优化的SD大鼠小胶质细胞原代培养、纯化及采用高内涵细胞成像分析技术进行的细胞鉴定
摘要： 目的 建立一种优化的大鼠小胶质细胞(microglia,MG)原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)对其进行细胞鉴定.方法 取1d的新生SD大鼠,解剖显微镜下分离大脑皮质,机械剪碎成1mm3组织块,加入质量分数为0.125％的胰蛋白酶和质量分数为0.1％的胶原酶(体积比为1∶1)消化10 min后进行体外培养,分别观察接种5、7d后小胶质细胞基本形态结构;采用低速震摇+温和消化+差速贴壁的三联法纯化细胞,分别观察纯化1、3、6d后小胶质细胞基本形态结构;采用HCA技术对小胶质细胞进行其特异性抗体(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba-1)免疫细胞化学染色鉴定.结果 经优化法培养的小胶质细胞,数量多、纯度高、活性好,细胞胞体狭长,突起形状不规则,呈单极、双极、蜘蛛状或其它分枝状,且分别可见静息态与活化态的细胞,并呈现典型的小胶质细胞特征和良好的生长状态;经优化法培养的小胶质细胞,采用HCA进行Iba-1免疫细胞化学染色鉴定,MG纯度质量分数达98％以上.结论 建立了一种小胶质细胞原代培养及纯化方法,同时采用HCA技术成功对其进行细胞鉴定,为后续小胶质细胞相关体外研究奠定了良好的实验基础.
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HPLC法同测定芩连片中盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量
目的 建立同时测定芩连片中盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量的方法,用于芩连片的质量控制.方法 采用HPLC法.色谱柱为Diamonsil ODS柱(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相为50mmol·L-1磷酸二氢钠(pH 4.6)-乙腈(体积比72:28),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为343nm,柱温为35℃.结果 芩连片中盐酸巴马汀、盐酸小檗碱与其他成分分离良好;盐酸巴马汀的质量浓度在5.2～52.0mg·L-1(r=0.9998)内、盐酸小檗碱的质量浓度在30.4～304.0mg.L-1(r=0.9997)内与峰面积呈良好的线性关系;盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的回收率分别为100.1%、99.9%,RSD分别为1.1%、0.80%.结论 所建立的同时测定芩连片中盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量的HPLC法准确、重现性好,可用于芩连片的质量控制.
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HPLC法测定硝苯地平阿替洛尔缓释双层片中2组分含量
目的测定硝苯地平阿替洛尔缓释双层片中2组分含量.方法采用ODS(Hypersil, 5 μm,4.6mm×200mm)为填充剂,甲醇-水-磷酸(70:30:0.1)流动相的高效液相色谱法.结果硝苯地平和阿替洛尔线性分别为0.40～1.20μg,0.80～2.38μg;回收率分别为99.8%(RSD=1.0%),99.9%(RSD=0.5%).结论该方法为评价该制剂的质量提供了可靠的方法.
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国产荧光素钠注射液中杂质的检测及结构鉴定
目的 对国产荧光素钠注射液中的杂质进行分离及结构鉴定.方法 采用RP-HPLC法对荧光素钠注射液进行成分分析并用硅胶柱色谱法对主要杂质进行分离,根据质谱和核磁共振谱数据进行结构鉴定.结果和结论 荧光素钠注射液中含有6-羟基-7-磺酸基-9-(邻羧基苯基)-3H-呫吨-3-酮、6-羟基-9-(邻乙氧基羰基苯基)-3H-呫吨-3-酮和2-(2,4-二羟基苯甲酰基)苯甲酸等杂质.
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RP-HPLC法测定大鼠胃肠道内容物及肝组织中5-氟尿嘧啶的浓度
目的 建立一种测定大鼠胃肠道内容物及肝组织中5-氟尿嘧啶浓度的方法.方法 取大鼠胃肠道内容物及肝组织匀浆液,加入内标利巴韦林后,用乙酸乙酯提取,60 ℃水浴挥干,流动相溶解进样.流动相为水-甲醇(体积比100:1),色谱柱为ODS C18(4.6 mm×200 mm,粒径5 μm),流速为0.8 mL·min-1,检测波长为266 nm,柱温为室温.结果 方法回收率为90.2%～100.4%,提取回收率为58.5%～80.4%,日内RSD为4.2%～7.2%,日间RSD为4.7%～7.9%.结论 HPLC法可以用于大鼠胃肠道内容物和肝组织中5-氟尿嘧啶浓度的检测.
