％,两组相比P<0.05;观察组患者的治疗不良反应发生率低于对照组(28.98％VS 53.33％),两组相比P<0.05.结论:乳腺癌骨转移患者常规治疗基础上加用益肾化痰方能够有效改善患者的血液PTHrP、FGF-β、BSP水平,对抗骨转移症状,并降低不良反应发生率,其机制与益肾化痰方改善肾虚骨髓空虚及药物有效成份可抑制骨破坏增加骨形成及改善免疫功能有关.
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BSP siRNA 的构建及其对成骨样细胞株MC3T3-E1相关基因表达的影响
目的 构建BSP干扰表达载体,有效沉默小鼠成骨样细胞MC3T3-E1 Subclone 14细胞的BSP基因表达,研究其对MC3T3-E1 Subclone 14增殖分化过程中OCN等成骨相关基因表达的影响.方法 ①利用互联网资源针对BSP基因mRNA序列设计四条可能的小干扰RNA(siRNA),将这四条小干扰RNA插入到RNA干扰载体pGPU6/GFP/Neo中构建成四条干扰载体.②将构建好的BSP siRNA 表达载体pGPU6/GFP/Neo-siBSP-1、pGPU6/GFP/Neo-siBSP-2、pGPU6/GFP/Neo-siBSP-3、pGPU6/GFP/Neo-siBSP-4通过阳离子脂质体将表达质粒分别转染MC3T3-E1 Subclone 14细胞,48h后荧光显微镜下观察不同浓度质粒的转染效率,以RT-PCR 检测BSP和OCN等成骨相关基因mRNA的表达.结果 ①成功构建四条正确的BSP siRNA 表达载体;②成功筛选出一条对BSP有明显抑制作用的siRNA干扰载体,阻断BSP表达后,成骨相关基因cbfa1和OCN的表达均受到明显抑制.结论 构建的BSP siRNA 表达载体可以有效抑制MC3T3-E1 Subclone 14细胞的BSP基因表达,同时抑制相关基因cbfa1和OCN的表达,从而影响该成骨细胞形态与功能,为骨转移等相关疾病的治疗提供了一定的实验基础.
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乳腺癌外周血cfDNA ErbB-2启动子区甲基化状态及与肿瘤Her-2表达的关系
目的：探讨非转移乳腺癌患者外周血中游离无细胞的DNA( cfDNA)中ErbB-2基因启动子区5’CpG甲基化状态及其与肿瘤组织中Her-2表达的关系。方法分离非转移乳腺癌患者外周血中的cfDNA,利用重亚硫酸盐测序法( BSP)对分离出的cfDNA及外周血细胞DNA的ErbB-2基因启动子区进行5’CpG甲基化分析,免疫组化及FISH方法检测肿瘤组织中Her-2的表达情况。结果 ErbB-2基因启动子区5’CpG的甲基化只在乳腺癌患者的血浆cfDNA中检测到(19/40),在其对应的外周血血细胞中未发现；乳腺癌患者外周血cfDNA的ErbB-2基因启动子区5’CpG甲基化和其肿瘤组织Her-2的表达成负相关。结论乳腺癌患者外周血cfDNA ErbB-2启动子区5’CpG的甲基化状态与肿瘤组织Her-2表达呈负相关。提示外周血cfDNA ErbB-2启动子区5’ CpG甲基化状态能从某种程度上反映乳腺癌患者肿瘤组织Her-2表达情况,有可能作为乳腺癌Her-2状态观察的新窗口,可用于帮助乳腺癌分子分型判断,是否能作为乳腺癌治疗的新靶点,并作为Her-2阳性患者早期诊断的指标,尚有待于进一步研究。
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烟草影响人成骨细胞生物学性能机制的研究
目的 探讨尼古丁对体外培养的人成骨样细胞(MG63)生物学性能的影响.方法 用含不同浓度尼古丁(1×10-4mol/L和1×10 -3mol/L)的DMEM高糖培养基体外培养MG63细胞,分别于第3、5.7、10、14天采用MTT比色法检测MG63细胞的增殖力;用Trizol提取总RNA,Real-Time PCR法检测MG63细胞骨桥蛋白、骨唾液磷酸蛋白的基因表达情况.结果 与对照组相比,体外尼古丁处理对MG63细胞的增殖起抑制作用;高浓度尼古丁在第5、7天对细胞骨桥蛋白的基因表达起促进作用;并且尼古丁促进了骨唾液磷酸蛋白的基因表达.结论 尼古丁可抑制成骨细胞的增殖,但不是通过抑制骨桥蛋白与骨唾液磷酸蛋白的分泌起作用.
