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PCNA在L-02肝细胞用氢醌处理后的表达
氢醌(Hydroquinone,HQ),是一种重要的工业化学物,同时也是苯在生物体内的代谢产物之一.HQ可经消化道、呼吸道和皮肤吸收,主要在肝脏内代谢.动物实验表明,HQ对肝、肾、造血系统和中枢神经系统等均可造成损害,并导致肿瘤的形成.体外研究也表明,HQ可导致动物及人体细胞染色体及DNA的异常改变,如引起染色体断裂、DNA链断裂,以及产生DNA加合物等 [1-3].此外,还有研究发现氢醌能够干扰T细胞的细胞周期而引起G1期阻滞,并能诱导HL-60细胞发生凋亡 [4-5].然而,目前关于HQ的毒性作用机制仍不太清楚.因此,本研究以体外培养的L-02肝细胞为研究对象,以HQ为受试物,旨在探讨L-02肝细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)在HQ所致肝细胞毒性过程中的分子作用机制.
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硒对六价铬诱导L-02肝细胞DNA损伤的影响
目的研究硒(Se)对六价铬Cr(Ⅵ)诱导肝细胞DNA损伤的影响,探讨Se对Cr(Ⅵ)中毒预防的可能性.方法分别用8和32μmol/L重铬酸钾(K2Cr2O7)溶液处理在含有0.1和10μmol/L亚硒酸钠(Na2SeO3)中培养的L-O2细胞,采用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测L-02肝细胞DNA损伤程度.结果8和32μmol/L K2Cr2O7单独作用时,可引起L-02肝细胞DNA损伤.当Na2SeO3与K2Cr2O7联合作用时,0.1μmol/L NaSeO3对8、32 μmol/L K2Cr2O7诱导的DNA损伤存在明显的拮抗作用,而10 μmol/L Na2SeO3单独存在与K2Cr2O7相互作用均具有诱导DNA损伤的作用.结论Se对L-02肝细胞DNA损伤的影响具有剂量依赖性,即Se在较低处理组水平具有降低Cr(Ⅵ)对L-02肝细胞DNA损伤的作用,在高处理组水平能诱导细胞DNA损伤.
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香烟烟雾水溶性提取物对肝细胞线粒体的损伤
目的 探讨香烟烟雾水溶性提取物(CSW)对L-02肝细胞线粒体结构与功能的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)检测CSW处理L-02肝细胞24 h后的生存率,以确定后续试验CSW染毒浓度为0、8×10-3、16×10-3、32×10-3、64×10-3支/ml培养基.CSW染毒处理L-02肝细胞24 h后用MTF法检测线粒体总酶活力抑制率,荧光分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔(PTP)开放度与细胞线粒体膜电位(△ψm)的变化,透射电子显微镜观察细胞线粒体形态学变化.结果 8×10-3、16×10-3、32×10-3、64×10-3支/ml 4个不同浓度处理组CSW对L-02肝细胞具有一定的细胞毒性,其细胞生存率随CSW处理浓度的增高而降低,且二者呈明显负相关(相关系数r=-0.957);线粒体PTP开放程度则随CSW浓度的增高而增加,32 ×10-3支/ml及其以上CSW浓度组开放度与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);线粒体总酶活力与细胞线粒体膜电位(△ψm)随CSW浓度的增加而下降,二者分别在8×10-3、16×10-3支/ml及其以上CSW浓度组与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).透射电子显微镜观察线粒体形态发生显著改变即表现为肿胀、空泡变性、膜和嵴破损.结论 香烟烟雾水溶性提取物可对L-02肝细胞线粒体的结构与功能造成一定程度损伤.
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L-02肝细胞蛋白质双向电泳条件的建立
人类蛋白质组学的研究是揭示人类生命活动和疾病机制的终阶段,运用蛋白质组学技术寻找各种疾病的关键蛋白和标志蛋白,可实现更加及时、准确的诊断[1].双向电泳技术一个主要的应用领域是"蛋白质组分析",包括对来自一个样品的大量蛋白质同时进行系统地分离、识别和定量.本实验通过比较几种不同的蛋白处理方法,优化双向电泳条件,找出较佳的样本处理方式,为成功进行双向电泳及质谱鉴定提供基础.
