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CP节律性化疗对RPMI8226细胞增殖及其Notch1/NF-κB信号通路的影响
目的:研究持续低剂量磷酰胺氮芥(phosphoramide,PM)联合泼尼松龙(predniso1one)(即CP节律性化疗方案)对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖及凋亡的影响,并探讨其对Notch1/NF-κB信号通路的调控作用.方法:实验分DMSO对照组,磷酰胺氮芥(PM)组,泼尼松龙组,磷酰胺氮芥+泼尼松龙组(即CP组),采用不同组的药物处理骨髓瘤细胞RPMI8226,用CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,RT-PCR检测Notch1和NFκB的mRNA表达水平.结果:与DMSO对照组相比,随着时间的延长,PM、泼尼松龙及CP组均使RPMI 8226细胞的增殖抑制率明显提高(r分别为0.994、0.996、0.999,P＜0.001),并且在相同作用时间,不同组的药物对细胞的增殖抑制率也明显不同,PM对细胞的抑制率弱,而CP组对细胞的抑制率强,泼尼松龙组次之(P＜0.01).用药处理48 h后,与DMSO对照组相比,各用药组G1/Go期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,尤其在PM和CP组,G2/M期细胞比例在PM增加,而在泼尼松龙和CP组则减少.用药处理48 h后,与DMSO对照组相比,治疗组PM、泼尼松龙、CP组的RPMI8226细胞凋亡率依次增高(P＜0.01).用药处理48 h后,与DMSO对照组相比,泼尼松龙组、PM组、CP组RPMI8226细胞的Notch1和NF-κB mRNA表达均依次明显下降(P ＜0.001).结论:CP节律性化疗可以显著减少RPMI8226细胞增殖,促进其凋亡,使RPMI 8226细胞主要阻滞于G1/Go期,并能显著降低Notch1和NF-κB的表达水平,显示CP节律性化疗对MM的治疗作用有Notch1/NF-κB信号通路的参与.
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间充质干细胞过表达miR-21对卵巢颗粒细胞凋亡的影响
目的 探讨过表达miR-21的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)对卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法 构建miR-21慢病毒表达载体(LV-miR-21),转染BMMSCs获得稳定表达miR-21的BMMSCs(miR-21-BMMSCs).培养Wistar大鼠卵巢颗粒细胞,实验分为5组:正常组、磷酰胺氮芥(PM)组、miR-21组、BMMSCs组、miR-21-BMMSCs组.正常组为颗粒细胞不加药,PM组加入30μmol/L的磷酰胺氮芥,miR-21组加入PM诱导颗粒细胞凋亡后转染LV-miR-21,BMMSCs组、miR-21-BMMSCs颗粒细胞培养基中加入PM 24h后分别与BMMSCs、miR-21-BMMSCs以1:1比例共培养.48h后采用流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡情况,qRT-PCR法检测miR-21、程序性死亡因子4(PDCD4)、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)mRNA的表达量,Western blotting检测PTEN、PDCD4蛋白表达水平.结果 正常组、PM组、miR-21组、BMMSCs组、miR-21-BMMSCs组的细胞凋亡率分别为10.4％±1.8％、33.4％±4.2％、27.0％±2.5％、28.0％±2.0％、19.6％±1.5％,5组间比较差异有统计学意义(F=59.35,P=0.00),其中miR-21-BMMSCs组细胞凋亡率明显低于miR-21组、BMMSCs组,但仍高于正常组.miR-21-BMMSCs组miR-21的表达量(4.0310±0.2314)明显升高,而PTEN、PDCD4的mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05).结论 BMMSCs过表达miR-21可明显减少卵巢颗粒细胞的凋亡,其机制可能与对靶基因PTEN、PDCD4的调控作用有关.
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磷酰胺氮芥对大鼠卵巢功能损伤的体外实验
目的 研究磷酰胺氮芥(glyciphosphoramide,PM)引起体外培养大鼠卵巢结构和内分泌功能损伤的适宜剂量.方法 实验分为4组,每组12个卵巢,来源于出生8周的Wistar大鼠.实验1、2、3组培养基中加入浓度分别为10、20、50 μg/mL的PM,培养48 h后均隔天全量更换不含PM的培养基.正常对照组培养基中不含PM.在PM加入前及加入后2 d(48 h)、6 d时更换的培养基中用放射免疫法测定其雌二醇(E2)浓度.在加入PM 6 d时取出大鼠卵巢,称湿重,HE染色,显微镜下观察各期卵泡形态并计数总卵泡数量.结果 加入PM后2 d及6 d的3个实验组的E2浓度均低于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),且3个实验组间两两比较差异也均有统计学意义.加入PM 6 d,3个实验组分别与正常对照组比较,卵泡总数差异均有统计学意义;3个实验组间两两比较,卵泡总数差异均有统计学意义.结论 PM浓度为10 μg/mL时已能引起体外培养大鼠卵巢结构及功能的损伤.
