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化疗药物致卵巢损伤的表型分析及可能机制
目的 探索化疗药物对小鼠卵巢的影响及可能的机制. 方法 将60只ICR小鼠平均分为给药组和对照组.给药组小鼠一次性腹腔注射环磷酰胺120 mg/kg+白消安20 mg/kg,对照组小鼠注射同等体积的DMSO;通过观察小鼠动情周期的变化、性激素水平、卵巢组织形态及卵泡计数分析化疗药物对卵巢的影响;通过检测抗苗勒管激素(AMH)、Ki67表达水平等分析卵巢储备能力和细胞增殖能力的变化. 结果 给药组雌激素水平(203.00±24.91 pmol/L)比对照组(379.00±36.13 pmol/L)显著降低(P＜0.01);给药组脏器系数(0.0318)比对照组(0.0487)显著下降(P＜0.01);给药组可见卵巢萎缩、各级卵泡数目明显减少、卵泡闭锁增多;给药组颗粒细胞分泌的AMH明显减少、增殖细胞数目显著降低(P＜0.01). 结论 化疗药物能导致小鼠卵巢损伤,卵巢储备能力和卵巢细胞的增殖能力明显下降.
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甲氨喋呤单次肌注治疗输卵管妊娠的重复用药问题和对策
甲氨喋呤(MTX)保守治疗异位妊娠因其具有对卵巢损伤小、给药方便、费用低等优点,在有生育要求妇女的输卵管妊娠保守治疗中占有重要地位.近年输卵管妊娠的早期诊断率大大提高,为保守治疗提供了更广阔的空间.MTX单次肌肉注射方案疗效确切,副作用小,已经成为国内外输卵管妊娠保守治疗的标准方案.单次肌注MTX后第4～7 天复查血绒毛膜促性腺激素(hCG),如第4～7 天内下降<15%或继续上升,则在第7 天予以相同剂量MTX重复用药以避免保守治疗失败[1].多年的临床实践发现,不少患者因hCG下降不理想而须再次用药.本文就重复用药问题的临床现状和对策作一综述.
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促性腺激素释放激素激动剂和避孕药物预防年轻女性卵巢生殖细胞肿瘤化疗患者卵巢损伤的疗效观察
目的：探讨促性腺激素释放激素激动剂（GnRHa）及避孕药物预防女性卵巢生殖细胞肿瘤化疗患者卵巢损伤的临床疗效。方法收集女性生殖细胞肿瘤60例患者资料，将患者随机分为3组，各20例。对照组患者给予常规化疗， GnRHa 组患者在常规化疗的基础上肌内注射醋酸曲普瑞林，避孕药物组在化疗的基础上口服炔雌醇环丙孕酮片，在化疗过程中及停药后，定期监测患者的月经情况、排卵情况。结果对照组患者的排卵率、月经恢复率均明显低于GnRHa组及避孕药物组，且对照组患者的卵巢功能早衰发生率明显高于GnRHa组及避孕药物组；GnRHa组患者的排卵率、月经恢复率均明显优于对照组和避孕药物组，且GnRHa组患者的卵巢功能早衰发生率明显低于对照组和避孕药物组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论 GnRHa及避孕药物均可明显降低年轻女性卵巢生殖细胞肿瘤化疗所致卵巢功能损伤，保障患者预后及生活质量，但GnRHa作用效果更优。
关键词： 化疗 卵巢损伤 促性腺激素释放激素激动剂 避孕药物 保护效果 -
黄芩素对雷公藤甲素诱导的小鼠卵母细胞损伤的保护作用
目的 探讨黄芩素对雷公藤甲素诱导小鼠卵母细胞损伤的保护作用.方法 健康雌性BALB/C小鼠随机分为对照组,模型组,黄芩素低、高剂量组.对照组ig含5％二甲基亚砜的生理盐水,模型组ig 25 μg/kg雷公藤甲素,黄芩素低、高剂量组分别ig 25 μg/kg雷公藤甲素+100 mg/kg黄芩素、25 μg/kg雷公藤甲素+500 mg/kg黄芩素,共给药50 d.实验第41天起,连续阴道涂片,至第47天,进行超排卵实验.第50天处死各组小鼠,收集计数卵子.留取卵巢进行苏木精-伊红(HE)染色检测卵巢病理,计数各级卵泡.测定各组小鼠卵巢组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的量,评价氧化应激水平.Western blotting法检测小鼠卵母细胞中氧化还原相关蛋白抗硫氧还蛋白还原酶(TrxR)、硫氧还蛋白(Trx)、谷胱甘肽还原酶(GR)、GSH-Px的表达量.结果 雷公藤甲素显著引起小鼠卵巢损伤,表现为卵泡数量显著减少,卵巢间质区域结缔组织疏松;并使SOD活性降低,GSH-Px水平降低,MDA水平增加;黄芩素组小鼠卵巢发育较模型组有明显改善,卵泡细胞数量增多,间质区域结缔组织饱满.卵巢组织中SOD活性升高,GSH-Px水平升高,MDA水平降低.Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组小鼠卵母细胞中的TrxR表达量明显下降;与模型组比较,黄芩素组小鼠卵母细胞中TrxR的表达量显著上升.结论 黄芩素可通过上调TrxR表达量提高小鼠卵巢组织的抗氧化能力,对雷公藤甲素诱导的卵巢损伤起到保护作用.
