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人MII期卵母细胞纺锤体与正常受精卵早期卵裂的关系
目的探讨早期卵裂与胚胎质量及MII期人卵纺锤体的关系. 方法于卵泡浆内单精子注射(ICSI)后25～27 h观察卵裂情况.若此时出现了卵裂就认为该受精卵发生了早期卵裂(EC).比较EC组与无早期卵(NEC)裂组的良好胚胎形成率以及EC与MII期卵母细胞纺锤体的关系. 结果 EC与纺锤体存在与否的rs值为0.422,P=0.000.认为EC与MII期卵母细胞纺锤体存在呈正相关.EC组的良好胚胎形成率(86.4%)高于NEC组(43.8%),差异有显著性(P＝0.001). 结论出现EC的胚胎D3天良好胚胎形成率高.EC与纺锤体存在与否有较为密切的关系.
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经典型蛋白激酶C在人卵母细胞成熟及受精过程表达研究
目的通过检测经典型蛋白激酶C(cPKC)在人各期卵母细胞及受精卵中分布及转位,探讨cPKC在人卵母细胞成熟及受精中的作用机制. 方法采用免疫荧光法检测cPKC在人GV、MII期卵母细胞、受精卵中的分布及转位. 结果在人GV、MII期卵母细胞中,PKCα、βⅠ和γ均有表达.在受精后的卵母细胞中,PKCγ分布没有明显改变,PKCα转移至细胞外周,PKCβⅠ转移至染色质周围,与两个染色质没有重叠. 结论 PKCα、βⅠ和γ在人卵母细胞中存在,并且参与卵子受精后事件.
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玻璃化冷冻人卵母细胞的临床应用:附一例成功分娩
人卵母细胞冷冻保存是女性生育力直接保存的一种方法.但由于卵母细胞自身生物学特性的影响,卵母细胞冷冻的妊娠率始终不高.本院采用玻璃化技术冷冻人卵母细胞2例,1例获得临床妊娠,目前已分娩.
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人成熟卵母细胞玻璃化冷冻复苏后行ICSI-ET的妊娠结局
目的 回顾性分析卵母细胞玻璃化冷冻复苏后行卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(ICSI-ET)的妊娠结局,为卵母细胞玻璃化冷冻的临床应用提供参考. 方法 收集2013年5月至2015年1月于我中心行辅助生殖助孕治疗、女方取卵当日无精子可用的6对夫妇为研究对象,收集6例女性的成熟卵母细胞进行玻璃化冷冻,复苏后行ICSI-ET,观察6例患者的卵母细胞复苏率、受精率、卵裂率、临床妊娠率等. 结果 6例女性患者的6个取卵周期共获得成熟MⅡ卵母细胞94枚,均行玻璃化冷冻.择期复苏64枚,存活62枚,复苏率为96.8％.行ICSI授精后观察到正常受精卵43枚,卵裂40枚,获得可利用胚胎28枚,优质胚胎19枚,可利用胚胎率和优质胚胎率分别为70.0％和47.5％.鲜胚移植获得临床妊娠3例,孕囊5个;冻融胚胎移植1例,孕囊1个,均足月分娩,新生儿状况及Apgar评分良好. 结论 玻璃化冷冻卵母细胞技术可以在有适应证的患者中应用,并可获得较好的临床妊娠结局.但仍需更大样本量的临床研究予以验证.
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纺锤体与人卵母细胞质量的关系
纺锤体是卵母细胞的一个重要组成部分,是由极间微管、染色体牵丝及区间牵丝排列组成的中部宽阔,两极缩小的形状如纺锤的结构.一般在细胞分裂中期,其结构为典型.在细胞分裂过程中,纺锤体对卵母细胞染色体的平衡、运动、分配和极体的排出有非常重要的作用.纺锤体异常,会导致异常的减数分裂,有可能产生异常的胚胎.纺锤体对细胞质和周围环境的改变非常敏感[1],因此,它的形态学变化可能反映了体外培养环境中卵母细胞的质量.本研究从受精、卵裂及正常受精卵培养第3天的良好胚胎形成等3个方面,探讨纺锤体与人卵母细胞质量的关系;同时,通过观测纺锤体与第一极体之间的角度,预测卵母细胞质内单精子注射(ICSI)操作的安全性.
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海藻糖在人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻中初步应用
目的:探讨海藻糖在人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻中的临床应用价值.方法:回顾性分析2014年1月至2015年12月在我院生殖中心行卵母细胞玻璃化冷冻的8例患者,解冻后行卵胞浆内单精子显微注射,记录存活、受精、卵裂及妊娠情况.结果:8例患者共解冻52枚胚胎,存活43枚,存活率82.69％,受精率67.44％,卵裂率89.66％;1例患者取消移植,7个移植周期获得临床妊娠3例,其中胚停1例,活产l例,继续妊娠1例.结论:海藻糖在人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻中的临床应用可获得较好的临床结局.
