坐骨神经结扎对大鼠背根神经节和脊髓背角神经元磷酸化环酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响
摘要： Objective To investigate whether chronic constriction injury (CCI) of the sciatic nerve of rats could produce alterations in the phosphorylation of cyclic AMP response element binding(CREB) protein in dorsal root ganglia (DRG) and superficial dorsal horn neurons of the spinal cord. Methods Chronic constriction injury (CCI) of the sciatic nerve was employed as a model of neuropathic pain. Thirty-two Sprague-Dawley rats were randomly divided into Naive, Sham, CCI 2w(received CCI for 2 weeks) and CCI 4w(received CCI for 4 weeks)groups. Hind paw withdrawal threshold to mechanical stimuli and withdrawal latency to thermal stimuli were used to determine the mechanical and thermal hyperalgesia. Then all the rats were deeply anesthetized and perfused intracardially with paraformaldehyde. The fixed L4-5 spinal cord and the L5 DRG ipsilateral to CCI were harvested for fixation. The pCREB-immunoreactive(pCREB-IR) cells in both DRG and superficial dorsal horn neurons were quantified for analysis using immunohistochemistry methods. Results On the 14th day after sciatic nerve injury, all the rats exhibited significant mechanical and thermal hyperalgesia. The mechanical withdrawal thresholds to yon Frey filament from CCI 2w group decreased significantly compared to both baseline values and those of Sham group( P ＜ 0.01); Thermal withdwal latencies from CCI 2w group decreased significantly compared to both baseline values and those of Sham group( P ＜0.01). Some rats from Sham group also showed mechanical hyperalgesia compared to hoth baseline values and those of Naive group( P ＜ 0.01 ). 28 days after CCI, both mechanical and thermal hypersensitivity were significantly alleviated, with no statistical significance compared to those of Sham group. On the 14th day after CCI, the number of pCREB-IR cells significantly increased in ipsilateral L5 DRGs and superficial dorsal horns( P ＜0.01) compared to Sham group. The number of phosphorylated CREB-IR cells in the ipsilateral DRGs from Sham group also increased compared to that of Naive rats( P ＜ 0.05). There were no significant statistical differences of numbers of CREB-IR neuron between Sham group and CCI 4w group. Conclusion CCI increases CREB phosphorylation both in DRG and superficial dorsal horn neurons of the lumbar spinal cord, and may be one of the key molecular mechanisms of central and peripheral sensitization following peripheral nerve injury.
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微小RNA-30c-2-3p在缺氧预处理心肌细胞保护中的作用
目的 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-30c-2-3p在心肌细胞缺氧预处理心肌保护中的作用. 方法 新生SPF级大鼠心肌细胞培养72 h后,接种于6孔板中,密度为5×105个/ml,按随机数字表法分为3组(每组72个培养孔,检测各指标时每组取6孔,重复3次):对照组(Sham组)、缺氧/复氧组(AR组)和缺氧预处理组(PAR组).Sham组心肌细胞正常培养,AR组心肌细胞进行缺氧3h/复氧6h处理,PAR组心肌细胞在进行缺氧3h/复氧6h处理前行缺氧30 min/复氧30 min单循环处理.复氧6h后,各组采用比色法检测心肌细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率,Annexin V/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR (real-time PCR)法检测miRNA-30c-2-3p和X-box结合蛋白-1(X-box binding protein-1,XBP1)mRNA表达水平,Western blot法检测XBP1s(内质网应激后,XBP1剪接后翻译成具有转录调节活性的XBP1)和免疫球蛋白结合蛋白(binding immunoglobulin protein,BiP)表达情况.采用双荧光素酶基因报告实验验证miRNA-30c-2-3p和XBP1的靶向关系. 结果 与Sham组比较,AR组和PAR组心肌细胞LDH漏出率和细胞凋亡率升高,miRNA-30c-2-3p、XBP1 mRNA和XBP1s、BiP表达升高(P＜0.05).与AR组比较,PAR组心肌细胞LDH漏出率和细胞凋亡率降低,miRNA-30c-2-3p表达降低,XBP1 mRNA和XBPIs、BIP表达升高(P＜0.05).双荧光素酶基因报告结果证实XBP1为miRNA-30c-2-3p的靶基因. 结论 缺氧预处理可能是通过低表达miRNA-30c-2-3p进而增加XBP1s表达而减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,BiP可能是XBP1产生心肌保护效应的下游因子之一.