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环磷酰胺对育龄妇女卵巢损伤的临床研究
目的 观察育龄妇女中实行环磷酰胺治疗对卵巢损伤的临床疗效.方法 选取医院风湿免疫科诊治的40例风湿病女性,依据治疗方式不同将其中30例分为B组与C组,C组实行环磷酰胺治疗,B组实行激素治疗,将同期的10例健康者作为A组,观察3组卵巢大小、雌激素等指标变化情况.结果 环磷酰胺用药C组雌二醇低于A组、B组,环磷酰胺用药C组促卵泡激素高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 风湿病女性患者实行环磷酰胺疗法可能损害育龄妇女卵巢功能,雌激素与月经失衡是主要表现,此外单独使用激素也会影响女性月经,但需进一步验证环磷酰胺与激素联用是否会增加月经紊乱情况.
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毛蕊花糖苷对顺铂诱导小鼠卵巢损害的保护作用
目的 研究毛蕊花糖苷对顺铂所致卵巢损害的保护作用.方法 48只昆明雌性小鼠随机分成4组:对照组、顺铂组、顺铂+毛蕊花糖苷低浓度干预组及顺铂+毛蕊花糖苷高浓度干预组.顺铂组、顺铂+毛蕊花糖苷干预组,分别给予腹腔注射顺铂(2.0 mg/kg·d),同时给予等体积生理盐水及不同浓度毛蕊花糖苷(30、60 mg/kg·d)灌胃处理.干预一周后,停止腹腔注射顺铂,毛蕊花糖苷持续干预一周.对照组小鼠给予同等剂量的生理盐水腹腔注射及灌胃处理.分别通过ELISA方法检测各组小鼠血中雌激素(estradiol,E2)及促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)水平、HE染色观察卵巢形态结构、TUNEL染色检测卵巢细胞凋亡情况、免疫组化法及Western blot方法检测卵巢组织中凋亡相关蛋白(cleaved-caspase 3、cleaved-PARP)的表达水平.结果 顺铂组小鼠可见血FSH水平升高,卵巢可见发育中窦状卵泡内的颗粒细胞层明显减少,卵母细胞核碎裂及闭锁卵泡增加;凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3、cleaved-PARP的表达水平升高,而毛蕊花糖苷药物干预后在一定程度上能逆转卵巢功能及结构损害,并使卵巢凋亡相关蛋白下调来抑制卵巢组织的凋亡.结论 毛蕊花糖苷具有对抗顺铂所致卵巢组织凋亡,保护化疗药物引起的卵巢功能损伤的作用.
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骨髓间充质干细胞移植治疗顺铂致卵巢的化疗性损伤
背景：化疗药物可使处于生育年龄女性患者卵巢功能有不同程度的损伤，重则致卵巢早衰，已成为卵巢早衰发病的一个重要原因。因此，改善和恢复患者卵巢功能，已成为一个重要的课题。目的：探索骨髓间充质干细胞治疗化疗所致卵巢损伤的可行性及疗效。方法：建立化疗性卵巢衰竭模型，建模后注射PKH26标记后的骨髓间充质干细胞，于移植细胞后第15，30，45，60天，各取5只大鼠经尾静脉取血测卵泡刺激素、雌二醇水平并处死大鼠，留取右侧卵巢行常规病理切片，光学显微镜下记录卵巢卵泡数量变化。细胞移植后30 d，取2只大鼠与雄鼠合笼，观察生殖能力的差异。结果与结论：18%(4/22只)大鼠移植干细胞后动情周期能逐渐恢复，卵泡刺激素水平有所下降而雌二醇水平上升，卵巢病理切片提示卵泡数量减少，大鼠生育能力未受损害。结果表明骨髓间充质干细胞可以部分改善化疗后大鼠卵巢功能。
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与药物保守治疗输卵管妊娠相关的循证医学证据和评价
药物保守治疗输卵管妊娠因其具有对卵巢损伤小、给药方便、费用低、不手术等优点,保守治疗治愈率达85%以上,因而在有再生育要求妇女的输卵管妊娠保守治疗中占有重要地位.近年输卵管妊娠的早期诊断率大大提高,为药物保守治疗提供了更广阔的空间,但临床仍常有适应证选择不当致使保守治疗失败的情况.本文立足循证医学(evidence based medicine,EBM),从合理选择保守治疗适应证、合理用药方案和用药后监测三方面收集和评价了有关循证医学证据.
