兔盘前移颞下颌关节的髁突软骨细胞中SOX9和MMP12的表达
摘要： 目的：研究Sox9基因、基质金属蛋白酶基因12（MMP12）在兔盘前移颞下颌关节的髁突软骨细胞中时空表达变化。方法：60只日本大耳白兔随机分为5组（对照组，1、2、4、8周组；每组12只），分别在颞下颌关节盘前移位建模后的1、2、4、8周处死，取出髁突软骨并将关节部位制成组织芯片，利用DNA微阵列技术、实时荧光定量PCR、免疫组化技术和IPP图像处理技术观察不同组内髁突软骨中Sox9、MMP12表达。结果：基因检测和rtPCR验证结果基本一致，显示为MMP12的表达在第1周达到高值，之后随建模时间递减，在第8周达到小值（表达下降），Sox9的表达第1周较低，随后略有上升，在第2、4、8周分别检测到其表达上升并存在统计学差异。结论：MMP12和Sox9同为骨性表达相关因子，在盘前移位颞下颌关节中，MMP12主要参与早期骨溶解破坏、炎症反应，Sox9主要参与后期软骨的修复重建。
-
富血小板纤维蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化的研究
目的:研究富血小板纤维蛋白(PRF)通过Wnt/β-catenin信号通路对骨髓基质干细胞(BMSCs)分化的影响.方法:分离、培养原代兔BMSCs,取第三代细胞进行干细胞鉴定,收集同一只兔耳缘静脉血离心制备PRF,将PRF与BMSCs置于Transwell小室中共培养并进行成骨分化.实验分组:A组为单纯BMSCs对照组;B组为PRF与BMSCs共培养组;C组为加入DKK1的PRF与BMSCs共培养组;D组为加入Wnt3a的PRF与BMSCs共培养组.茜素红染色观察各组钙结节形成情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测各组ALP活性,定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测成骨成脂相关基因Runx2、OCN、PPARγ2及LPL的mRNA表达,同时检测Wnt/β-catenin信号通路关键因子CyclinD1及β-catenin的mRNA表达.结果:流式细术检测结果显示,原代培养的BMSCs符合间充质干细胞鉴定标准.茜素红染色结果显示,B组和D组的钙结节数量明显多于A组和C组,A组和C组之间无明显差异.碱性磷酸酶(ALP)活性检测结果显示,B组与D组的ALP活性较A组和C组明显增加(P<0.05),且两组之间差异无明显统计学意义.qRT-PCR结果显示B组与D组中的成骨分化标志基因Runx2、OCN的mRNA表达,较A组和C组显著增加(P<0.05),而成脂分化标志基因PPARγ2、LPL的mRNA表达显著降低(P<0.05).此外,B组和D组中Wnt/β-catenin信号通路关键因子CyclinD1及β-catenin的mRNA表达较A组和C组显著增加(P<0.05).结论:PRF通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化而抑制其成脂分化.
-
载药纳米粒明胶纤维缓释支架对牙周膜细胞MMPs的影响
目的:研究载免疫抑制剂SB203580的纳米粒-明胶(Ms-SB203580-gelatin)纤维缓释支架对牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteninases,MMPs)表达的影响.方法:通过透析法制备载药纳米胶束(Micelles-SB203580,Ms-SB203580),并通过电纺法构建载纳米粒明胶支架,检测支架材料的细胞相容性和对牙周膜细胞MMP-2、MMP-13基因和蛋白的表达影响.结果:透射电镜显示载药纳米粒能负载于明胶纤维中;细胞与支架复合后增殖情况良好;实验组MMP-2、MMP-13的表达低于阳性对照组.结论:载药纳米粒明胶纤维缓释支架能明显地抑制炎症因子,可进一步应用于牙槽骨骨组织工程.
-
目标基因测序技术检测与下颌前突相关的BMP-Smad信号通路基因突变
目的:采用目标基因捕获联合二代测序技术探索BMP-Smad信号通路基因与下颌前突(mandibular prognathism)相关的变异.方法:从同济大学附属口腔医院收集176例下颌前突患者及155例正常对照,分别采集5 mL静脉血并提取基因组DNA.采用NimbleGen捕获富集系统对病例对照组的23个目标基因的编码区和侧翼区进行捕获富集,通过Illumina Hiseq 2000测序平台进行测序.通过比较变异位点基因型及等位基因分布频率的差异,探索与下颌前突相关的突变位点.结果:共发现7个与下颌前突相关的常见变异,分别位于5个基因上:chr4:81975103(BMP3)、rs7078571(BMPR1A)、chr2:148686946(ACVR2A)、rs1128919(ACVR2A)、rs2070489(ACVR2B)、chr18:48610378(SMAD4)、chr18:48610376(SMAD4).未发现罕见变异的分布差异有显著性.结论:通过目标基因测序的方法检测到了病例对照组中的常见变异和罕见变异,并发现了与下颌前突相关的可能致病基因BMP3、BMPR1A、ACVR2A、ACVR2B、Smad4.未检测到下颌前突的罕见致病位点.