关键词： 缺氧预处理 心肌保护 微小RNA 微小RNA-30c-2-3p 内质网应激 -
阴部神经脉冲射频消融术联合阴部神经阻滞治疗阴部神经痛的临床疗效和安全性评价
目的 探讨阴部神经脉冲射频消融术(pulse radiofrequency,PRF)联合阴部神经阻滞(pudendal nerve blockade,PNB)治疗阴部神经痛的临床疗效和安全性评价. 方法 将80例阴部神经痛患者按电脑数字表法随机分为脉冲射频+阴部神经阻滞组(PRF+PNB组)和阴部神经阻滞组(PNB组),每组40例.PRF+PNB组患者行阴部神经PRF联合PNB治疗,PNB组行PNB治疗.于术后1、14、30、90 d对患者进行VAS评分随访,于术后第3个月行HPQ-9评分和疗效评估,并记录所有手术相关并发症. 结果 本次试验共77例患者完成了随访,PNB组39例,PRF+PNB组38例.术后1d时,两组患者VAS评分较术前均降低(P＜0.05),且组间差异无统计学意义(P＞0.05).术后14、30、90 d时PRF+PNB组VAS评分低于PNB组(P＜0.05).术后90 d时,PRF+PNB组患者健康问卷(Patient Health Quwstionnaire-9,HPQ-9)评分低于PNB组(P＜0.05),PRF+PNB组术后90 d有效率达92.1％,PNB组有效率为35.9％.两组均未随访观察到严重的不良反应. 结论 与单纯的PNB相比,阴部神经PRF联合PNB治疗,能够更长效地缓解阴部神经痛患者的疼痛症状,并对患者抑郁情绪有所改善,且不增加术后不良事件发生.
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降钙素基因相关肽通过PKC-mitoKATP通路抑制缺氧/复氧诱导的caspase-3和caspase-9酶活性升高
目的 研究降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对缺氧/复氧(anoxia/reoxygenation,A/R)诱导大鼠心肌细胞凋亡的影响及其相关的信号转导通路. 方法 选用60只健康1～3 d龄SD大鼠,建立心肌细胞体外原代培养模型,采用随机数字表法将心肌细胞分成10组,并进行分组实验(每组6孔):①对照组;②A/R组;③CGRP组(CGRP+A/R组);④特异性CGRP受体阻滞剂组(CGRP8-37+CGRP+A/R组);⑤线粒体ATP敏感性钾通道(ATP sensitive potassium channel,KATP)阻滞剂组(5-HD+CGRP+A/R组);⑥线粒体KATP激动剂组(DZ+A/R组);⑦蛋白激酶A阻滞剂组(H-89+CGRP+A/R组);⑧蛋白激酶C阻滞剂组(chelerythine+CGRP+A/R组);⑨非特异性KATP阻滞剂组(glibenclamide+CGRP+A/R组);⑩细胞膜KATP阻滞剂组(HMR-1098+CGRP+A/R组).采用分光光度法分别检测各组心肌细胞A/R损伤后caspase-3、caspase-9酶活性. 结果 与对照组比较,A/R组心肌细胞中caspase-3、caspase-9的酶活性均明显升高(P＜0.05).与A/R组比较,CGRP+A/R组心肌细胞中caspase-3、caspase-9的酶活性均明显降低(P＜0.05),使用10-6 mol/L CGRP8-37阻滞剂该作用可被逆转(P＜0.05).此外,与A/R组比较,DZ+A/R组心肌细胞中caspase-3、caspase-9的酶活性均明显降低(P＜0.05).与CGRP+A/R组比较,glibenclamide+CGRP+A/R组和5-HD+CGRP+A/R组心肌细胞中caspase-3、caspase-9的酶活性均明显升高(P＜0.05),而HMR-1098+CGRP+A/R组心肌细胞中caspase-3、caspase-9的酶活性并未明显升高(P＞0.05).与CGRP+A/R组比较,chelerythine+CGRP+A/R组心肌细胞中caspase-3、caspase-9的酶活性出现明显升高(P＜0.05),H-89+CGRP+A/R组心肌细胞中caspase-3、caspase-9的酶活性有升高的趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 CGRP主要通过激活蛋白激酶C-线粒体敏感性钾通道(protein kinase C-mitochondrial KATP,PKC-mitoKATP),降低凋亡蛋白酶caspase-3、caspase-9的表达,来减轻心肌细胞A/R损伤,发挥抗心肌细胞凋亡作用.
