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测定低分子量透明质酸相对分子质量的3种方法比较
目的 比较3种测定低分子量透明质酸(LMWHA)相对分子质量(Mr)方法.方法 分别采用特性黏度法、高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法及多角度激光散射仪结合凝胶渗透色谱(GPC/MALLS)法测定LMWHA的Mr,并对所得结果进行对比分析.结果 对于Mr介于10 000~100 000范围内的LMWHA,特性黏度法测得的Mr值与GPC/MALLS法测得的Mr值基本相同,而HPGPC法由于所用标准Mr对照品结构上的差异,测得的Mr与其它两种方法测得的值差异较大.结论 在一定Mr范围内,特性黏度法和GPC/MALLS法均可用于测定LMWHA的Mr.
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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量
目的建立改进的低分子SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量(Mr).方法考察不同因素对电泳结果的影响,对Mr标准进行直线回归分析,确定蛇毒抗瘤蛋白中组分的Mr.结果测得各条带的Mr分别为:23 500、15400、13400、11 300、9 300、8 000.结论此法供试品处理方便,用量少,在含6 mol/L尿素的分离胶(交联度为16.5%,丙烯酰胺总浓度为6%)中能同时显示中、低Mr的条带,是一种测定中、低Mr的较好方法.
关键词: 蛇毒抗瘤蛋白 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 相对分子质量 -
羟乙基淀粉急性高容量血液稀释对老年癌症患者硬膜外阻滞复合全麻下血小板膜表面糖蛋白的影响
羟乙基淀粉急性高容量血液稀释(acute hypervolemic hemodiliution,AHH)作为一种血液保护、减少异体输血的方法之一,具有操作简便、省时、费用低廉、减少血液污染机会等特点而被推广应用[1].但不同种类的羟乙基淀粉(HES)由于相对分子质量、分子结构及体内降解速度的不同.对凝血功能的影响也不同[2].
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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的疫苗研究进展
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是一种定植在人胃和十二指肠的微需氧、革兰氏阴性、螺旋弯曲菌.H.pylori是上消化道的主要致病菌,与胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)和胃癌等疾病的发生密切相关.近几年的研究显示,H.pylori感染还与缺血性心脏病、动脉粥样硬化、缺铁性贫血等胃外疾病相关[1].尿素酶是H.pylori中含量为丰富的蛋白,占H.pylori可溶性蛋白的5%~10%,结构亚单位为尿素酶A和尿素酶B.其中,尿素酶B亚单位( Urease subunit beta,UreB)为尿素酶的活性亚基,在幽门螺杆菌的致病过程中起着至关重要的作用,相对分子质量较大,约为64 000,具有高度的保守性和免疫原性,是H.pylori佳的疫苗候选抗原之一.
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结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在Vero E6细胞中的表达
构建结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的真核表达质粒,并研究其在Vero E6细胞中的表达情况.采用PCR方法自结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增esat-6基因片段,定向亚克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-esat-6重组质粒;利用脂质体介导的转染技术,将其导入Vero E6细胞,RT-PCR法检测mRNA表达情况,Western-blot法鉴定表达产物.从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出esat-6基因片段,成功构建重组表达质粒pVAC-esat-6;转染esat-6基因的Vero E6细胞,RT-PCR检测可见一条约288bp的目的条带,表达产物经Western-blot鉴定,其相对分子质量约为6000,能被结核病人血清所识别.构建的真核表达质粒pVAC-esat-6能在Vero E6细胞中表达,为结核病核酸疫苗的进一步研究打下基础.
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HPGPC法测定天花粉免疫活性多糖的相对分子质量
目的:测定天花粉多糖的相对分子量及分子量分布。方法采用高效凝胶渗透色谱法,色谱条件:TSK G4000PWXL凝胶色谱柱(7.8×300mm,5μm);TSK PWXL凝胶色谱预柱(6.0×40mm);流动相为0.71%硫酸钠溶液;流速0.5mL· min -1;示差折光检测器。结果天花粉免疫活性多糖的重均分子量在15423~7555之间,分子量分布宽度小于2.0。相对分子量在4.60×103~1.34×105范围内线性关系良好( R2=0.9993)。结论该方法简便,重现性和稳定性均较好,可以作为天花粉多糖分子量及其分布测定的有效方法。
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血小板内皮细胞粘附分子-1与心血管疾病关系研究
血小板内皮细胞粘附分子-1(platelet-endothelial cell adhesion molecule-1, PECAM-1),又称CD31,是免疫球蛋白(Ig)超家族的主要成员之一,其相对分子质量(Mr)为130 kDa,由6个细胞外的Ig折叠而成.PECAM-1早是由Newman教授及其同事[1]发现,该分子除在血小板上表达外,还表达于内皮细胞连接处、NK细胞、T细胞亚群和绝大部分粒白细胞,在整个造血干细胞的发育过程中均有表达[2].
