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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量
目的建立改进的低分子SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量(Mr).方法考察不同因素对电泳结果的影响,对Mr标准进行直线回归分析,确定蛇毒抗瘤蛋白中组分的Mr.结果测得各条带的Mr分别为:23 500、15400、13400、11 300、9 300、8 000.结论此法供试品处理方便,用量少,在含6 mol/L尿素的分离胶(交联度为16.5%,丙烯酰胺总浓度为6%)中能同时显示中、低Mr的条带,是一种测定中、低Mr的较好方法.
关键词： 蛇毒抗瘤蛋白 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 相对分子质量 -
正交实验建立蛇毒抗瘤蛋白生物活性测定方法
目的:建立蛇毒抗瘤蛋白生物活性测定方法.方法:用正交实验确定实验条件,求细胞50%死亡时的样品浓度,即IC50值.结果:此法使细胞死亡率与样品的Log浓度具有良好的线性关系(r=0.9515,P<0.01),重复性实验结果:板内RSD值为 12.3%,板间RSD值为 16.6%;不同实验次数RSD值为 17.8%,灵敏度为36 μg·L-1, 并能反应出蛇毒抗瘤蛋白的抗肿瘤特异性.结论:此方法特异,简便且具有良好的重复性,可以作为蛇毒抗瘤蛋白生物活性的测定方法.
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蛇毒抗肿瘤蛋白心脏毒素的分离纯化与鉴定
目的:对蛇毒抗瘤蛋白的活性组分进行分离与鉴定.方法:采用RP-HPLC分离蛇毒抗瘤蛋白各组分,收集纯化组分Ⅱ.RP-HPLC及SDS-PAGE测定组分Ⅱ的纯度;MALDI-TOF质谱仪测定组分Ⅱ的相对分子质量;对组分Ⅱ进行N-末端氨基酸序列测定.结果:蛇毒抗瘤蛋白组分Ⅱ经RP-HPLC和SDS-PAGE分析为单-成分,MALDI-TOF质谱仪测得其相对分子质量为6719.49,其N-末端氨基酸序列为L-K-C-N-K-L-V-P-L-F-Y-K-T-C-P.结论:经分离鉴定,蛇毒抗瘤蛋白组分Ⅱ为心脏毒素.