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去氧肾上腺素联合限制性输液在老年患者全髋关节置换术中的应用
目的 研究去氧肾上腺素联合限制性输液对老年全髋关节置换术患者术中血流动力学及术后并发症的影响.方法 选择徐州医科大学附属医院2017年5月至2017年11月60例住院行择期单侧全髋关节置换术患者,按随机数字表法分为2组(每组30例):常规输液组(S组)和去氧肾上腺素联合限制性输液组(NR组).S组按常规方法补液,包括累计缺失量、每小时生理需要量、补偿性扩容量、体液再分布量、失血量.NR组按限制性方法补液:从建立静脉通道后60 min内以复方电解质注射液输入累计液体损失量的1/2,之后以4ml·kg-1·h-1的恒定速度输液,麻醉诱导即刻静脉泵注去氧肾上腺素0.2 μg·kg-1-min-1.2组术中失血量以等容量6％羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液补充.观察并记录患者入室(T0)、麻醉诱导后(T1)、手术开始(T2)、骨水泥灌注前(T3)、灌注即刻(T4)、灌注后3 min(T5)、灌注后10 min(T6)、术毕(T7)时的心率、MAP、心排血量(cardiac output,CO)、心脏指数(cardiac index,CI)、每搏量(stroke volume,SV);于T0及T7时抽取动脉血测定乳酸值;记录术中液体出入量及术后并发症等情况. 结果 与T0比较,S组和NR组在T1～T7时的心率、MAP、CO、CI和SV明显降低(P＜0.05).与S组比较,NR组在T1、T4、T5的MAP、CO、CI、SV更高(P＜0.05).两组患者术中各时点心率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与S组比较,NR组的总液体输注量、晶体输注量、术中尿量更少,差异有统计学意义(P＜0.05).与S组比较,NR组术后发生高血压、恶心呕吐及术后并发症的总例数更少,差异有统计学意义(P＜0.05).两组患者术前、术毕乳酸值比较,差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 去氧肾上腺素联合限制性输液对维持血流动力学稳定及减少并发症是安全、有效的.
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乌司他丁联合帕瑞昔布钠对老年胸腹腔镜食管癌根治术患者认知功能的影响
目的 探讨乌司他丁联合帕瑞昔布钠对老年胸腹腔镜食管癌根治术患者认知功能的影响. 方法 择期行食管癌根治术的患者162例,按随机数字表法分为乌司他丁组(39例)、帕瑞昔布钠组(41例)、联合组(42例)和对照组(40例).乌司他丁组于切皮前静脉泵注5 000 U/kg乌司他丁,帕瑞昔布钠组于麻醉诱导前10 min静脉注射40 mg帕瑞昔布钠,联合组于麻醉诱导前10 min静脉注射40 mg帕瑞昔布钠、于切皮前静脉泵注5 000 U/kg乌司他丁,对照组按照联合组的方法给予等量的生理盐水.记录各组患者手术一般情况,分别于术前(T0)、术毕(T1)、术后6 h(T2)、术后24 h(T3)、术后72 h(T4)时,利用ELISA法检测血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、IL-1β、IL-6、TNF-α水平,分别于T0、T3、T4和术后7 d(T5)时应用简易智力状态检查(Mini-mental State Examination,MMSE)量表评估各组患者认知功能. 结果 与对照组比较,T1～T4时乌司他丁组、帕瑞昔布钠组和联合组血清MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均降低(P＜0.05),而血清GSH-Px、SOD水平均升高(P＜0.05);与乌司他丁组和帕瑞昔布钠组比较,T1～T4时联合组血清MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均降低(P＜0.05),而血清GSH-Px、SOD水平均升高(P＜0.05).T3、T4时乌司他丁组、帕瑞昔布钠组、联合组MMSE评分较对照组升高(P＜0.05),联合组MMSE评分较乌司他丁组和帕瑞昔布钠组均升高(P＜0.05).T3时对照组、乌司他丁组、帕瑞昔布钠组和联合组术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)发生率分别为35.0％、23.1％、24.4％和14.3％,联合组低于对照组(P＜0.05). 结论 乌司他丁联合帕瑞昔布钠应用于老年胸腹腔镜食管癌根治术患者可有效改善患者术后认知功能,其机制可能与减轻氧化应激及炎症反应有关.