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10％浏阳霉素乳剂对肝细胞线粒体损伤效应的研究
目的 研究10％浏阳霉素乳剂(LY-EC)对L-02肝细胞线粒体功能活性的影响.方法 用MTT法检测不同浓度的LY-EC (0～200 mg/L)对L-02肝细胞生存率的影响.选取细胞生存率大于70％的处理组浓度作为后续实验浓度,分别为0、0.39、1.56、6.25和25.00 mg/L.用上述浓度的LY-EC染毒处理L-02肝细胞12h后,用化学比色法测定肝细胞丙二醛(MDA)及谷胱甘肽(GSH)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、琥珀酸脱氢酶(SDH)和ATP酶的活性.另外还测定LY-EC对线粒体膜通透性转运孔(PTP)开放度和肝细胞腺苷酸(ATP、ADP和AMP)含量的影响,并分析ATP/ADP比值以及负荷能量(EC)的变化.用透射电镜观察LY-EC对线粒体超微结构的影响.结果 LY-EC可剂量依赖性地诱导L-02肝细胞生存率下降(r =0.939,P＜0.05).与0.00 mg/L LY-EC处理组相比,不同浓度LY-EC处理的肝细胞MDA含量增加;GSH含量及SOD、SDH和ATP酶的活性降低,线粒体PTP开放度增加(P＜.0.05);肝细胞ATP、TAN含量及ATP/ADP比值降低,能量负荷(EC)增加(P＜0.05).透射电镜观察发现LY-EC染毒的肝细胞胞浆水肿,线粒体肿胀变形,嵴不完整甚至消失.结论 LY-EC可诱导L-02肝细胞氧化应激,线粒体受氧化损伤后,功能活性下降,能量代谢障碍.
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氢醌诱导下肝细胞XPV基因mRNA表达规律的研究
目的 研究氢醌(HQ)对L-02肝细胞XPV基因mRNA表达的影响及其规律,探讨XPV基因在HQ所致肝细胞毒性过程中分子作用机制.方法 体外培养的L-02肝细胞经40μmol/L的HQ诱导后,采用实时荧光定量PCR法检测不同时间点(6、12、24和48h)XPV基因mRNA的表达;并检测不同剂量(0、5、10、20、40、80和160tmaol/L)HQ诱导24h后,各浓度组XPV基因mRNA的表达.结果 在24h的时间范围内,XPV基因在mRNA水平上的表达无论是染毒组(40μmol/L)还是正常对照组,均具有随时间的延长而增加的趋势;到24h时,相对表达量达到大值,当培养时间达到48h时,该基因的表达则有所下降;此外,在各时间处理组(6h、12h、24h和48h)中,染毒组L-02肝细胞内XPV基因在mRNA水平上的表达均高于正常对照组.各剂量HQ作用24h后,L-02肝细胞内XPV基因mRNA的表达在0～80μmol/L范围内随着剂量的增加而增加,以正常对照组XPV基因的相对表达量为1,各染毒剂量组内XPV基因mRNA的相对表达量分别增至1.20、2.02、2.37、2.67、4.40和2.32倍;80μmol/L时其相对表达量达到峰值,160μmol/L的HQ作用后,其表达却有所下降,但仍高于正常对照组.结论 HQ可以诱导XPV基因mRNA的表达变化,并且呈现一定的时间和剂量依赖性,提示XPV基因可能参与了肝细胞对HQ的应答过程.
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六价铬诱导L-02肝细胞凋亡与线粒体功能损伤的关系研究
目的研究六价铬[Cr(Ⅵ)]对L-02肝细胞凋亡率和线粒体功能的影响,初步探讨二者之间的关系.方法选取0、2、4、8、16、32和64μmol/L Cr(vⅥ)溶液处理L-02肝细胞6h,采用流式细胞分析检测细胞凋亡率;荧光分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔(PTP)的开放程度和线粒体膜电位(△ψ,m)的变化.结果2～64μmol/L Cr(Ⅵ)对L-02肝细胞具有细胞毒性,随着Cr(Ⅵ)浓度的增加L-02肝细胞凋亡率升高;线粒体PTP开放程度增加;线粒体膜电位(△ψm)降低,且与对照组比较差异均有显著性(P＜0.05).结论Cr(Ⅵ)诱导L-02肝细胞凋亡与线粒体功能损伤有关.