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人类原始生殖细胞的起源、迁移、增殖及凋亡过程
人类原始生殖细胞(PGC)是人卵母细胞的祖细胞,是人类生存及繁衍后代的重要细胞.PGCs起源于性腺外,经迁移到达生殖嵴与体细胞共同组成生殖腺;之后,PGCs在性腺内经增殖、分化等一系列复杂的变化终形成成熟的卵子.认识PGCs的起源、迁移、增殖、分化等过程对生殖医学具有重要意义.目前对禽类及小鼠PGCs的研究已取得深入进展,由于人PGCs不易获得,且受到伦理、道德及宗教方面的制约,有关人生殖细胞的研究进程较缓慢,对人PGC的起源及迁移过程等都不甚清楚,现就生殖细胞的起源、迁移、增殖及凋亡过程的研究进展作一概述.
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人类卵母细胞冻存的临床应用
人类成熟卵母细胞是体内大的细胞,直径约120μm左右.与精子和植入前4～8细胞阶段胚胎相比,冻融过程对卵母细胞更容易造成损伤.自1948年利用甘油作冷冻保护剂冻存牛精子获得成功后,直至1972年冻融小鼠胚胎才获子代出生.1983年,人类第一例冻融胚胎"试管婴儿"诞生.迄今在辅助生殖技术中冻存人类精子及植入前胚胎已广为应用,而冻存人类卵母细胞的研究及临床应用则缓慢得多.虽然,1986年Chen[1]首先采用与冻融人类胚胎基本相同的慢冻方法获得世界首例由冻卵而出生的婴儿,但由于冻融卵母细胞受精率低下,直至1995年卵母细胞胞浆内单精子注射技术(ICSI)应用于冻融后卵母细胞,随后才陆续有较多经冻卵出生婴儿的报道.但经慢冻快融卵母细胞出生婴儿迄今也不足100例.1999年,澳大利亚学者Kuleshova等[2]首先报道应用乙二醇作细胞内冷冻保护剂,开放麦管作支架快速冻融人卵母细胞获得1例赠卵"试管婴儿"活婴分娩,提示了玻璃化快速冷冻技术在冻存人卵母细胞可能的应用前景及其优越性,至今,相关全世界报道已有近20例左右.祖国大陆于去年开始有经玻璃化方法冻卵后出生婴儿的报道.本文将就卵母细胞冻融的损伤及应用前景作一简要回顾.
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海藻糖应用于人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究
目的 探讨海藻糖的应用能否改善人成熟卵母细胞玻璃化冷冻效果、提高冻融后卵母细胞的发育潜能.方法 从该中心IVF/ICSI治疗的病人中经知情同意获取卵母细胞248枚,随机分成四组:显微注射海藻糖组(A组)、细胞外海藻糖组(B组)、常规蔗糖组(C组)、新鲜对照组(D组).卵母细胞复苏后,所有存活卵母细胞均行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI),观察各组卵母细胞冻融后存活率、受精率、卵裂率、囊胚率、优质胚胎率、优质囊胚率.结果 A、B、C三组存活率、优质胚胎率、囊胚率差异无统计学意义(P>0.05),A组受精率、卵裂率、优质囊胚率高于B组和C组,差异均有统计学意义(P<0.05),其中与B组受精率、卵裂率差异极显著(P<0.01),与C组卵裂率差异极显著(P<0.01);B组与C组存活率、受精率、卵裂率、优质胚胎率、囊胚率、优质囊胚率差异均无统计学意义(P>0.05);A组与D组优质胚胎率、优质囊胚率差异有统计学意义(P<0.05);B组及C组与D组受精率、卵裂率、优质胚胎率、优质囊胚率差异极显著(P<0.01).结论 海藻糖作为细胞内冷冻保护剂似乎能够改善人卵母细胞玻璃化冷冻效果及冻融后卵母细胞发育潜能.
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玻璃化冷冻人卵母细胞的临床应用及成功分娩
1 病历资料患者,女,38岁,因"婚后同居,性生活正常,未避孕未孕1年"于2004年1月8日来诊.患者平素月经规律,周期为28～30 d,基础内分泌正常,双侧卵巢窦卵泡数20个左右.于本院行输卵管造影检查,双侧输卵管阻塞,行2次输卵管扩通术(X光下COOK导丝插管),左侧插管顺利,注药无阻力,右侧插管顺利,但注药阻力大,无药液注入.之后给予6个月中药治疗.