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壳聚糖的生物学特性及其在眼科应用研究进展
1811年法国人Henri Braconnot从菌类中提取了一种类似纤维素的物质,当时只是把它当作一种新型纤维素,直到1843年,才由法国人J.L.Lassaigne发现该物质中含有氮,证明它不是纤维素,由于这种物质广泛存在于虾、蟹、昆虫等动物的甲壳中,以及真菌酵母的细胞壁里,故称之为甲壳素,甲壳素又称甲壳质、几丁质、壳蛋白、蟹壳素等,它的化学命名为[B-1.4-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡萄糖],英文名为Chitin,是一种天然的生物高分子,其分子结构与纤维素很相似,属线性多糖类,其分子中有许多胺基和羟基,易于进行化学修饰和改性,按反应条件和处理方法的不同可获得不同脱乙酰度和相对分子质量的产品.
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凝胶排阻色谱法测定乳酸-羟基乙酸共聚物(25∶75)相对分子质量及其分布
目的 建立乳酸-羟基乙酸共聚物(25∶75) (PLGA)相对分子质量(Mr)及其分布的测定方法.方法 采用TSKgel G3000HHR色谱柱,以四氢呋喃为流动相,流速1.0 mL/min,柱温40℃,示差折光检测器.结果凝胶排阻色谱法测定PLGA Mr及其分布系数,有良好的线性、准确性及重复性.结论此法简便快速,结果准确,重复性好,可作为PLGA Mr及其分布的测定方法.
关键词: 乳酸-羟基乙酸共聚物(25∶75) 凝胶排阻色谱 相对分子质量 分布 -
分子排阻色谱法测定玻璃酸钠相对分子质量及其分布
目的 使用分子排阻色谱(SEC)法测定玻璃酸钠(SH)相对分子质量(Mr)及其分布.方法 考察进样浓度、柱温及流速对SEC法测定SH的Mr及其分布的影响.结果 进样浓度对高分子SH的色谱峰形及测定结果影响较大,降低进样浓度色谱峰形明显改善,且测定结果精密度良好;柱温对SH的Mr测定结果有一定的影响;流速对SH的Mr及其分布基本无影响.结论 在SH进样浓度0.1 mg/mL,柱温30℃,流速0.5 mL/min的色谱条件下,用SEC法测定SH的Mr及其分布的色谱峰形良好,结果准确可靠,可用于SH的质量控制和应用研究.
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多角度激光光散射仪与尺寸排阻色谱法联用测定透明质酸相对分子质量及其分布
目的 多角度激光光散射仪与体积排阻色谱法联用(MALLS-SEC)测定透明质酸钠(HA)相对分子质量(Mr)及其分布.方法 考察MALLS-SEC法测定HA Mr的准确度和精密度,以及HA溶液浓度对测定的影响,比较此法、黏度法和尺寸排阻色谱法测定HA Mr的结果.结果 MALLS-SEC法的准确度、精密度均较好,相对标准偏差小于2%;测定Mr为104以上的HA样品采用0.05 mg/mL的浓度较为适宜;MALLS-SEC法测定HAMr的数值与黏度法较为接近,体积排阻色谱法测定值偏高.结论 MALLS-SEC法测定HA Mr,操作简单快速,结果准确,可用于HA的质量控制和应用研究.