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苦瓜总皂苷对顺铂所致卵巢损伤大鼠卵巢组织中PPARγ表达的影响
目的 探讨分析苦瓜总皂苷对顺铂所致卵巢损伤大鼠是否有治疗作用,并分析作用机理.方法?60只雌性SD大鼠适应性喂养2周后随机分为正常组、模型组、苦瓜总皂苷低、中、高剂量组以及阳性药物逍遥丸组,每组10只,造模成功后给予对应药物治疗6周后处死大鼠,收集血清和卵巢组织,测定SOD、CAT、MDA、凋亡蛋白cytc、卵泡刺激素(FSH)及雌二醇(E2)含量;同时免疫组化、Western和半定量PCR检测卵巢组织中PPARγ表达.结果 与正常组相比,模型组血清中cytc和FSH含量明显增高(P<0.05),E2含量明显降低(P<0.05),苦瓜总皂苷可明显降低cytc和FSH(P<0.05),升高E2(P<0.05),但逍遥丸对此3个指标却没有作用;与正常组相比,模型组血清和卵巢组织中SOD以及CAT含量明显降低(P<0.05),MDA含量明显升高(P<0.05),苦瓜总皂苷和逍遥丸均可以升高SOD和CAT(P<0.05),并降低MDA(P<0.05),此外随着苦瓜总皂苷给药剂量的增加疗效更为显著;与正常组相比,模型组PPARγ 表达明显降低(P<0.05),苦瓜总皂苷能明显增加PPARγ 表达量(P<0.05),且效果明显好于逍遥丸组.结论 苦瓜总皂苷能显著改善顺铂所致卵巢组织氧化损伤,且呈剂量依赖性,这可能与其可激活PPARγ 有关.
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苦瓜总皂苷对环磷酰胺所致卵巢损伤大鼠卵巢组织Nrf2表达的影响
目的:观察苦瓜总皂苷对环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)所致大鼠卵巢损伤的作用.方法:60只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、苦瓜总皂苷低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)和高(40mg/kg)剂量组以及阳性药物逍遥丸(20 mg/kg)干预组,每组10只.大鼠腹腔注射CTX(162 mg/kg)造模成功后,各组给予相应剂量药物灌胃,连续给药6周.处死大鼠,观察卵巢组织病理学变化,测定血清和卵巢组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western blot、半定量PCR测定卵巢细胞核转录因子Nrf2(nuclear factor erythroid-related factor 2,Nrf2)蛋白和mRNA的表达.结果:病理学HE染色可见正常组卵泡丰富,皮髓质结构清晰;模型组有明显卵泡闭锁,同时皮质结构破坏,苦瓜总皂苷3剂量组和逍遥丸组相较于模型组病理改变有明显的改善.与正常组相比,模型组血清和卵巢组织MDA含量明显增加(P＜0.05),CAT和SOD活性明显降低(P＜0.05);苦瓜总皂苷各剂量血清和卵巢组织MDA含量明显下降(P＜0.05),CAT和SOD活性明显升高(P＜0.05);且高剂量组效果优于逍遥丸组(P＜0.05).与正常对照组相比,模型组大鼠卵巢细胞Nrf2蛋白及mRNA表达明显增加,而苦瓜总皂苷3剂量组和逍遥丸组Nrf2表达显著增强(P＜0.05);苦瓜总皂苷高剂量优于逍遥丸组(P＜0.05).结论:苦瓜总皂苷对环磷酰胺诱导的卵巢组织损伤具有一定的保护作用,与其可增强Nrf2表达及提高抗氧化活性.
