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高海拔西藏地区辅助生殖技术培养条件中CO2浓度的初步研究
目的 在西藏拉萨(海拔约3 650 m)研究开展人类辅助生殖技术(ART)所需的胚胎实验室培养条件,为西藏地区广大不孕不育夫妇提供ART治疗奠定基础. 方法 利用血气分析仪检测COOK培养液(受精液、卵裂液、囊胚液)在不同CO2浓度下(4.5%~7.0%)平衡不同时间(12 h、24 h、48 h、72 h)后的pH值和HCO3-浓度变化情况,选择COOK培养液所需的佳CO2浓度,并利用鼠胚实验进一步验证胚胎培养环境的可靠性. 结果 (1)在所测试的CO2浓度范围内,COOK培养液pH值随着CO2浓度的增加呈整体下降趋势,随着平衡时间的延长呈逐渐上升趋势.(2)在4.5%、5.0%、5.5%的CO2浓度下平衡12h、24 h、48 h、72 h后,COOK受精液、卵裂液pH值均在厂商提供的使用范围内(7.3~7.5),囊胚液平衡48 h后pH接近7.3.(3)对比4.5%和5.0%CO2浓度组培养箱中鼠胚培养情况,结果显示4.5%CO2浓度组鼠胚发育较5.0%CO2浓度组差异显著(受精率75.24% vs.67.63%、2细胞转囊胚率61.94% vs.49.29%)(P<0.01). 结论 海拔3 650 m的胚胎实验室使用COOK培养液时,在4.5 %CO2浓度下平衡后,培养液的pH值波动较小,同时鼠胚发育情况良好,达到开展ART技术所需的胚胎实验室的胚胎培养条件;另外,COOK培养液pH值在7.3~7.5之间所需的CO2浓度低于内地,与厂商所提供的随着海拔的升高而增加并不相符.后期仍需进一步摸索海拔和培养液所需CO2浓度之间的关系.
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人辅助生育技术培养环境的质量控制
人类辅助生殖技术已成为当今治疗不育症的主要手段,为取得令人满意的种植率与临床妊娠率,体外受精(IVF)实验室的培养环境便成为生殖助孕工作者关注的重点.本文介绍几种常用于IVF实验室的生物测试质量控制方法.
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婴儿培养箱的基本原理及安全使用
婴儿培养箱是为早产儿、低体重儿、病危儿、新生儿提供一个类似母体子宫的培养环境的设备,也可用于婴儿体温复苏、输液、抢救、住院观察等场合.由于婴儿自身的抵抗能力十分微弱,这就要求培养箱具有稳定的性能,能为婴儿提供一个更加趋近于母体子宫的环境,就更有利于婴儿的健康.医护人员了解其基本工作原理才能正确的操作使用,仪器效能才能得到更大的发挥.
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低氧对组织工程研究中间充质干细胞培养的影响
是维持生命必不可少的物质.人体正常组织和组织间隙中的氧分压为24-66 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),即3%~9%(体积分数,下同)[1],骨髓腔内的氧分压为8-56 mm Hg(1%-7%)[2].而目前细胞体外培养环境的氧分压通常为159 mm Hg,即氧浓度约为21%.Papandreou等[3]认为外界氧供和细胞的氧需应维持平衡,从而保证细胞的良好生长环境.Morrison等[4]认为在绝大多数的组织培养中,3%~6%的氧浓度更接近生理学浓度范围.
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纺锤体与人卵母细胞质量的关系
纺锤体是卵母细胞的一个重要组成部分,是由极间微管、染色体牵丝及区间牵丝排列组成的中部宽阔,两极缩小的形状如纺锤的结构.一般在细胞分裂中期,其结构为典型.在细胞分裂过程中,纺锤体对卵母细胞染色体的平衡、运动、分配和极体的排出有非常重要的作用.纺锤体异常,会导致异常的减数分裂,有可能产生异常的胚胎.纺锤体对细胞质和周围环境的改变非常敏感[1],因此,它的形态学变化可能反映了体外培养环境中卵母细胞的质量.本研究从受精、卵裂及正常受精卵培养第3天的良好胚胎形成等3个方面,探讨纺锤体与人卵母细胞质量的关系;同时,通过观测纺锤体与第一极体之间的角度,预测卵母细胞质内单精子注射(ICSI)操作的安全性.