关键词： 下颌前突 目标基因捕获 新一代测序 BMP-Smad信号通路 突变 -
CC趋化因子7和趋化因子受体7在口腔白斑及口腔鳞癌组织中的表达及意义
目的:探讨CC趋化因子7在口腔白斑组织中的表达及意义.方法:选取2011-03—2014-03期间,在我院口腔科治疗的口腔白斑患者43例,口腔鳞癌患者41例,以及正常口腔黏膜组织46份,利用免疫组化法对不同组织中CCL7和CCR7蛋白表达情况进行检测.结果:CCL7蛋白在口腔白斑组织中的表达低于口腔鳞癌组织,而高于正常黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);CCR7蛋白在口腔白斑组织中表达低于口腔鳞癌组织,而高于和正常黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,口腔白斑组织中CCL7蛋白和CCR7蛋白表达呈正相关(r=0.594,P<0.05).结论:CCL7和CCR7蛋白表达均表现出从口腔正常黏膜组织到口腔白斑到口腔鳞癌逐渐升高的趋势,且二者呈正相关,可能参与了口腔白斑癌变过程.
-
miRNA-21在口腔鳞癌患者唾液中的表达及意义
目的:探讨miRNA-21在口腔鳞癌患者唾液上清中的表达及其临床意义.方法:以2012-01—2015-06期间,新余市人民医院口腔科收治的64例口腔鳞癌患者及25例健康对照人群为研究对象,收集唾液标本,采用实时定量聚合酶链反应技术,检测唾液标本中miRNA-21表达情况,并分析其与口腔鳞癌临床病理学特征之间的联系.结果:口腔鳞癌患者唾液上清液中miRNA-21的表达水平(2.75±0.94)显著高于健康对照组(0.78±0.45,P<0.01).相关性分析结果显示,唾液上清液中miRNA-21表达水平与口腔鳞癌细胞分化程度(P<0.01)及淋巴结转移状态(P<0.05)显著相关.受试者工作特征曲线分析结果显示,唾液上清液中miRNA-21表达水平,评价口腔鳞癌细胞分化程度的敏感性和特异性为89.5%和66.7%.结论:口腔鳞癌患者唾液上清液中miRNA-21的表达上调,可能与口腔鳞癌的发生发展有关,唾液中miRNA-21可作为评价口腔鳞癌细胞分化的辅助指标.
-
牙周膜对于牙槽骨吸收影响的初步研究
目的:通过影像学和组织形态学观察,比较脱位牙的再植位点与自然愈合拔牙创的牙槽骨高度,并观察保留或刮除牙周膜对再植脱位牙的牙槽骨骨量影响.方法:选取3只成年雄性健康Beagle犬,间隔拔除其下前牙3颗,并将每只实验犬的前牙分成3组,有牙周膜再植组(T1),无牙周膜再植组(T2),拔牙创自然愈合组(T3).4个月后处死Beagle犬,切取实验位点组织块,Micro-CT扫描分析,制作硬组织磨片,HE染色后在光学显微镜下进行组织学观察及形态学观察.结果:Micro-CT分析显示,T1组骨小梁数量(Tb.N)多于其他两组(P<0.05),差异有统计学意义,而T2和T3组差异无统计学意义;骨小梁间隙(Tb.Sp)在T1组间隙明显小于T2组,差异有统计学意义(P<0.05),T2和T3组间差异无统计学意义;骨量比(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)等骨微参数,各组间差异无统计学意义.HE染色显示,在所有试验位点颊侧牙槽嵴发生垂直骨降低,但三组间骨量吸收值的差异无统计学意义.在距颊侧牙槽嵴顶以下1 mm位置处的颊侧骨壁的水平宽度,T2和T3组间具有统计学意义(P<0.05);而在2、3 mm两个水平位置处,各组间差异均无统计学意义.结论:牙拔除后20 min内,牙再植回拔牙窝中,相比于自然愈合,可以保留更多牙槽骨骨量,而进一步保留再植牙的牙周膜活性,更有利于颊侧新骨形成.