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氢醌对人L-02肝细胞泛素结合酶Rad6B表达的影响
目的 研究氢醌(HQ)对人L-02肝细胞中泛素结合酶Rad6B表达的影响.方法 将L-02肝细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80和160pmol/L)的HQ处理24h之后,采用实时荧光定量PCR技术检测R且d6B在mRNA水平上的表达;采用Western blot方法检测Rad6B在蛋白质水平上的表达.结果 在0～160gmol/L的范围内,HQ可诱导Rad6B在mRNA和蛋白质水平上表达的增加,具有随着剂量的增加而升高的趋势;并且各染毒剂量组(5、10、20、40、80和160μmol/L组)肝细胞Rad6B在mRNA和蛋白质水平上的表达均明显地高于对照组(Oμmol/L组)(P＜0.01);当HQ的作用浓度达到160pmol/L时,Rad6B的表达水平达到大值,其mRNA和蛋白质表达的相对定量值分别为4.35和0.85.结论 HQ可使L-02肝细胞的Rad6B表达增加.
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纳米石墨碳对人L-02细胞系生长状况的影响
目的 研究纳米石墨碳对人正常肝细胞系L-02生长状况的影响.方法 电子显微镜观察纳米石墨碳颗粒的形态,激光粒度分析仪测定其粒径及Zeta电位;流式细胞术检测纳米石墨碳作用24 h对L-02肝细胞生长周期的影响;电镜观察细胞剖面,用以考察纳米石墨碳颗粒对L-02肝细胞亚显微结构的影响.结果 电镜下纳米石墨碳颗粒呈微小球形,粒径在20～50 nm,表面带负电荷,电位值为-14.8 mV;流式细胞检测结果示实验组L-02肝细胞G0/G1细胞百分数低于对照组,G2/M细胞百分数高于对照组,S期细胞百分数高于对照组;电镜观察纳米石墨碳在细胞质和细胞核内均有分布,实验组肝细胞内的线粒体与对照组无明显差异,胞膜核膜均完整.结论 纳米石墨碳颗粒促进了L-02肝细胞的增殖,纳米石墨碳颗粒可以很好地进入到L-02肝细胞内部,未见其对细胞亚显微结构造成损伤.
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六价铬对L-02肝细胞中Caspase-3与Bcl-2表达影响
为探讨六价铬对L-02肝细胞中Caspase-3与Bcl-2表达的影响,将L-02肝细胞暴露于5、10、20 μmol/L重铬酸钾溶液,在Caspase-3特异性抑制剂氟甲基酮(Z-DEVD-FMK)与Bcl-2特异性抑制剂ABT-737存在的条件下分别检测Caspase-3以及Bcl-2 mRNA的表达水平以及Caspase-3的活力.结果显示Cr(Ⅵ)处理激活Caspase-3但抑制Bcl-2;Caspase-3抑制剂缓解了Bcl-2表达的下降,Bcl-2抑制剂使原本已被激活的Caspase-3表达进一步升高.提示本实验剂量的Cr(Ⅵ)可诱导L-02肝细胞发生细胞凋亡,且Bcl-2与Caspase-3之间存在负反馈调节作用.
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三氯乙烯致肝细胞毒性中SET启动子区甲基化水平的改变
目的 研究三氯乙烯(Trichlorethylene,TCE)致肝细胞毒性中SET基因启动子区甲基化水平的改变.方法 培养L-02肝细胞,使用0、1、2、4、8 mmol/L浓度的TCE处理24 h,提取细胞基因组DNA,进行亚硫酸氢盐修饰,用PCR扩增目标序列,重亚硫酸氢盐测序法(BSP)分析TCE作用下肝细胞中SET基因启动子区甲基化状态.结果 与对照组比较,TCE处理后L-02肝细胞中SET基因启动子区甲基化水平下降,且随着TCE染毒浓度的增加,SET基因启动子区甲基化水平递减.对SET启动子区甲基化差异位点进行分析发现,差异有统计学意义的甲基化位点有73个,已知转录因子结合位点9个.结论 TCE致L-02肝细胞毒性中SET基因启动子区甲基化水平下降,影响转录因子的结合,继而使SET蛋白表达升高.