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心肌组织工程生物反应器研究进展
组织工程的研究主要围绕种子细胞、生物材料和组织构建这三个基本要素而展开.组织构建技术是组织工程研究的核心.组织工程生物反应器是一种体外构建人体组织的系统装置.心肌组织工程在替代和维持梗塞的心肌组织功能,并进而治愈疾病以大限度地挽救病人生命方面可能发挥巨大作用.主要介绍了国内外工程化心肌组织体外构建技术,特别是用于构建工程化心肌组织的心肌组织工程生物反应器研究方面的进展.
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人类胚胎干细胞的研究近况
人类胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hES)研究始于1998年,它已成为继人类基因组计划后生命科学中活跃的研究领域.利用hES细胞修复或替代因各种因素所造成的人体组织器官缺损和功能障碍是人类疾病治疗模式划时代的革新.用于细胞替代治疗的hES细胞必须具备安全性、有效性、免疫豁免性三大特点,因而很多研究集中于以下课题:(1)纯化hES细胞培养环境,避免动物源性物质的污染.(2)hES细胞诱导分化为各种成体细胞及其前体细胞以及移植.(3)体细胞核移植与hES细胞系的建立.(4)hES细胞与基因治疗.
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微囊微环境对脐血细胞造血相关基因表达的影响
[目的]利用基因芯片技术研究微囊微环境对脐血细胞造血相关基因表达的影响.[方法]将新鲜分离的人脐血细胞在生理条件下进行微囊化包封、培养7 d后,对其进行总RNA提取、纯化、体外转录合成cRNA探针、cRNA探针生物素标记、与基因芯片杂交、扫描杂交信号,后进行芯片数据处理和生物学信息分析. [结果]基因芯片筛选结果显示,与平面培养对照组相比,微囊化培养脐血细胞中差异表达2倍及以上的造血相关基因有32个,其中19个表达上调,13个表达下调.[结论]微囊微环境影响脐血细胞造血相关基因的表达.
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基因1~6型无血清 HCV 颗粒培养体系的建立和特点
近产生 HCV 颗粒(HCVcc)的细胞培养系统已经建立。构建无血清培养环境可能是制造无活性全病毒疫苗好的发展方向。来自 Hvidovre 医院的 Mathiesen CK 等描述了通过 Huh7.5细胞培养于腺病毒表达介质获得基因型1~6型的无血清 HCVcc(sf -HCVcc)。与 HCVcc 相比,sf -HCVcc 显示出0.6~2.1l g 倍的感染性滴度的增加,可能与 sf -HCVcc 的释放增加和特异性感染力相关。与 HCVcc 相反,sf -HCVcc 在密度梯度谱中只有一个同源性高峰。sf -HCVcc 的进入依赖于 HCV 共同受体 CD81、LDLr、SR -BI 和 clathrin 介导的细胞内吞。HCVcc 和 sf -HCVcc 能被慢性 HCV 感染者的血清中和,也能被抗构象表位的人单克隆抗体中和。因此作者发明了产生高滴度单一密度 sf -HCVcc 的无血清培养系统,显示与 HCVcc 相似的生物学特性。这种方法可能推进 HCV 疫苗发展,并有利于 HCV 的生物学研究。
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浅谈工程化软骨组织的体内外培养
培养环境对工程化组织的形成至关重要.本研究采用两种胶原水凝胶为支架,包载骨髓基质干细胞,构建工程化软骨组织,分别进行体外培养和兔关节腔植入培养,通过细胞活性观察和组织学染色,分析两种培养方式的效果.结果表明,动物体内具有比体外培养更好的生长环境,利于细胞增殖和分化.