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大肠癌组织白细胞介素-6表达与其甲基化之间的关系
目的:检测大肠癌中白细胞介素-6(IL-6)表达及启动子甲基化状态,进一步阐明大肠癌(CRC)的发病机制.方法:实时荧光定量PCR (QRT-PCR)检测20例CRC癌组织及癌旁组织IL-6 mRNA水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL-6蛋白浓度,亚硫酸氢盐测序(BSP)检测IL-6启动子甲基化状态.结果:与癌旁组织相比,癌组织中IL-6 mRNA及蛋白表达均显著增高(P＜0.05),并且其蛋白表达随着Dukes分期逐渐升高,差异具有显著性(P＜0.05)；癌组织中,IL-6启动子-633、-611、-575、-575 bp位点甲基化水平均低于相应癌旁组织(P＜0.05),且非甲基化概率随着Dukes分期和分化程度增加而增高(P＜0.05).结论:IL-6在大肠癌中表达增加,并与Duke分期相关,其启动子区低甲基化或去甲基化可能是其表达增高的机制之一；初步筛选出IL-6基因启动子区低甲基化位点,为后续研究奠定基础.
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壮骨镇痛胶囊对裸鼠乳腺癌移植瘤模型骨转移指标ITG-αvβ3及BSP的影响
目的:从实验角度论证壮骨镇痛胶囊预防乳腺癌发生骨转移的疗效,并从肿瘤黏附、浸润转移及分子水平初步探讨产生疗效的机理,为壮骨镇痛胶囊防治乳腺癌骨转移提供有力的药效学实验依据.方法:采用肩胛部皮下接种的方法建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型,观察壮骨镇痛胶囊对裸鼠乳腺癌移植瘤模型骨转移相关指标整联蛋白αvβ3(ITG-αvβ3)及骨唾液酸蛋白(BSP)表达的影响.结果:壮骨镇痛胶囊可以显著降低移植瘤组织中ITG-αvβ3及BSP的表达,与模型组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:壮骨镇痛胶囊具有预防和治疗乳腺癌骨转移的作用,其机制可能与调控ITG-αvβ3及BSP的表达,抑制肿瘤细胞黏附、浸润转移有关.
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人Sox10基因启动子区高甲基化的预测和验证
目的 运用生物信息学方法预测人Sox10基因启动子区甲基化情况并进行实验验证.方法 从GenBank 获取人Sox10基因序列,利用Methyprimer 11.0软件、Li lab、CpG Island Searcher预测其启动子区CpG岛.进一步运用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)和重亚硫酸盐测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)方法检测人Sox10基因启动子区CpG岛在多形性胶质母细胞瘤和瘤周组织中的甲基化情况.结果 经过生物信息学分析发现,人Sox10基因启动子区存在2个CpG岛,分别为165 (1241～1405) bp和105(1 478～1 582) bp.针对这两个CpG岛设计引物行MSP和BSP实验,研究发现,在人多形性胶质母细胞瘤和瘤周组织中Sox10基因启动子区CpG岛均出现部分甲基化,其中在多形性胶质母细胞瘤中的甲基化率为90.5％,在瘤周组织中的甲基化率为28.5％.结论 本研究证实了人Sox10基因启动子区CpG岛在多形性胶质母细胞瘤中出现高甲基化,提示其表达下调可能受甲基化调节.
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变形链球菌Bsp蛋白结构域研究进展
蛋白结构域是指蛋白质亚基结构中明显分开的紧密球状结构区域。 Bsp蛋白结构域基因编码的是一种65kDa的蛋白，含有N-末端，是GBS中的控制细胞形态的蛋白。不同细菌中存在类似于Bsp的蛋白结构域。
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乳腺癌组织中BSP表达及意义
目的:探讨骨唾液蛋白(BSP)在乳腺癌组织中的表达状况及与相关因素年龄、淋巴结转移、骨转移、C-erbB-2的关系.方法:应用免疫组化SP法检测60例乳腺癌与60例正常乳腺组织中BSP的表达,以及在乳腺癌组织中的表达与年龄、淋巴结转移、骨转移、C-erbB-2相关因素进行分析.结果:乳腺癌组织中BSP阳性表达率为78.3%,正常乳腺组织中BSP阳性表达率为15.0%,P＜0.05有统计学差异.BSP表达与年龄、骨转移相关(P＜0.05).结论:BSP在乳腺癌组织中高表达,与乳腺癌浸润和骨转移密切相关,能指导判断乳腺癌侵袭、转移及预后.
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MMP-9、BSP与LRP在乳腺癌组织中表达的研究
目的：探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、骨唾液蛋白（BSP）与肺耐药蛋白（LRP）在正常乳腺组织及乳腺癌组织中的表达状况。方法：应用免疫组化SP法检测60例正常乳腺组织及60例乳腺癌组织中MMP-9、BSP与LRP的表达。结果：乳腺癌组织中MMP-9、BSP与LRP 的阳性表达率分别为75.0％、78.3％、68.3％。正常乳腺组织中MMP-9、BSP与LRP的阳性表达率分别为21.7％、15.0％、10.0％。二者的差异有显著的统计学意义（ P＜0.05）。乳腺癌组织中MMP-9、BSP与LRP的表达呈正相关。结论：MMP-9、BSP与LRP在乳腺癌组织中高表达，与乳腺癌的浸润和转移相关。