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三氯乙烯对L-02肝细胞Rho GDIα、ANXA3及GLO1表达的影响
目的 研究三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)处理L-02肝细胞后,Rho鸟苷二磷酸分离抑制因子(Rho GDI α)、膜联蛋白A3(ANXA3)及乙二醛酶Ⅰ(GLO1)的表达变化.方法 以40 μmol/LTCE对L-02肝细胞进行染毒处理,DMSO做溶剂对照.分别采用蛋白质印迹(Western blot)法和实时荧光定量反转录一聚合酶链反应(real-time quantitative RT-PCR)法检测Rho GDIα、ANXA3及GLO1在蛋白质和mRNA水平的表达变化.结果 Western blot法分析结果 显示,TCE处理后Rho GDI α、ANXA3和GLO1蛋白表达水平均上调,差异有统计学意义(P<0.05);实时荧光定量RT-PCR结果 显示,TCE处理后ANXA3和GLO1 mRNA表达的相对值分别为2.786±0.492和1.893±0.402,而Rho GDIα的mRNA表达的相对值为0.563±0.106,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TCE刺激后,RhoGDI α、ANXA3和GLO1蛋白分别在蛋白质和转录水平发生了相应变化,为进一步研究和揭示TCE致肝细胞损伤的分子机制奠定了基础.
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六价铬诱导L-02肝细胞应激损伤的microRNA研究
目的 通过体外实验,在细胞水平探讨六价铬[Cr(Ⅵ)]诱导的L-02肝细胞氧化应激状态及microRNA谱系的改变.方法 实验中设计不同的Cr(Ⅵ)浓度梯度,选择不同的时间点进行观察,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测L-02肝细胞活力,用荧光探针DCFH-DA观察L-02肝细胞氧化应激状态,用实时定量PCR技术检测L-02肝细胞中多个毒物特异性microRNA表达.结果 MTT实验显示5μmol/L浓度的Cr(Ⅵ)是L-02肝细胞70%存活的临界值,在各时间点细胞的存活率分别为84.15%、81.44%、74.25%和68.04%.5μmol/L浓度的Cr(Ⅵ)处理L-02肝细胞8 h可诱发强的氧化应激状态,ROS相对荧光值达169.2%.在氧化应激高点检测到的microRNA改变是:miR-370、miR-let-7和miR-125b表达上调,miR-122和miR-137表达下调,miR-298和miR-153表达差异无统计学意义.结论 金属毒物Cr(Ⅵ)可诱导L-02肝细胞氧化应激状态,并出现特征性的microRNA表达谱.
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氢醌诱导L-02肝细胞凋亡的研究
目的 探讨氢醌(HQ)对体外培养L-02肝细胞凋亡(apoptosis)的影响和HQ毒性作用的分子机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度HQ(0,5,10,20,40,80,160和320μmol/L)作用24 h后L-02肝细胞的相对存活率;采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测HQ染毒后的细胞凋亡状况.结果 HQ在0～80 μmol/L的染毒剂量范围内,对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响(P＞0.05),当HQ染毒剂量超过160 μmol/L时,L-02肝细胞的存活率则明显地下降(P＜0.01).10,20,40,80,160和320μmol/L组L-02肝细胞DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯状条带,并且随着HQ染毒剂量增加而渐趋明显.流式细胞术检测显示,HQ各染毒剂量组(5,10,20,40,80,160和320 μmol/L)作用24 h后均可引起L-02肝细胞的调亡,并呈现出一定的剂量-反应关系;此外,还可出现明显的亚二倍体峰.结论 HQ在体外能够诱导L-02肝细胞发生凋亡.
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维生素C在拮抗Cr(Ⅵ)诱导L-02肝细胞毒性中的时序效应
目的探讨在体外实验系统中维生素C在拮抗六价铬[Cr(Ⅵ)]诱导L-02肝细胞毒性的时序效应.方法实验设对照组、Cr(Ⅵ)组、维生素C组及二者不同时序联合作用组.用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测L-02肝细胞活力,通过回归方程求出各组细胞生长半数抑制浓度(IC50).结果维生素C组IC50为354.21μmol/L;Cr(Ⅵ)组IC50为35.65μmol/L;维生素C与Cr(Ⅵ)同时加入时,IC50为5 111.79μmol/L;Cr(Ⅵ)染毒后再用维生素C处理时,IC50为1 392.51μmol/L;维生素C处理后再用Cr(Ⅵ)染毒时,IC50为3 247.79μmol/L.维生素C与Cr(Ⅵ)联合作用组IC50均明显高于Cr(Ⅵ)单独染毒组,其差异有非常显著性(P＜0.01).维生素C与Cr(Ⅵ)对L-02肝细胞的IC50值顺序为:两者同时加入试验组＞维生素C处理后再用Cr(Ⅵ)染毒组＞Cr(Ⅵ)染毒后再用维生素C处理组.结论无论哪一种顺序加入维生素C对Cr(Ⅵ)所致的细胞毒性均具有拮抗作用,如果与Cr(Ⅵ)同时加入,维生素C对Cr(Ⅵ)诱导的细胞毒性的拮抗作用更强.
