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  • G蛋白偶联受体48在前列腺癌组织中的表达及其临床意义

    作者:王俊勇;梁芳;张昊;程多;柯洋;李艳艳;刘松格

    目的 探讨G蛋白偶联受体48(GPR48)在前列腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 选取2012年1月至2017年3月本院收治的42例前列腺癌患者手术切除的癌组织标本和癌旁正常组织标本(均经病理检查证实),采用时荧光定量PCR法检测GPR48 mRNA相对表达量,采用免疫组化法检测GPR48蛋白相对表达水平,分析GPR48表达与患者临床病理参数的关系.结果 在前列腺癌组织及癌旁正常组织中,GPR48 mRNA相对表达量分别为0.534±0.032、0.212±0.023(P<0.01),GPR48蛋白相对表达量分别为0.327±0.031、0.097±0.020(P<0.01).相关性分析结果发现GPR48的表达与患者年龄无明显相关性(P>0.05),与患者术前血清总PSA值、TNM分期、Gleason评分正相关(P<0.05).结论 GPR48表达与前列腺癌的恶性程度密切相关,有望成为一种潜在的前列腺癌生物标志物.

  • 左归丸含药血清对骨髓间充质干细胞GPR48、BMP6、ATF4表达影响的实验研究

    作者:陈东阳;林庶茹;邓洋洋;李佳;尚德阳

    目的:通过观察左归丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞GPR48、BMP6、ATF4的表达影响,研究左归丸治疗骨质疏松症的疗效机制,从而证明中医“肾藏精”理论的科学性.方法:将40只SPF级雌性大鼠按照正常组、左归丸组、诱导液组、阳性药物组骨疏康组、福善美组进行随机分组,并灌胃5d,5d后制备合药血清.运用现代医学实验技术观察左归丸含药血清对骨髓间充质干细胞的影响.结果:通过将左归丸组与正常组和阳性药物组及诱导液组的对比,可以看到该组的蛋白表达水平明显上升.结论:①骨质疏松症的发生与G蛋白偶联受体GPR48密切相关;②中药左归丸极有可能通过G蛋白偶联受体GPR48信号通路,来促使骨髓间充质干细胞向骨细胞分化.

  • 左归丸含药血清对骨髓间充质干细胞GPR48、BSP表达影响的实验研究

    作者:陈东阳;林庶茹;尚德阳

    目的:通过左归丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞GPR48、BSP、BGP的实验研究,探究左归丸对治疗骨质疏松症的疗效机制.从而为“肾藏精”这一理论提供实验依据.方法:将SPF级大鼠分为正常组、左归丸组、诱导液组、阳性药物组骨疏康组、福善关,对大鼠进行灌胃5天.制备含药血清,并观察左归丸含药血清对骨髓间充质干细胞的影响.结果:与正常组和阳性药物组及诱导液组相比,左归丸组的蛋白表达水平明显上升.结论:①G蛋白偶联受体GPR48的变化可能引起骨质疏松症的发生;②左归丸能够有效治疗骨质疏松,这种作用可能通过G蛋白偶联受体GPR48信号通路来实现.

  • 桃红四物汤对大鼠创伤性股骨头缺血性坏死进程中GPR48表达的影响

    作者:胡昌凯;孙绍裘;李益亮;朱耀;黄菁菁;孙绍卫;曾祥晶

    目的:观察桃红四物汤对大鼠创伤性股骨头缺血性坏死进程中GPR48表达的影响,探讨桃红四物汤改善坏死股骨头血运及坏死骨新生的作用效果.方法:大鼠造模成功后随机分为桃红四物汤低、中、高剂量组、模型组.桃红四物汤组采用低、中、高剂量灌胃,正常对照组、模型组采用等量的生理盐水灌胃,灌胃8周后收集样本,观察样本大体外观、组织形态学、空骨陷窝率;RT-PCR检测大鼠股骨头坏死过程中GPR48的表达情况.结果:(1)大体样本观察:模型组大鼠股骨头呈暗红色,粗糙,有不同程度的关节软骨面塌陷.桃红四物汤组与模型组基本一致,但塌陷程度较轻.(2)X线结果:模型组、桃红四物汤组出现密度减低区,骨小梁排列紊乱,有不同程度的关节软骨面塌陷.(3)HE染色:模型组、桃红四物汤组股骨头髓腔空虚,造血组织、骨小梁骨细胞大量减少,空骨陷窝大量形成.(4) RT-PCR分析结果:正常对照组、桃红四物汤组、模型组的GPR48表达量逐渐减少,但桃红四物汤组不同剂量之间,随着剂量增高GPR48表达量逐渐升高,差异均有统计学意义(P<0.01).结论:桃红四物汤可促进大鼠创伤性股骨头缺血性坏死进程中GPR48的表达.

  • 靶向GPR48的shRNA抑制人宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移

    作者:高芸;单忠艳;王红;张红梅;滕卫平

    背景与目的:GPR48受体偶联Gs蛋白介导细胞内信号转导通路,通过调节微管聚合状态和基质金属蛋白酶活性,影响肿瘤细胞的侵袭转移.本研究探讨靶向GPR48的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对人宫颈癌细胞株HeLa体外侵袭能力及在体转移能力的影响.方法:以人GPR48 mRNA编码区中两条不同序列作为RNA干扰靶点,构建靶向GPR48的shRNA真核表达质粒,同时构建不针对任何已知mRNA的阴性shRNA真核表达质粒,分别转染至HeLa细胞.新霉索抗性筛选稳定表达siRNA的转化克隆.采用RT-PCR和Western blot检测GPR48的表达变化.通过Boyden小室实验以穿过人工基底膜的细胞数量评估HeLa细胞体外侵袭能力的变化;分别将转染和未转染GPR48 shRNA的HeLa细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况及肺部转移情况.结果:RNA干扰使HeLa细胞GPR48表达下调80%;与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组穿膜细胞数显著减少(28.3±1.5和17.6±1.5 vs.94.4±15.7,P<0.01).裸鼠在体肺转移实验中,与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组肺转移结节数显著减少(1.3±0.2和1.5±0.4 vs.7.8±1.8,P<0.01).结论:shRNA真核表达载体能明显抑制HeLa细胞的GPR48表达.有效抑制HeLa细胞的体外侵袭和在体转移.

  • GPR48单克隆抗体的制备、鉴定及应用

    作者:高芸;单忠艳;王红;滕卫平

    目的:制备GPR48的单克隆抗体,并且初步评估其在体外对子宫颈癌细胞侵袭转移的抑制作用.方法:纯化的GPR48特异性片段作为抗原,细胞融合法制备GPR48单克隆抗体,蛋白免疫印迹法检测单克隆抗体的特异性,用体外侵袭性实验检测该单抗抑制子宫颈癌细胞Hela侵袭转移的作用.结果:制备了效价高、特异性好的GPR48单克隆抗体.当加入10 nmol/L浓度的单克隆抗体时,对照组和实验组的穿膜细胞数分别为280±18、73±11;而当加入单抗浓度为50 nmoL/L时,对照组和实验组的穿膜细胞数分别为267±30、14±3.结论:GPR48单克隆抗体在体外能够显著抑制子宫颈癌细胞的侵袭转移.

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