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骨髓间充质干细胞对环磷酰胺诱导卵巢损伤的保护作用
目的:研究骨髓间充质干细胞(MBSc)对注射环磷酰胺(CTX)引起的大鼠卵巢损伤的保护作用.方法:将30只SD大鼠按随机数字表随机分为三组,即对照组,模型组及细胞移植组,分别经尾静脉接受生理盐水,CTX和CTX+MBSc移植.监测大鼠体重,动情周期的变化,用药结束后一周处死大鼠,测定血清雌二醇(E2),卵泡刺激素(FSH),黄体生成素(LH)的变化,观察各组大鼠卵巢形态学及卵泡数量变化,并利用原位细胞凋亡TUNEL法检测3组大鼠卵巢中细胞凋亡指数(AI).结果:与对照组比较,模型组大鼠体重下降,动情周期延长,卵泡数量下降,E2下降,FSH及LH升高,组织细胞AI增加.与模型组比较,细胞移植组大鼠体重增加,动情周期缩短,卵泡数量增加,尤其是中大卵泡数增加,E2上升,LH下降,FSH接近正常.结论:MBSc移植能通过减少卵巢组织AI而在一定程度上减少环磷酰胺引起的卵巢功能损伤.
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环磷酰胺对风湿病育龄妇女卵巢损伤的临床研究
目的:探讨分析患有风湿病的育龄妇女进行环磷酰胺治疗,可能对其卵巢造成的损伤.方法:本次研究以笔者所在医院80例风湿病育龄妇女为研究对象,并根据采用的治疗方式,将其划分为A组、B组、C组,A组20例患者不进行任何药物治疗,B组30例患者进行激素治疗,C组30例患者进行环磷酰胺治疗,对三组雌激素指标及卵巢体积等比较观察.结果:观察结果显示,C组患者的雌二醇水平远远低于A组和B组,且C组促卵泡激素水平远高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:研究结果表明,环磷酰胺疗法治疗患有风湿病的育龄患者时,对其卵巢功能有一定的损伤,主要体现在月经紊乱、卵巢早衰的方面,因此在使用环磷酰胺治疗育龄妇女风湿病时,应谨慎用量.
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GnRHa对化疗引起卵巢功能损害的保护作用的Meta分析
目的:系统评价化疗联合促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)对防止绝经前化疗妇女卵巢损伤的疗效和安全性.方法:通过计算机检索PubMed、Cochrane Library、EMbase、CBMdisc数据库,收集使用GnRHa对绝经前化疗妇女的卵巢功能保护的临床随机对照试验(RCT).采用RevMan5.1软件分析卵巢功能早衰(POF)的发生率、月经恢复率、妊娠率、排卵率以及不良事件发生率等指标.结果:共纳入8篇文献,共670例患恶性疾病需化疗的绝经前妇女.Meta分析结果显示:(1)化疗联合GnRHa明显降低了POF发生率[RR=0.31,95％ CI(0.15 ～0.64),P=0.002],提高了停止化疗后的月经恢复率和排卵率[月经:RR=1.37,95％ CI(1.06 ～ 1.77),P=0.01;排卵:RR=2.50,95％ CI (1.45～4.31),P=0.001].(2)GnRHa联合化疗与单独化疗患者的妊娠率及不良反应发生率均无显著差异[妊娠率:RR=0.64,95％ CI(0.19～2.18),P=0.48;不良反应发生率:RR=1.31,95％CI(0.97 ～ 1.76),P=0.07].结论:化疗联合GnRHa治疗,可防止化疗对卵巢功能的损害,降低POF的发生率,提高月经恢复率和排卵率,无明显的不良反应.
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GnRHa和避孕药保护化疗所致卵巢损伤的比较研究
目的:探讨促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)和口服避孕药(OC,达英-35)对注射环磷酰胺(CTX)大鼠卵巢功能的保护作用.方法:实验分为6组:空白对照组、CTX组、OC组、GnRHa组、OC保护组、GnRHa保护组,每组15只,分别接受生理盐水、CTX、达英-35,GnRHa、达英-35+CTX、GnRHa+CTX注射或灌胃.阴道涂片观察大鼠动情周期,以放射免疫法检测血清雌二醇(E2)和卵泡刺激素(FSH)浓度,每组在停药当天、15天及30天分别处死5只大鼠,观察卵巢重量、卵巢结构及各级卵泡数目.结果:停药后30天,OC保护组和GnRHa保护组的E2浓度分别为51.33±2.OOpg/m1、44.38±15.98pg/ml,FSH浓度分别为3.69±0.28mIU/ml、3.35±0.22mIU/ml,两组比较及与空白对照组(51.76±2.57pg/ml、3.44±0.20mIU/ml)相比,差异均无统计学意义;与CTX组(21.78±2.11 pg/m1、6.24±0.22mIU/ml)比较,差异有统计学意义.OC保护组和GnRHa保护组的卵巢重量、卵泡数量与空白对照组相比,差异无统计学意义,明显高于CTX组,两组间比较差异亦无统计学意义.结论:GnRHa和口服避孕药均能减轻化疗药物对卵巢功能的损伤,从而保护卵巢储备功能.