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体外培养环境对脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达的影响
目的研究体外培养环境对脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达的影响.方法脐血单个核细胞(MNC)在静态和动态培养系统中培养7 d后,收集CD34+造血干/祖细胞,利用SMART-PCR技术从少量RNA中扩增cDNA用于标记探针,与基因芯片杂交后分析培养前后以及不同培养模式下培养的CD34+造血干/祖细胞基因表达的差异.结果在所检测的588个基因中,45个基因在培养前后的CD34+造血干/祖细胞中差异表达,其中20个基因在培养后表达上调,25个基因表达下调.另外,12个基因在不同培养模式中差异表达,只有CCL2在动态培养中高表达,而其余11个基因均在静态培养中高表达.结论通过分析体外培养环境对CD34+造血干/祖细胞基因表达的影响,可以在分子水平上理解CD34+造血干/祖细胞对培养环境的生理响应.
关键词: 脐血 CD34+造血干/祖细胞 培养环境 基因表达 -
间充质干细胞在关节软骨缺损修复中的应用
外伤或炎症造成的关节软骨缺损在骨科临床十分常见.关节软骨缺损可造成疼痛、关节畸形,甚至严重的功能障碍,严重影响人们的生活质量.传统的软骨修复方法包括软骨下钻孔术、磨削术和微骨折术等,临床疗效欠佳.近年来,越来越多的新方法开始应用于关节软骨缺损的基础与临床研究.其中软骨组织工程作为研究的焦点,正日益受到科研工作者和临床医生的广泛关注.软骨组织工程包括种子细胞的选择、支架材料的应用和培养环境的构造三个方面[1].选择合适的种子细胞对于软骨组织工程至关重要.
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MTA对胎鼠颅骨细胞表达4种标志性蛋白mRNA与细胞培养环境的关联研究
目的:探讨MTA对胎鼠颅骨细胞标志性蛋白Cbfa1、ALP、Col-Ⅰ和BGPmRNA表达及细胞培养环境中钙、磷元素变化的关联及影响.方法:采用2种酶混合多次消化,获得原代胎鼠颅骨细胞,将细胞与MTA共培养.采用RT-PCR技术检测Cbfα1、ALP、Col-Ⅰ和BGPmRNA在第4、7、14、21天时的表达变化,使用原子吸收分光光度法每2d检测细胞外钙、磷元素的含量.采用SPSS 10.0软件包对数据进行统计学分析.结果:第4天时,p3-含量显著降低(P<0.05),此时,MTA组ALPmRNA的增幅大,峰值为对照组的40倍;第14~18天,Ca2+、p3-含量再次显著降低时(P<0.05),MTA组先是BGPmRNA的增幅大,约为对照组的7.71倍;后是CbfαlmRNA增幅大,约为对照组的7.38倍.各时间点Col-Ⅰ mRNA的增幅低.结论:p3-含量的变化可能是MTA促进胎鼠颅骨细胞体外矿化的启动因素,当Ca2+积累到一定程度后,将大幅度加速矿化进程;同时调节ALPmRNA、BGPmRNA、Col-Ⅰ mRNA与CbfαlmRNA的表达,这可能是MTA利于骨质形成的关键.
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比浊法控制菌悬液浓度在分值计算法鉴定培养基中的应用
在2001年度浙江省消毒、灭菌检测实验室室间质量控制的培养基质量鉴定项目中,为了控制检测过程中的不利因素,提高检测质量,保证结果准确有效,要求10-6稀释的菌悬液0.1ml在对照培养基1号上涂布培养,菌落形成单位控制在50~100cfu/皿范围内[1].在实验过程中较难掌握,在控制培养环境等因素的条件下,由于各菌种生物学特性不同,往往超出此范围.关键在于制备菌悬液时加入菌量较难控制.本次实验采用比浊法控制菌量,现将结果报告如下.