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透明质酸钠热稳定性的研究
目的考察透明质酸钠粉末和溶液在不同温度下相对分子质量变化的规律,推测其相对分子质量降低10%所需的时间t0.9及半衰期t0.5;考察在121℃下不同pH值的透明质酸钠溶液的相对分子质量变化规律.方法将透明质酸钠粉末及溶液置于不同温度下放置不同时间,然后使用HPSEC法测定其相对分子质量.结果加热法促使透明质酸钠粉末、溶液及不同pH值溶液的相对分子质量的降解反应为一级反应.透明质酸钠粉末的相对分子质量降解规律为:lgk=15.295 9-6 164.093 8/T,25℃时t0.9为2.96年,t0.5为19.38年,6℃时t0.9为75.93年,t0.5为496.62年;透明质酸钠水溶液的相对分子质量降解规律为:lgk=15.155 4-6 115.400 8/T,25℃时t0.9为2.81年,nit0.5为18.38年,6℃时t0.9为70.20年,t0.5为459.15年;透明质酸钠氯化钠溶液的相对分子质量降解规律为:lgk=15.091 8-6 085.327 6/T,25℃时t0.9为2.28年,t05为16.87年,6℃时t0.9为63.41年,t05为414.75年.结论透明质酸钠固体和溶液在常温下均具有良好的稳定性;且其溶液在pH值为中性时较稳定,碱性条件下较酸性条件下稳定.
关键词: 透明质酸钠 相对分子质量 稳定性 高效分子排阻色谱(HPSEC)法 -
不同相对分子质量玻璃酸钠对药物释放影响的研究
目的研究不同相对分子质量的玻璃酸钠对药物释放的影响.方法配制含不同相对分子质量的玻璃酸钠,黏度相同的药液,采用改良的Franz扩散池,测定药物的渗透速率.结果黏度相同的药液,渗透速率无明显差别.结论以玻璃酸钠(SH)为媒介的药物溶液的释放速率主要与黏度有关.
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海普林在皮肤科的应用
海普林软膏为皮肤科用非处方药品(山东正大博士伦制药有限公司生产),其主要成分为酸性黏多糖--肝素钠(相对分子质量4000~15000).肝素具有抗凝血、抗血栓、抗炎、抗过敏和抗补体等药理活性,在角质软化剂和皮肤促透剂的协同作用下,低分子肝素更易透皮吸收,有效地阻止炎症细胞在血管壁的附着,降低血液粘度、增加血流量、改善局部血液循环并促进皮肤代谢.海普林软膏可用于多种皮肤病的治疗,安全、有效,且无明显的毒、副作用.
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花生四烯酸的营养保健功能
花生四烯酸(arachidonic acid,简称AA),化学名称为5,8,11,14-二十碳四烯酸,相对分子质量304.5,分子式C20H32O2,属于n-6系列的长链多不饱和脂肪酸(PUFA),简记为20:4(n-6).AA是哺乳动物内含量丰富、分布广的一种多不饱和脂肪酸,主要以磷脂的形式存在于哺乳动物的器官、肌肉和血液中,尤其是脑和神经组织中.此外,AA还是许多二十碳酸衍生物如前列腺素E2(PGE2)、前列环素(PGI2)、血栓烷素(TXA2)、白三烯Leukotirene B4(LTB4)和C4(LTC4)的直接前体.AA具有重要的营养、保健和医疗功能,本文介绍了AA的功能特性及应用情况.
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透明质酸对骨关节炎的治疗作用
透明质酸(HA)是构成关节软骨和滑液的主要成分,当发生骨性关节炎(OA)、类风湿性关节炎(RA)以及其他感染性和非感染性关节疾病时,HA在关节内的产生和代谢发生异常,滑液中HA的浓度和相对分子质量(Mr)明显降低,软骨发生降解和破坏,导致关节生理功能障碍.黏弹性补充疗法因此应运而生,Balazs等人先提出通过补充外源性HA,恢复滑液的润滑功能,促进软骨的修复,改善关节功能.
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由分子量和相对分子质量引起的思考
原子量和相对原子质量,及由其衍生的分子量和相对分子质量的争论由来已久.对于药学工作者,无论是查阅文献或发表文章,都经常接触分子量和相对分子质量这两个专业术语,但对这两个概念理解并不是非常清晰.笔者参考相应文献,从发展历史及争论等方面,结合应用中遇到的问题,讨论分子量和相对分子质量的使用.