关键词： 促性腺激素释放激素激动剂 口服避孕药 化疗 卵巢损伤 -
骨髓间充质干细胞移植对环磷酰胺诱导卵巢损伤大鼠Bax及Bcl-2蛋白表达的影响
目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对环磷酰胺(CTX)所致卵巢损伤的保护作用.方法 30只Sprague Dawley大鼠随机分为空白对照组、模型组及细胞移植组,每组10只,空白对照组大鼠腹腔注射生理盐水,模型组及细胞移植组大鼠腹腔注射CTX制备卵巢早衰模型,细胞移植组于第1天注射CTX后24 h经尾静脉移植BMSCs.停药1周后处死所有大鼠,剖腹取卵巢测质量,观察卵泡数量变化,用免疫组织化学法及Western blot法测定卵巢组织中Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 模型组、细胞移植组大鼠总卵泡数、中大卵泡数及卵巢湿质量低于空白对照组(P＜0.05),但细胞移植组大鼠总卵泡数、中大卵泡数及卵巢湿质量高于模型组(P＜0.05).空白对照组Bax主要表达于黄体细胞,卵泡颗粒细胞仅见散在Bax表达;模型组Bax主要表达于颗粒细胞的细胞质,尤其在闭锁卵泡、生长卵泡及窦状卵泡中表达明显;细胞移植组卵泡颗粒细胞中Bax表达范围明显小于模型组.空白对照组Bcl-2在各级卵泡颗粒细胞及黄体细胞中表达量均多,模型组Bcl-2在卵泡颗粒细胞仅散在表达,细胞移植组Bcl-2表达范围明显大于模型组.与空白对照组比较,模型组、细胞移植组大鼠卵巢组织中Bax蛋白表达量明显升高(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达量明显下降(P＜0.05);但与模型组比较,细胞移植组大鼠卵巢组织中Bax表达量明显下降(P＜0.05),Bcl-2表达量明显升高(P＜0.05).结论 BMSCs移植能通过调整卵巢组织中Bax、Bcl-2表达水平减少CTX对卵巢功能的损伤.
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甲氨蝶呤与中药灌肠联合治疗异位妊娠的临床疗效观察
异位妊娠（ectopic pregnancy ，EP）又称为宫外孕，是指受精卵着床在子宫腔以外的部位，如输卵管、宫颈、腹腔等，其中，输卵管妊娠为常见［1］，发生率占E P的90％以上，是育龄妇女常见的急腹症［2］。E P发生后，妊娠部位容易破裂，造成腹痛、出血，严重者可危及生命。近年来，甲氨蝶呤（M TX）联合口服中药的中西医结合的治疗方式也越来越多的应用于 EP ，并且取得了不错的疗效，有关研究［3‐4］表明治愈率可达到87．5％～98．0％。保守治疗因对卵巢损伤小、给药方便、费用低等优点越来越被患者所接受［5］。本研究探讨中药灌肠联合肌肉注射 M T X 治疗 EP 的疗效，以探索更安全、简便、经济的治疗途径，现报告如下。
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白藜芦醇拮抗雷公藤甲素卵巢毒性实验研究
目的:探讨白藜芦醇拮抗雷公藤甲素诱导卵巢损伤的作用.方法:40只雌性NIH小鼠随机分为4组:对照组(Ctrl组:含5％二甲基亚砜的生理盐水),模型组(TL组:雷公藤甲素25 μg/kg),低剂量治疗组(TL+ResL组:25 μg/kg雷公藤甲素+5 mg/kg白藜芦醇)和高剂量治疗组(TL+ResH组:25 μg/kg雷公藤甲素+10 mg/kg白藜芦醇).各组连续灌胃50天.第41天起,行连续阴道涂片.第47天,行超排卵实验.于第50天处死各组小鼠,收集计数输卵管中卵子,留取卵巢行常规病理染色等.阴道涂片行巴氏染色检测小鼠性动周期,HE染色检测小鼠卵巢病理,计数各级卵泡.结果:雷公藤甲素刺激后,TL组小鼠出现明显的卵巢损伤,表现为性动周期延长,超排卵子数量减少,与Ctrl组比较,差异有显著性意义(P＜ 0.05);TL+ResL组和TL+ResH组较TL组小鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡数量增多,差异均有显著性意义(P＜0.05),TL+ResL组和TL+ResH组比较无差异.结论:白藜芦醇可部分拮抗雷公藤甲素诱导的卵巢损伤,但与白藜芦醇治疗剂量无明显关系.