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亚硝酸钠与亚硫酸钠联合作用对人肝细胞L-02功能影响
目的 探讨亚硝酸钠(Na2NO2)与亚硫酸钠(Na2 SO3)联合作用对人肝细胞L-02功能影响.方法 采用3×3析因设计:实验设对照组、低、高亚硝酸钠组、低、高亚硫酸钠组、低N低S组、低N高S组、高N低S组、高N高S组,培养24 h,噻唑蓝法(MTT)检测细胞活力,酶联免疫吸附法测定乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量.结果 与对照组比较,亚硝酸钠、亚硫酸钠组L-02细胞内ALT、MDA含量均升高,呈剂量-效应关系;高N高S组L-02细胞ALT水平低于两者单独作用之和,MDA含量高于两者单独作用之和(P＜0.01);高N低S组L-02细胞MDA含量低于两者单独作用之和(P＜0.01);Na2NO2、Na2SO3对L-02细胞内ALT水平、MDA含量影响的交互作用明显(F=3.955、17.402,P＜0.05),对LDH、AST、SOD、GSH交互作用不明显(F=1.928、2.238、2.273、2.283,P＞0.05).结论 Na2NO2、Na2 SO3对肝细胞有联合毒性作用,其机制可能与肝细胞膜损伤和氧化应激有关;Na2NO2、Na2SO3对L-02细胞培养液中ALT水平影响表现为拮抗作用,对L-02细胞内MDA含量影响表现为协同、拮抗作用.
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L-02肝细胞对氢醌所致DNA损伤耐受实验模型的初步建立
目的 确定氢醌(hydroquinone,HQ)对L-02肝细胞的染毒剂量和染毒时间,从而为进一步的DNA损伤耐受机制研究提供科学依据.方法 采用噻唑蓝(MIT)比色法测定不同浓度(0、5、10、20、40、80、160和320 μmol/L)的HQ于不同时间(6、12、24和48 h)作用之后L-02肝细胞的相对存活率.结果 在相同的作用时间(6、12或24 h)条件下,在0～320 μmol/L范围内,随着HQ浓度的增加,各剂量组L-02肝细胞的存活率以剂量依赖性方式逐渐减少;其中160和32μmol/L组L-02肝细胞的存活率与对照组相比较有明显地减少(P＜0.01);而在48 h时间组内,HQ染毒剂量达到80μmol/L就可引起L-02肝细胞存活率的明显降低(P＜0.01).在相同浓度(5、lO、20和40 μmol/L)的HQ作用下,随着HQ作用时间的延长,各剂量组细胞的存活率之间差异没有统计学意义(P＞0.05);当HQ染毒时间达到48 h时,80、160和320 μmol/L的HQ染毒组L-02肝细胞的存活率与6 h对照组比较有明显地减少(P＜0.01).结论 可以将80 μmoL/L的HQ染毒24 h作为L-02肝细胞耐受DNA损伤的大剂量和长时间的界限.
