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孕妇小片段游离胎儿DNA进行β-地中海贫血无创性产前基因诊断
目的:探讨利用孕妇外周血浆中小片段游离胎儿DNA(cfDNA)进行β-地中海贫血无创性产前基因诊断的临床价值.方法:本研究收集了来我院进行产前诊断可能生育重型β-地中海贫血的孕妇24例,抽取绒毛或羊水进行常规的地中海贫血的产前诊断,另外收集孕妇外周血液标本8～10 ml,均使用ACD抗凝,对cfDNA进行二次PCR反应后,对胎儿的β-珠蛋白基因型采取反向斑点杂交(RDB)检测,并与有创伤性产前诊断结果进行比较,分析其结果.结果:所有小片段cfDNA均可顺利扩增,父母基因型相同的8例标本中,诊断符合率为87.5％(7/8),1例正常胎儿误诊为携带者;父母基本型不同的16例标本中,诊断符合率为87.5％ (14/16),有2例误诊,其中1例正常胎儿误诊为β-地贫基因携带者,1例β-地贫基因携带者误诊为重型β-地贫患者.结论:利用cfDNA进行β-地中海贫血无创性产前基因诊断具有良好的临床价值.
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循环游离DNA检测用血量的改进及其临床应用
目的 从少量肿瘤患者血液中提取循环游离DNA (cfDNA)并检测其与肿瘤相关的基因突变.方法 选用8例肿瘤患者血常规项目检测完成后剩余的EDTA抗凝全血,采用优化双离心法得到少量血浆并检测cfDNA浓度,对在检测范围内的标本进行建库和靶向外显子捕获,采用Agilent 2100 bioanalyzer进行构建文库的质量检测,随后采用HiSeq 3000 SequencingSystem进行测序,对测序结果进行质量检测(GC Bias检测、Quality by Cycle检测和Insert Size检测),随后进行突变分析.结果 通过优化双离心法可以从2mL血常规检测剩余血液中提取血浆,在这小于1mL的少量血浆中可以提取到浓度合格的cfDNA(11.2 ～58.3ng/μL),构建文库及测序结果均质量合格,并成功检测到cfDNA中肿瘤相关的的基因突变.结论 可以从肿瘤患者血常规检测项目完成后的剩余血液中检测到cfDNA中的基因突变,大大方便了液体活检在肿瘤患者既往留存的血液标本和患者预后随访留取的血液样本中的应用,可以更好对肿瘤患者的基因谱变化进行动态监测及评估.
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PAP动态监测血浆cfDNA在进展期非小细胞肺癌患者治疗中的应用
目的:探讨焦磷酸化激活聚合反应(pyrophosphorolysis-activated polymerization,PAP)动态监测血浆cfDNA在进展期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者治疗中的应用.方法:收集2016年3月至2017年6月就诊的进展期NSCLC患者85例,采用PAP核酸扩增实时荧光PCR法与扩增阻滞突变系统(amplication refractory mutation system,ARMS)实时荧光PCR法检测血浆cfDNA的EGFR突变状况,比较组织与血浆及PAP法与ARMS-PCR检测结果的一致性;对突变阳性的38例患者采用PAP动态监测血浆基因突变状况.结果:血浆与组织突变检测结果差异无统计学意义(P=0.092).PAP与ARMS-PCR突变检测结果差异亦无统计学意义(P=0.210).血浆cfDNA EGFR基因突变的检出率,在疾病进展者中较未进展者中高(62.5% vs.21.3%,P<0.001).结论:PAP可用于血浆cfDNA突变检测及动态监测以提前获得疾病进展的信息.
关键词： 焦磷酸化激活聚合反应 cfDNA EGFR基因突变 非小细胞肺癌 -
CfDNA定量分析在儿童恶性实体瘤的研究进展
循环游离DNA(circulating free DNA,CfDNA)是存在于血液中的DNA片段,主要来自细胞的凋亡、坏死及释放,其含量在健康人体和恶性肿瘤患者血液中存在明显差异,具有与肿瘤相关性的特点.该文综述CfDNA定量分析在恶性实体瘤方面的研究进展,并对其在儿童实体肿瘤方面应用进行展望.