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儿茶酚氧位甲基转移酶基因rs4680多态位点与乳腺癌切除手术术后疼痛的相关性分析
目的 探讨儿茶酚氧位甲基转移酶(catechol-O-methyl transferase,COMT)基因rs4680多态位点与术后疼痛的关系,为个性化用药提供理论依据. 方法 择期全身麻醉行乳腺癌切除手术患者83例,年龄29～58岁,ASA分级Ⅰ、Ⅱ级.采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)对83例患者COMT基因rs4680位点进行基因型鉴定,根据基因类型将患者分为野生型Val/Val(VV,51例)、杂合型Val/Met(VM,23例)和突变型Met/Met(MM,9例);采用同源建模对突变前后蛋白质的三级结构进行预测,并对蛋白理化性质进行分析.采用统一的静吸复合麻醉方案进行术前麻醉,术后行患者自控静脉镇痛(patient controlled intravenous analgesia,PCIA),记录24h内镇痛泵的有效及无效按压次数,并用疼痛数字评分法(Numerical Rating Scale,NRS)评估不同基因型术后2、4、8、24h疼痛情况.结果 COMT基因rs4680突变对蛋白三级结构无明显改变,但对蛋白的部分理化性质有所影响.术后24 h内MM患者PCIA总按压次数明显高于VV患者和VM患者(P＜0.05),MM患者PCIA有效按压次数明显高于VV患者(P＜0.05),但3种基因型患者PCIA按压有效率差异无统计学意义(乃0.05).术后各时点3种基因型患者NRS评分比较,差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 COMT基因单个多态位点rs4680可能对乳腺癌患者术后疼痛的个体化差异影响不大.
关键词： 儿茶酚氧位甲基转移酶 基因多态性 同源建模 术后疼痛 乳腺癌 -
新辅助化疗对乳腺癌患者围手术期炎性因子及术后早期痛觉敏感性的影响
目的 探讨新辅助化疗对行乳腺癌改良根治术的女性患者围手术期炎性因子及术后早期痛觉敏感性的影响.方法 采用队列研究设计.择期行乳腺癌改良根治术的女性患者80例,ASA分级Ⅰ、Ⅱ级.根据是否接受新辅助化疗分为新辅助化疗组(N组)和对照组(C组),每组40例.所有患者均接受标准麻醉方案.记录患者一般情况、术中指标(手术时间、术中失血量及输液量、麻醉药物用量等)及术后指标(术后不良反应等).于麻醉开始前即刻(T1)、气管插管后即刻(T2)、手术切皮后即刻(T3)、拔出气管导管后即刻(T4)及术后24 h(T5)分别采集外周静脉血3 ml,检测血清IL-1β、IL-6、IL-8、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的水平.采用疼痛数字评分法(Numerical Rating Scale,NRS)对患者T5、术后48 h(T6)、术后72 h(T7)进行疼痛评分.如患者术后NRS＞4分,静脉给予奈福泮20 mg镇痛,30 min后再次评估. 结果 N组T5～T7时点NRS评分均高于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).N组T1 ～T5各时间点IL-1β、IL-6、IL-8的浓度均高于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).N组T1 ～T5各时间点TGF-β浓度均低于C组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 新辅助化疗可增加乳腺癌改良根治术患者术后24～72 h的急性疼痛程度,可能与化疗药物使围手术期炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8的表达增高、TGF-β的表达降低有关.
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脂多糖抑制小鼠肺成纤维细胞自噬的观察性研究
目的 观察体外原代培养的小鼠肺成纤维细胞在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下,自噬微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1LC3)(以下简称LC3)和Beclin-1的表达情况,以明确LPS对肺成纤维细胞自噬的调控作用. 方法 将培养至4～7代的小鼠肺成纤维细胞接种于6孔培养板,密度1×104个/ml.待细胞贴壁后,更换无血清培养基饥饿过夜,采用随机数字表法将其分为4组(每组3孔):PBS对照组(Con组)、250μg/L LPS组(LPS250组)、500μg/LLPS组(LPS500组)、1 000 μg/L LPS组(LPS1000组),除Con组外,其余组分别加入以上终浓度LPS,各组在加入PBS或LPS后30 h裂解细胞并提取总蛋白,通过Western blot法比较小鼠肺成纤维细胞经不同浓度LPS刺激后LC3和Beclin-1蛋白的表达情况;同时,采用随机数字表法将传代细胞分为2组(每组3孔):IF-Con组(加入PBS作为对照)和IF-LPS组(加入1 000 μg/L的LPS),采用免疫荧光技术比较IF-Con组和IF-LPS组中小鼠肺成纤维细胞内自噬小体的表达情况. 结果 随着LPS刺激浓度的增高,LC3蛋白表达量下调,而LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在Con组高,随LPS刺激浓度的升高逐渐降低,LPS1000组中,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ较Con组降低(P＜0.05);Beclin-1蛋白的表达量在Con组、LPS250组和LPS500组间差异无统计学意义(P＞0.05),而在LPS1000组中,Beclin-1蛋白表达较Con组明显下调(P＜0.05).同时,免疫荧光实验结果显示IF-LPS组中小鼠肺成纤维细胞内自噬小体的表达量较IF-Con组明显降低. 结论 在体外培养的小鼠肺成纤维细胞中应用1 000μg/L的LPS可以下调LC3和Beclin-1的蛋白表达,并抑制自噬小体的形成,表明LPS可以抑制肺成纤维细胞的自噬.提示LPS抑制肺成纤维细胞的自噬可能是肺纤维化发生的机制之一.