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第一极体不能精确定位人卵母细胞纺锤体
目的观测人卵母细胞纺锤体的确切位置,从而指导今后的生殖医学临床工作.方法应用纺锤体成像系统观测体外成熟及体内成熟组人卵母细胞纺锤体,测量卵子中心、纺锤体与第一极体之间形成的角度.比较两组结果的差异.结果体外成熟组纺锤体与第一极体形成角度和体内成熟组存在显著差异(P=0.006).结论人卵母细胞的位置并不能准确定位卵母细胞纺锤体的位置.体外成熟组纺锤体与第一极体形成的角度要明显小于体内成熟组.应用纺锤体成像系统可以安全、有效地观察人卵母细胞纺锤体.
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PVP对人卵母细胞玻璃化冻融效果的影响
目的 探讨在玻璃化冷冻液中添加大分子物质PVP(polyvinyl pyrrolidone)对人卵母细胞冻融效果的影响.方法 玻璃化液中添加6% PVP者为A组,不添加者B组,未冻融者为对照组(C组),冻融后存活及对照组卵母细胞固定后进行免疫荧光染色,然后用Nikon CISI激光扫描共聚焦显微镜观察纺锤体、染色体形态.结果 A组的存活率、染色体和纺锤体形态正常率分别为83.3%(20/24)、10.0%(2/20)和10.0%(2/20),B组则分别为95.8%(23/24)、13.0%(3/23)和13.0%(3/23),与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 在玻璃化液中添加大分子物质PVP没有提高人卵母细胞的冻融效果.
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卵巢组织移植技术的研究进展
各种针对肿瘤的化疗和放疗严重危害了女性的生育能力,导致卵巢功能的提早衰竭.在乳腺癌化疗的女性中,约68%的患者在治疗后会面临卵巢功能提早衰竭的危险.在放疗的过程中,人卵母细胞对放疗的半数致死量(LD50)<2 Gy,腹内肿瘤的盆腔放疗剂量范围是25～50 Gy,此剂量可立即引发卵巢衰竭而导致绝育[1-2].
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34个周期玻璃化冷冻卵母细胞临床应用分析
目的:探讨玻璃化冷冻卵母细胞的临床应用可行性.方法:回顾性分析玻璃化冷冻卵母细胞34个周期,对其复苏率、受精率、卵裂率、临床妊娠率等进行统计分析,并筛选出因男方因素不孕的21个周期(研究组)和同期因男方因素进行新鲜卵细胞浆内单精子注射-胚胎移植(ICSI-ET)的78个周期(对照组)进行比较.结果:298枚玻璃化冻存的卵母细胞复苏后存活278枚,对其中成熟的234枚卵母细胞进行ICSI受精后,受精182枚,形成优质胚胎82枚,移植70枚胚胎,11例患者获得成功分娩(10例单胎,1例双胎).研究组受精率、优质胚胎率比对照组低,差异有统计学意义(P＜0.05),卵裂率、临床妊娠率、种植率、活产率和流产率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:玻璃化冻融卵母细胞的技术可以在有适应证的患者中应用,可获得较好的临床结局.
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冻融液的温度对人卵母细胞玻璃化冻融效果的影响
目的:探讨冻融液的操作温度对成熟阶段(MII)人卵母细胞的玻璃化冻融效果的影响.方法:收集体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者中受精失败的成熟卵母细胞,根据放置在冻融液操作温度的不同分为A组、B组、C组.解冻后存活卵母细胞及对照组(未冷冻组,D组)卵母细胞固定后进行免疫荧光染色.然后用Nikon CISI激光扫描共聚焦显微镜观察纺锤体、染色体形态.结果:A组与对照组卵的纺锤体和染色体形态正常率分别为13.0%和13.0%、18.2%和18.2%,相互比较差异均无统计学意义(P＞0.05);A组与对照组卵的纺锤体缺失率(Ⅳ型)为65.2%与39.4%,相互比较差异无统计学意叉(P＞0.05);B组卵的染色体形态正常率及C组卵的纺锤体和染色体形态正常率均为0,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);B、C组卵的纺锤体缺失率(Ⅳ型)为78.2%、90.0%,与对照组比较差异有高度统计学意义(P＜0.01).结论:降温前放置在冷冻液的合适操作温度可以减少冻融对卵子纺锤体和染色体的损伤程度.