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不同胎牛血清培养基对羊水细胞培养结果的影响
自70年代羊水细胞培养成功以来,染色体核型分析技术已经成为产前诊断胎儿染色体病的金标准.羊水细胞能否成功培养与孕周有关,通常培养的佳时间为孕19~21周.有研究认为孕24周以上的羊水细胞虽然比较容易衰老,但仍可能具有一定活力,关键是培养基的培养环境是否适合羊水细胞的生长.细胞培养失败多与培养基的品种和小牛血清的选择不当有关,优质的培养基培养可影响羊水染色体成功制备的全过程.为此,我们通过改变羊水培养基中胎牛血清所占比例与羊膜腔穿刺时间观察不同孕周羊水细胞的培养效果.现报告如下.
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转化生长因子-β1对天然支架组织工程瓣膜作用
构建组织工程心脏瓣膜(TEHV)关键在体外重建宏观、微观培养环境[1].我们以去细胞瓣作天然支架,肌成纤维细胞作种子细胞,观察转化生长因子(TGF)-β1对TEHV微环境影响[2,3].
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Nature:揭示干细胞惊人异质性
论文作者George Daley教授说:“这是一项非常基础的研究,但它阐明了多能性状态广泛性。我们捕获了干细胞不同状态的详细分子谱。”研究人员通过采用多种变量如不同的化学物质、培养环境和遗传敲除来扰乱多能干细胞,研究人员探究了它们的发育景观。随后,他们分析了每个细胞的遗传组成,观察了每个细胞多能状态的微小波动。他们发现内部、化学和环境信号影响干细胞方式的许多细微差异,揭示出了复杂的发育调控因子“决策”回路。论文的共同主要作者、Wyss研究所前博士后研究人员Roshan Kumar说:“这些新兴的单细胞方法使得我们能够非常精确地对细胞进行分类,确定控制细胞状态的调控回路。这项研究背后的真正动力是要了解引起单个干细胞之间差异的原因和所导致的后果,以及细胞内一些关键调控因子平衡对于细胞发育结局的影响。”基于这些研究发现,现在研究人员相信有一个“密码”将干细胞调控回路中动态行为方式和细胞终选取的发育途经关联起来。他们希望通过利用这一密码能够精确地调拨到特异的单细胞状态,并利用它们来满足各种目的,例如构建出患者自身身体无法生成的某些细胞类型。
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激光捕获显微切割技术在肿瘤分子病理学中的应用原理及研究进展
组织发生、分化以及病理改变是多基因调控的复杂过程.要在基因水平了解其机制,就必须准确深入地分析特定细胞基因结构和表达的动态变化.为了阐明在肿瘤发生和发展不同阶段如不典型增生、原位癌、浸润癌及转移癌发生时特定细胞内的分子生物学改变,以及前一阶段向后一阶段进展时,其关键的分子生物学改变是什么等重要信息,需要获得单一的同类细胞群.组织是多种细胞群体相互作用的三维空间结构,但以往的各种技术所获得的细胞,其内既有肿瘤细胞,又多少不等地含有一些其他细胞.同时,体外培养的细胞系虽能解决组织异质性问题,但其培养环境与组织内环境有一定差距,因此,无法真实反映在体内复杂环境下生长的肿瘤细胞具有的各种特性.组织细胞异质性已成为肿瘤基因组学研究的一大障碍[1].而激光捕获显微切割技术(Laser capture microdissection,LCM)是一项在显微镜直视下从组织切片中确定、分离、纯化单一类型细胞群或单个细胞的技术,它成功解决了细胞异质性问题[2,3 ],是肿瘤基因组学研究的一项革命性技术.
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传染病专科医院学科建设的问题与建议
强势的学科组合、完善的学科体系、独特的学科方向是医院提高医疗技术水平,优化人才培养环境,增强医院竞争实力,拓展医疗市场份额,实现可持续发展的基础和关键.传染病专科医院学科建设的能力和水平事关政府对传染性突发公共卫生事件的救治能力和水平,目前,其学科建设面临一系列问题,值得我们思考.
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088.外周血单核细胞增殖树突细胞培养环境的优化