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脓毒症与相关生物分子关系的临床研究进展
脓毒症仍然是世界范围内主要的死亡原因之一.有报道指出脓毒症已成为继心脏病和恶性肿瘤之后常见的死因.尽管目前抗感染和体外支持治疗有了重大进步但其病死率并未得到明显降低.近年来,对于脓毒症生物分子水平的研究取得了长足的进步,为其治疗和预后评估带来了新方向.在这篇综述中,提供了相关生物分子在脓毒症早期明确诊断和(或)病情评价等方面的新研究进展,协助临床医师更好的认识和了解脓毒症.
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乳腺癌外周血cfDNA ErbB-2启动子区甲基化状态及与肿瘤Her-2表达的关系
目的：探讨非转移乳腺癌患者外周血中游离无细胞的DNA( cfDNA)中ErbB-2基因启动子区5’CpG甲基化状态及其与肿瘤组织中Her-2表达的关系。方法分离非转移乳腺癌患者外周血中的cfDNA,利用重亚硫酸盐测序法( BSP)对分离出的cfDNA及外周血细胞DNA的ErbB-2基因启动子区进行5’CpG甲基化分析,免疫组化及FISH方法检测肿瘤组织中Her-2的表达情况。结果 ErbB-2基因启动子区5’CpG的甲基化只在乳腺癌患者的血浆cfDNA中检测到(19/40),在其对应的外周血血细胞中未发现；乳腺癌患者外周血cfDNA的ErbB-2基因启动子区5’CpG甲基化和其肿瘤组织Her-2的表达成负相关。结论乳腺癌患者外周血cfDNA ErbB-2启动子区5’CpG的甲基化状态与肿瘤组织Her-2表达呈负相关。提示外周血cfDNA ErbB-2启动子区5’ CpG甲基化状态能从某种程度上反映乳腺癌患者肿瘤组织Her-2表达情况,有可能作为乳腺癌Her-2状态观察的新窗口,可用于帮助乳腺癌分子分型判断,是否能作为乳腺癌治疗的新靶点,并作为Her-2阳性患者早期诊断的指标,尚有待于进一步研究。
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液体活检在肿瘤检测中的应用进展
液体活检是一种快速、简便的肿瘤血液检测方法,其具有非介入性、可重复性、样本抽取方便等特点.其可以辅助早期诊断及良恶性判断、指导分期及分子分型、筛选药物及监测疗效、提示微转移及预后等,对于疾病的诊断、治疗方法选择及药物功效评估、耐药监测等方面拥有广泛的前景.该文现对液体活检在肿瘤检测中的应用进行综述,为临床肿瘤诊断及治疗提供参考.
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孕妇血浆中胎儿游离DNA的提取
目的 探索从孕妇外周血浆中检测胎儿游离DNA(cfDNA),评估利用cfDNA进行无创性产前基因诊断的可行性.方法 收集30例孕妇的外周血,利用柱吸收的方法提取血浆中的cfDNA,经琼脂糖凝胶电泳分离富集小片段cfDNA,用巢式PCR技术扩增胎儿SRY基因.结果 18例孕男胎的孕妇血浆中有16例经巢式PCR扩增出Y染色体SRY基因,12例孕女胎的孕妇血浆中均未扩增出SRY基因.结论 利用琼脂糖凝胶电泳,切胶回收,可以选择性富集孕妇外周血中的胎儿cfDNA,可用于无创性产前诊断.
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外周血游离DNA 作为肿瘤标志物的临床展望和生物学意义
早在1977年，即有科学家发现在癌症患者血浆和血清中循环游离DNA（CFDNA）异常增高［1］。然而直到近期，人们才意识到癌症患者外周血CFDNA可以作为癌症早期诊断和预后的标志物，并加以研究。至今，已发现在多种类型肿瘤患者中，包括结直肠癌、胰腺癌、肺癌等，CFDNA出现特征性基因改变，包括点突变、微卫星不稳定、DNA超甲基化、杂合子缺失等［2‐5］。多项研究表明，CFDNA的变化与肿瘤原发部位基因改变完全相同。虽然，CFDNA的基因改变与数量上升不能鉴别特定肿瘤，但是处于肿瘤晚期且发生转移的患者往往伴有CFDNA的显著升高。因此，利用CFDNA 传递的遗传信息，对肿瘤患者进行早期分子诊断和预后评估，具有潜在临床价值。