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短蛸章鱼多糖的提取分离和基本性质分析
目的 从短蛸(Octopus ocellatus)的胴体和腕部提取多糖,对短蛸不同部位提取的粗多糖的基本理化性质进行分析和比较,并对粗多糖进行分离和纯化.方法 依次采用冷水,木瓜蛋白酶和胰蛋白酶联合酶解的方法提取多糖,采用Sevage法和等电点法去除粗多糖中的蛋白.对短蛸不同部位提取粗多糖的总糖、蛋白、糖醛酸、硫酸根含量和重均相对分子质量、单糖组成等性质进行分析和比较,并采用Sephacryl S-300凝胶柱层析和Q Sepharose 4 Fast Flow离子交换层析方法对粗多糖进行分离和纯化.结果 从短蛸胴体中提取的粗多糖中总糖和糖醛酸的含量明显高于腕部粗多糖,且蛋白含量较腕部多糖低;水提多糖中总糖和糖醛酸的含量明显低于酶提多糖,且蛋白含量高于酶提多糖;短蛸胴体粗多糖的单糖组成相对简单,主要含有Glc和少量Man 、GlcNAc、GlcUA,而腕部粗多糖的单糖组成较为复杂,除主要含有Man、GlcNAc、GlcUA和GlcN外,还含有少量Gal和Fuc等;各多糖的重均相对分子质量在127.9-266.4 kD之间;水提多糖和酶提多糖在Sephacryl S-300凝胶柱层析上的洗脱曲线也明显不同.结论 采用不同方法、从不同部位提取的多糖基本理化性质无论是总糖、糖醛酸和蛋白的含量,还是单糖组成和在凝胶柱层析上的洗脱曲线都存在明显的差异.
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不同相对分子质量壳聚糖乳酸盐体外抑菌实验研究
目的 观察不同相对分子质量壳聚糖乳酸盐体外抑制细菌的效果.方法 采用试管二倍稀释法测定不同相对分子质量壳聚糖乳酸盐对常见致病菌的低抑菌浓度(MIC),同时对两株质控菌进行低杀菌浓度(MBC)测定.并以盐酸左氧氟沙星作为对照药.结果 相对分子质量为10、30、50kDa的壳聚糖乳酸盐对50株革兰阳性球菌和50株革兰阴性杆菌的MIC90分别为0.5~1 mg·mL-1和1~4 mg·mL-1、0.5~1 mg·mL-1和1~4 mg·mL-1、0.5~1 mg·mL-1和0.5~4 mg·mL-1.4mg·mL-1浓度的10kDa壳聚糖乳酸盐对金黄色葡萄球菌ATCC25923株和大肠杆菌ATCC25922株具有杀菌作用.结论 相对分子质量为10、30、50kDa壳聚糖乳酸盐对4种实验细菌均有一定的体外抑菌效果,其中以相对分子质量10kDa较强.相对分子质量10kda的壳聚糖乳酸盐对金黄色葡萄球菌ATCC25923株和大肠杆菌ATCC25922株有体外杀菌作用,其他相对分子质量的壳聚糖乳酸盐在试验浓度范围内则无体外杀灭细菌的作用.
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一种鲍鱼脏器多糖的鉴定及活性研究
目的 对鲍鱼脏器中获得的一种多糖AHP-12进行纯度和组成的鉴定,并对其抗肿瘤活性进行分析.方法 高效液相色谱和琼脂糖凝胶电泳鉴定纯度;凝胶色谱法测定相对分子质量;明胶比浊法测定硫酸根含量;比色法测定氨基己糖含量;气相色谱测定单糖组成;MTT法检测其体外抗肿瘤活性.结果 鲍鱼脏器多糖AHP-12为一种均一的多糖组分;其相对分子质量约为3×105;硫酸根舍量为13.07%;氨基己糖含量为4.98%;单糖组成为鼠李糖、岩藻糖和半乳糖组成,其摩尔比为: Rha:Fuc : Gal=1:2.2 : 1.7;AHP-12对HeLa细胞增殖有一定的抑制作用.结论 从鲍鱼脏器中提取经分离纯化得到的多糖AHP-12是一种均一的多糖,且为硫酸酯多糖和氨基多糖,具有较弱的体外抗肿瘤活性.