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培养环境的温度变化与人MⅡ期卵母细胞纺锤体形态学变化的关系
目的:观察环境温度的改变对MⅡ期人卵纺锤体结构的影响.方法:40例非男性因素的不孕妇女,将常规体外授精后未受精的MⅡ期卵子置于室温(23～25℃)直至纺锤体消失.于纺锤体消失后,将卵子分成3个实验组:1组纺锤体消失后立即复温(n=8);2组纺锤体消失后室温下静置5 min再复温(n=6);3组纺锤体消失后室温下静置10 min再复温(n=6).卵子复温后5 min,10 min,2 h分别观察纺锤体的复现情况.结果:20个未受精的MⅡ期卵子置于室温下5 min内纺锤体均消失.1组中的8个卵子,2组中的6个卵子复温后再次观测到了MⅡ期纺锤体.3组中的6个卵子只有3个卵子再次出现了MⅡ期纺锤体.对照组的18个卵子放置于37℃恒温板上观察30 min,纺锤体均未见消失.结论:MⅡ期卵子纺锤体对环境温度的改变非常敏感.温度降低将导致纺锤体消失,随着时间的延长,纺锤体复现几率明显减少.
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卯母细胞滑面内质网聚集的研究进展
在人类辅助生殖中,经促排卵体外获得的卵母细胞中,有滑面内质网聚集(smooth endoplasmic reticulum aggregate,SERa)形成者占有一定比例.既往研究显示,SERa对胚胎质量及妊娠结局会造成不良影响.但近年来研究显示:SERa卵母细胞可诞生完全健康的新生儿.卵母细胞胞质内SERa的形成可能与遗传因素、卵巢过度刺激、超促排卵方案及扳机日高雌二醇(E2)等多种因素相关.大多数学者认为卵母细胞SERa的形成会导致受精率、卵裂率和囊胚形成率降低及胚胎质量的下降,使得妊娠率显著降低;然而,也有多项报道已证实SERa的卵母细胞的胚胎质量与正常卵母细胞并无差异.因此对于那些临床助孕治疗中获得SERa胚胎或者胚胎数目不足的患者,可考虑移植SERa胚胎.未来,应多关注SERa对体外受精(IVF)结局的影响及着重阐明SERa形成机制,从而从根本上防止异常卵母细胞的出现.
关键词： 滑面内质网聚集(SERa) 人卵母细胞 胚胎发育 妊娠结局 研究进展 -
人卵母细胞辅助激活研究进展
卵胞质内精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)是目前治疗男性不育有效的方法,但在ICSI周期中仍然有1％～3％的受精失败发生.近年来逐渐发展起来的卵母细胞辅助激活(assisted oocyte activation,AOA)技术在改善ICSI后受精失败患者的妊娠结局方面取得了较为明显的效果,有望成为治疗男性不育的重要辅助手段.本文综述了卵母细胞激活机制领域的研究成果,揭示了精子中的PLCξ蛋白引起卵母细胞内Ca2+震荡进而触发激活的机制,介绍了目前对ICSI受精失败患者精子激活能力的检测与诊断方法,以及不同卵母细胞辅助激活技术如电激活,Ca2+载体和SrCl2等激活技术的研究现状,并总结了这些技术在安全性方面所获得的证据,在此基础上对AOA技术今后的发展方向和前景作了探讨.
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卵母细胞滑面内质网聚集体与辅助生殖妊娠结局关系的研究进展
在人类辅助生殖中,经促排卵体外获得的卵母细胞中,有滑面内质网聚集体(smooth endoplasmic reticulum clusters,sERC)形成者占有一定比例.这些卵母细胞终发展为非整倍体的比例较高,影响随后的胚胎发育和妊娠结局.近年来研究显示:卵母细胞胞质内sERC的形成与多种因素相关,主要是Ca2+浓度变化的影响.大多数学者认为卵母细胞sERC的形成会导致受精率、卵裂率和囊胚形成率降低及胚胎质量的下降,使得妊娠率显著降低;然而,也有多项报道已证实含sERC的卵母细胞可以正常受精并获得后代.因此对于那些临床助孕治疗中获得sERC+胚胎或者胚胎数目不足的患者,移植sERC+胚胎或sERC+/sERC胚胎不失为胚胎移植的一个选择.
关键词： 滑面内质网聚集体(SERC) 人卵母细胞 Ca2+浓度 胚胎发育 妊娠结局 -
一种稳定的人卵母细胞染色体荧光原位杂交技术
目的:建立一种稳定、简便的人卵母细胞染色体荧光原位杂交技术,为揭示母方减数分裂错误及其发生原因、探讨非整倍性发生机制、评价外环境因素对人卵母细胞的遗传学效应提供有力工具.方法:经签订知情同意书后,取体外受精术后废弃的人卵母细胞,经低渗、渐进固定处理、制备人卵母细胞染色体核型.应用人16号染色体着丝粒荧光探针,经变性处理后与人卵母细胞核型进行荧光原位杂交,再经洗脱和染色等步骤,在荧光显微镜下分析.结果:经过上百批次重复实验,人卵母细胞染色体形态与分散良好,荧光信号明亮清晰、背景干净.结论:成功建立人卵母细胞染色体荧光原位杂交技术.