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低强度脉冲超声对环磷酰胺诱导的大鼠卵巢损伤有修复作用
目的 探讨低强度脉冲超声对腹腔注射环磷酰胺引起的SD大鼠卵巢损伤的修复作用.方法63只清洁级雌性SD大鼠随机取13只为正常组,其余50只连续5 d腹腔注射环磷酰胺30 mg/kg,建立卵巢早衰动物模型.将造模成功的43只大鼠随机分为实验对照组(21只)、治疗组(22只).正常组、实验对照组不干预;治疗组给予低强度脉冲超声辐照.监测各组大鼠动情周期的变化,辐照结束后7 d处死大鼠,测定血清雌二醇(E2),卵泡刺激素(FSH),抗苗勒管激素(AMH)的变化,观察各组大鼠卵巢形态学及卵泡数量变化.结果 注射环磷酰胺后,与正常组相比,实验对照组动情周期紊乱,各级卵泡数明显减少,血清E2和AMH显著降低,FSH显著升高(P=0.01);超声辐照后,与实验对照组相比,治疗组动情周期恢复正常,卵泡数明显增加,血清E2显著增高(P=0.01),FSH显著降低(P=0.01),AMH变化不明显(P=0.50).结论 低强度脉冲超声对腹腔注射环磷酰胺引起的SD大鼠卵巢的损伤有修复作用.
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慢病毒介导Bcl-2基因保护化疗大鼠卵巢损伤的作用及机制
目的 探讨携带Bcl-2基因的慢病毒局部注射保护环磷酰胺(CTX)损伤大鼠卵巢的作用及机制.方法 将Wistar大鼠分为7组,每组16只,分别为空白对照组;CTX组(仅腹腔注射CTX);Bcl-2组;增强型绿色荧光蛋白(EGFP)组;盐水+CTX组;空载+CTX组;实验组(注射pGC-FU-Bcl-2+CTX);将纯化的慢病毒悬液经开腹注射入双侧卵巢内,部分动物采用CTX经腹腔注射的方式建立卵巢早衰动物模型.采用HE 病理切片计数各级卵泡数量,Tunnel 法检测卵巢组织中颗粒细胞凋亡情况,Western blot检测Bcl-2蛋白定量.结果 卵巢内直接注射慢病毒后,实验组各级卵泡数比空载+CTX组、盐水+CTX组及CTX组均明显增加,抗凋亡蛋白Bcl-2明显增加,卵巢颗粒细胞凋亡率明显下降.结论 携带Bcl-2基因的慢病毒可防护CTX对卵巢组织结构的损伤,其发挥作用的途径之一则是上调Bcl-2蛋白,抑制卵巢颗粒细胞凋亡.
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磷酰胺氮芥对大鼠卵巢功能损伤的体外实验
目的 研究磷酰胺氮芥(glyciphosphoramide,PM)引起体外培养大鼠卵巢结构和内分泌功能损伤的适宜剂量.方法 实验分为4组,每组12个卵巢,来源于出生8周的Wistar大鼠.实验1、2、3组培养基中加入浓度分别为10、20、50 μg/mL的PM,培养48 h后均隔天全量更换不含PM的培养基.正常对照组培养基中不含PM.在PM加入前及加入后2 d(48 h)、6 d时更换的培养基中用放射免疫法测定其雌二醇(E2)浓度.在加入PM 6 d时取出大鼠卵巢,称湿重,HE染色,显微镜下观察各期卵泡形态并计数总卵泡数量.结果 加入PM后2 d及6 d的3个实验组的E2浓度均低于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),且3个实验组间两两比较差异也均有统计学意义.加入PM 6 d,3个实验组分别与正常对照组比较,卵泡总数差异均有统计学意义;3个实验组间两两比较,卵泡总数差异均有统计学意义.结论 PM浓度为10 μg/mL时已能引起体外培养大鼠卵巢结构及功能的损伤.