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毛细管区带电泳法同时测定冬虫夏草中多种核苷及其碱基成分含量
目的探讨毛细管电泳法研究天然冬虫夏草用不同溶剂提取的效果及测定其中核苷及其碱基含量的可行性.方法采用Unimicro毛细管电泳仪,石英毛细管柱(60 cm×75 μm I.D.),运行缓冲液分别为36 mmol/L硼砂-15 mmol/L磷酸二氢钠(pH 8.9),分离温度20℃,分离电压15 kV,测定波长254 nm,虹吸进样15 s.结果基线分离冬虫夏草不同溶剂提取的样品.腺苷、尿苷、尿嘧啶和次黄嘌呤含量分别为0.30%、0.28%、0.14%、0.05%;平均回收率分别为96.4%、98.2%、94.3%、95.1%;RSD分别为0.89%、1.2%、1.4%、1.8%(n=6).结论该法准确,快速,灵敏度高,对名贵药冬虫夏草的质量控制有较重要意义.
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通经草叶中粉背蕨酸的分离及含量测定
目的 对通经草叶中的特征成分粉背蕨酸进行分离、纯化和结构鉴定,并采用HPLC法对通经草叶中粉背蕨酸的含量进行首次测定.方法 色谱柱为Betasil-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-体积分数为0.1%磷酸水溶液(体积比为85∶15),检测波长215 nm,流速1.0mL·min-1,室温,采用外标法测定.结果 粉背蕨酸质量浓度在2.475～49.50 mg·L-1内线性关系良好(r=0.999 6),方法精密度(RSD)为1.6%(n=6),加样回收率为98.2%～100.8%.结论 该方法操作简便、分析速度快、重复性好、结果准确可靠,可用于通经草叶中粉背蕨酸的含量测定.
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用液相色谱-质谱联用法测定滨蒿中的茵陈色原酮
以薄层色谱、高效液相色谱、三维高效液相色谱对滨蒿中利胆保肝活性成分进行了分离分析,采用液相色谱-质谱联用仪、电喷雾离子阱质谱对其结构进行鉴定.结果表明:滨蒿中的利胆有效成分除含有绿原酸、对羟基苯乙酮、6,7-二甲氧基香豆素外,还首次分离鉴定出具有保肝活性的茵陈色原酮.
关键词： 滨蒿 茵陈色原酮 高效液相色谱 液相色谱-质谱联用仪 -
复方磺胺甲(口恶)唑片的胶束薄层色谱分析
以十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液为展开剂、聚酰胺薄膜为固定相,对复方磺胺甲(口恶)唑片(复方新诺明)中两组分进行定量分析.磺胺甲基异(口恶)唑(SMZ)和甲氧苄氨嘧啶(TMP)分别在4.0～12.0 mmo/L和3.5～10.5 mmol/L范围内吸收峰面积和浓度呈良好的线性关系.相关系数分别为0.999 5和0.999 8,回收率分别为101.4%和99.5%,RSD(%)分别为0.58和1.60.
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HPLC/MS法测定人血浆中氯雷他定的浓度及人体生物等效性
目的建立测定人血浆中氯雷他定的LC/MS方法,并应用于药物制剂生物等效性研究.方法18名健康受试者单剂量口服氯雷他定20 mg后,血浆样品经液-液萃取,通过液相色谱-质谱联用法测定其质量浓度,并计算药动学参数.结果氯雷他定测定方法的线性为0.5～20.0 μg·L-1,定量下限为0.5 μg·L-1;参比制剂的主要药动学参数tmax为(0.94±0.21) h,ρmax为(16.41±2.83)μg·L-1,t1/2为(9.56±4.21)h,用梯形法计算,AUC0～t为(38.70±6.93)μg·h·L-1;受试制剂的主要药动学参数tmax为(0.94±0.21)h,ρmax为(16.45±2.42)μg·L-1,t1/2为(8.89±4.06)h,用梯形法计算,AUC0～t为(43.67±9.55)μg·h·L-1,以AUC0-t计算,受试制剂相对生物利用度为(113.4±19.0)%.结论该法适用于氯雷他定制剂的生物等效性评价.
关键词： 氯雷他定 高效液相色谱-质谱联用法 血浆药物质量浓度 生物等效性 -
小鼠血浆及组织中芦丁和槲皮素 HPLC检测方法的建立
血浆或组织匀浆液标本经甲醇-冰醋酸提取,采用HPLC法测定小鼠血浆和组织中芦丁和槲皮索的含量.芦丁和槲皮素线性范围均在1～150μg/mL内;低检测浓度芦丁为0.3μg/mL、槲皮素为0.5弘g/mL芦丁及槲皮素日内、日间RSD分别在2.04%～6.87%、2.32%～7.03%范围内;芦丁的方法回收率为89.5%～104.6%、槲皮素为87.6%～105.7%;提取回收率芦丁为70.9%～95.6%、槲皮素为79.9%～99.3%.建立了血浆或组织中芦丁和槲皮素HPLC测定法.方法简便、灵敏、可靠,能满足体内药物分析的需要.