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布比卡因复合枸橼酸舒芬太尼或右美托咪定用于经尿道前列腺电切术蛛网膜下腔麻醉的影响
目的 探讨布比卡因复合枸橼酸舒芬太尼或右美托咪定用于经尿道前列腺电切术(transurethral resection of prostate,TURP)蛛网膜下腔麻醉的影响.方法 选择择期行TURP患者90例,ASA分级Ⅰ、Ⅱ级,年龄65～75岁,BMI20～30 kg/m2,采用随机数字表法将患者分为3组:右美托咪定组(D组)、枸橼酸舒芬太尼组(S组)和生理盐水组(N组),每组30例.布比卡因蛛网膜下腔麻醉后,D组复合右美托咪定5μg,S组复合枸橼酸舒芬太尼5μg,N组给予等容量的生理盐水.记录阻滞起效时间和持续时间,观察并记录术中、术后Richmond躁动镇静评分(Richmond Agitation and Sedation Scale,RASS)以及寒战、恶心呕吐等副作用发生情况.结果 3组患者年龄、BMI、手术时间、输液量、出血量等差异无统计学意义(P＞0.05).3组患者各时点RASS评分差异无统计学意义(P＞0.05).与D组和N组比较,S组患者术中恶心呕吐发生率较高,差异有统计学意义(P＜0.05).与N组比较,D组和S组感觉阻滞起效时间缩短、持续时间延长,差异有统计学意义(P＜0.05),运动阻滞起效时间缩短、持续时间延长,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 鞘内注射布比卡因复合枸橼酸舒芬太尼或右美托咪定在TURP中都能起到良好的麻醉作用,但复合右美托咪定发生寒战、恶心呕吐等副作用较少.
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超声引导下腹横肌平面阻滞用于肠肿瘤开放术术后镇痛的疗效观察
目的 探讨超声引导下腹横肌平面阻滞(transversus abdominis plane block,TAPB)在肠肿瘤开放术术后切口镇痛方面的有效性.方法 全身麻醉下行腹直肌旁正中切口的肠肿瘤患者80例,ASA分级Ⅰ～Ⅲ级,用随机数字表法分为TAPB组(T组)和对照组(C组),每组40例.常规麻醉诱导后,吸入七氟醚维持麻醉,BIS值维持在40～60;T组患者在超声引导下行单侧TAPB,C组患者切皮前及关腹前各给予10μg舒芬太尼.比较两组患者术后PACU及术后2、6、12、24 h静息及咳嗽状态时切口痛疼痛数字评分(Numerical Rating Scale,NRS)、镇痛泵累积按压次数、镇痛泵首次按压时间、T组患者术后切口痛出现时间及术后恶心呕吐(postoperative nausea and vomiting,PONV)评分.结果 T组患者静息NRS评分在术后PACU[0分比(2.9±1.1)分]、术后2 h[0分比(3.1±0.7)分]、术后6 h[(1.2±0.5)分比(3.7±0.9)分]低于C组(P＜0.05);T组患者镇痛泵累积按压次数在术后PACU[0次比(1.1±0.7)次]、术后2 h[(0.5±0.9)次比(2.0±1.2)次]、术后6 h[(1.7±1.1)次比(4.5±2.3)次]、术后12h[(4.5±2.2)次比(8.5±3.3)次]、术后24h[(8.1±3.3)次比(12.8±3.1)次]少于C组(P＜0.05);T组患者PONV评分在术后PACU[0分比(2.1±-0.9)分]、术后2h[0分比(1.7±0.8)分]、术后6h[0分比(2.2±0.6)分]、术后12h[(0.9±0.6)分比(2.2±0.7)分]、术后24 h[0分比(2.1±0.9)分]低于C组(P＜0.05).结论 超声引导下TAPB能提供良好的术后切口镇痛,减少术后阿片类药物的应用,降低PONV评分.