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氢醌诱导下肝细胞PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA表达的时间效应
目的 研究氢醌(hydroquinone,HQ)诱导下L-02肝细胞PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA表达的时间效应,探讨PCNA、RAD6B及RAD18基因在HQ所致肝细胞毒性过程中的分子作用机制.方法 体外培养的L-02肝细胞经40 μmol/L的HQ诱导不同时间(6、12、24和48 h)后,用Trizol试剂从L-02肝细胞中分离总RNA,而后反转录为cDNA;利用Primer 3软件设计PCNA、RAD6B及RAD18基因及内参照β-ACTIN基因的引物,并进行标准曲线分析和熔解曲线分析,建立和优化定量检测各目的 基因在mRNA水平上表达的反应体系和反应条件;后采用实时荧光定量PCR法检测不同时间点PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA的表达状况.结果在各时间处理组(6、12、24和48 h)中,染毒组L-02肝细胞内PCNA、RAD6B及RAD18基因在mRNA水平上的表达均高于未染毒组.在24 h的时间范围内,PCNA基因在mRNA水平上的表达无论是染毒组(40 μmol/L)还是未染毒组(0 μmol/L),均具有随时间的延长而增加的趋势;到24 h时,相对表达量达到大值.RAD6B和RAD18基因在未染毒组中的表达在48 h范围内均有随时间的增加而升高的趋势,它们均在48 h时间点上表达高,其相对表达量分别为2.66和4.32;但在染毒组中,RAD6B基因和RAD18基因在48 h处的表达则有所下降,其相对表达量分别由3.74和4.83降至2.78和4.61.结论 HQ可以诱导PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA的表达上调,并且呈现一定的时序性.
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砷诱导L-02细胞的耐砷性及细胞内MDR1、GST-π基因的表达
[目的]观察砷诱导人胚肝(L-02)细胞耐砷性及细胞内耐砷性多药耐药基因1(MDR1)、谷胱甘肽-s-转移酶,π(GST-π)的表达水平.[方法]应用噻唑蓝(MTT)比色法检测浓度分别为0、1、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100mmol/L的亚砷酸钠(NaAsO2)作用24h后,对L-02细胞生存率的影响.并选择细胞生存率在90%-95%时的NaAsO2浓度为诱导浓度对细胞进行培养,以不加砷诱导的L-02细胞为对照,两组细胞在相同条件下培养6周,利用MTT法每周观察细胞生存率并计算半致死浓度(LC50)来反映细胞对砷的耐受性改变;利用real-time PCR检测培养6周后的细胞内MDR1、GST-π mRNA的表达情况;免疫组化法(SABC法)检测细胞内P-糖蛋白(P-gP)、CST-π蛋白的表达情况.利用MTT法和石墨炉原子吸收光谱法检测浓度为10mmol/L的NaAsO2作用24h后细胞生存率和细胞内总砷浓度以观察两组细胞在再次大剂量急性砷中毒中的反应.[结果]经NaAsO2诱导6周后,诱导细胞LC50和生存率都明显高于正常细胞(P<0.001);诱导细胞MDR1、GST-π mRNA的表达明显较正常细胞高(P<0.001);与对照组比较,诱导细胞P-gP、GST-π蛋白表达明显增高(P<0.001);在再次急性砷中毒试验中,诱导细胞生存率明显高于正常细胞(P<0.001),诱导细胞内总砷浓度较正常细胞低(P<0.001).[结论]L-02细胞具有可诱导的对砷的耐受现象,其耐砷性可能与MDR1、GST-π基因高表达有关.
关键词： 亚砷酸钠 L-02肝细胞 多药耐药基因1 谷胱甘肽-S-转移酶π -
氢醌对L-02肝细胞损伤的研究
[目的]探讨氢醌(HQ)对L-02肝细胞损伤及其可能的作用机制.[方法]应用噻唑蓝(MTT)比色法检测浓度分别为0、5、10、20、40、80、160和320μmol/L的HQ作用24h后对L-02肝细胞存活率的影响;利用万能倒置显微镜观察不同浓度HQ染毒之后L-02肝细胞的形态学改变并摄影成像;利用全自动生化分析仪检测不同浓度HQ染毒24h后L-02肝细胞的乳酸脱氢酶(LDH)漏出率和丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,以观察HQ对L-Y2肝细胞膜完整性的影响.[结果]在0～80 μmol/L浓度的范围内染毒24h后,HQ对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响(P＞0.05);浓度≥160μmol/L时,染毒24h后,存活率则明显下降(P＜0.01),LDH漏出率、ALT和AST活性均有随着HQ浓度的增加而升高的趋势;160和320μmol/L组LDH漏出率与对照组比较有明显升高(P＜0.01).但ALT和AST活性只在320μmol/L组与对照组比较才有明显增加(P＜0.01).此外,160和320μmol/L组L-02肝细胞的形态与对照组相比发生了明显的改变.[结论]HQ可能是通过损伤细胞膜而对L-02肝细胞产生毒性影响.