-
骨保护素基因敲除对老年小鼠关节软骨的影响
目的：研究骨保护素（osteoprotegerin, OPG）在老年小鼠关节软骨增龄性变化中的作用及意义。方法：取鼠龄为1年的骨保护素基因敲除（opg-knockout, Opg-KO）型小鼠和野生型（wildtype，WT）小鼠的长骨组织，分别进行X-ray、micro-CT检查，并行组织学染色观察关节软骨组织形态学的改变；行甲苯胺蓝染色，观察关节软骨蛋白聚糖的改变；行免疫组化染色，观察关节软骨Ⅱ型胶原表达情况。结果：与WT小鼠相比，Opg-KO 小鼠关节表面粗糙，边缘性骨赘增多，软骨下骨的骨密度增高，关节软骨表面扁平塌陷，软骨细胞明显减少，排列紊乱，蛋白聚糖显著丢失，Ⅱ型胶原表达明显减少。结论：Opg-KO小鼠发生了严重骨关节炎，骨保护素对于维持老年小鼠关节软骨结构的完整有重要作用。
-
CGF与脂肪干细胞联合应用修复大鼠全层皮肤缺损的研究
目的：探讨以明胶海绵为支架材料，复合浓缩生长因子（concentrated growth factor，CGF）诱导的大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)得到的组织工程皮肤替代物，对大鼠全层皮肤缺损愈合的作用。方法：取健康雄性大鼠脂肪组织分离、培养并鉴定脂肪干细胞，观察CGF对其增殖、分化的影响。在健康雌性大鼠背部制造一直径3 cm全层皮肤缺损，其上覆盖复合脂肪干细胞的明胶海绵（A组）、无细胞的明胶海绵（B组）或不作处理单纯包扎（C组）。术后观察各组缺损的愈合情况，并于7、14、21 d及完全愈合后，取背部全层皮肤作组织学观察。结果：CGF能促进体外培养的ADSCs增殖；术后伤口渗出物、红肿等炎症反应A组
关键词： 浓缩生长因子(CGF) 脂肪干细胞(ADSCs) 创伤愈合 组织工程 -
双膦酸盐对大鼠颌面骨及外周骨不同来源骨髓间充质干细胞成骨分化的影响
目的：研究临床常用第三代双膦酸盐———唑来膦酸，对大鼠颌面骨及外周骨两种来源的骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的影响。方法：从新生SD大鼠中分离和培养颌骨或髂骨来源的BMSCs，观察不同浓度唑来膦酸对2种来源BMSCs的影响。观察较高浓度的唑来膦酸对这2种细胞碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌的影响。结果：髂骨来源的BMSCs在唑来膦酸浓度≥2.0μg/mL时增殖受到抑制，浓度≤1.0μg/mL时增殖不受影响。而颌骨来源的BMSCs，当唑来膦酸浓度≥0.5μg/mL时细胞增殖就已受到明显的抑制。较高浓度的唑来膦酸（1.0μg/mL）可抑制颌骨BMSCs碱性磷酸酶的活性以及骨钙素形成；但此浓度，对于髂骨BMSCs碱性磷酸酶活性、骨钙素的形成并没有明显的影响。结论：双膦酸盐对不同来源的BMSCs增殖和成骨分化的影响有差异，可为探索双膦酸盐相关颌骨坏死的发病机制提供理论基础。
-
TLR9依赖的p38MAPK信号通路对鼠原发性舍格伦综合征的影响
目的：在动物模型NOD（非肥胖型糖尿病）鼠中，观察研究Toll样受体9（Toll Like Receptor 9, TLR9）依赖的p38MAPK信号通路在原发性舍格伦综合征发病机制中的作用。方法：实验选取5周龄的雌性NOD小鼠，分别给予3种抑制剂：ODN2088、VX-792、羟氯喹。利用流式细胞学技术检测小鼠外周血淋巴细胞的情况。利用免疫组化检测小鼠下颌下腺TLR9及p-p38 MAPK的表达情况。利用酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测小鼠外周血中血浆抗体的表达。利用Tunel方法检测小鼠下颌下腺腺上皮细胞的凋亡。同时，观察小鼠刺激性唾液流率的改变以及下颌下腺病理学改变。结果：只有ODN2088组的NOD小鼠的唾液流率显著增加。在所有被给予羟氯喹的NOD鼠和未接受治疗的NOD鼠中，下颌下腺均有淋巴细胞浸润灶的出现。但在ODN2088组中，只有1只NOD小鼠出现下颌下腺的淋巴细胞浸润灶。在VX-702组中，所有NOD小鼠均未发现淋巴细胞浸润灶。所有实验组的外周血淋巴细胞的数目显著减少。ODN2088组NOD小鼠的抗SSA/Ro抗体和抗SSB/La抗体的浓度是所有实验组中低的。结论：TLR9依赖的p38MAPK信号通路的抑制，能一定程度上减轻原发性舍格伦综合征动物模型NOD鼠的临床表现。
