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不同抗凝剂和缓冲液放置时间对纤维蛋白原测定结果的影响
纤维蛋白原在凝血过程中,经凝血酶的作用,转为纤维蛋白,形成纤维网,将血液中的有形成分包罗起来而形成血块或血栓.
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EDTA作为抗原修复液用于脑石蜡片NMDA-R2A免疫组织化学检测的方法与效果探讨
石蜡切片进行免疫组织化学染色的优势在于能得到极为清晰美观的组织形态,其中修复待检测物质的抗原性(抗原修复)是一个关键步骤.抗原修复的效果直接影响到终的染色结果.用pH值6.0的枸橼酸(柠檬酸)缓冲液进行微波修复或高压修复目前使用广,是国内外绝大多数实验室的首选方法.该方法能有效修复大多数物质的抗原性,得到阳性强、结果美观的图像,重复性好,颇受广大实验工作者的欢迎.但经过长期实践和总结发现枸橼酸缓冲液用于抗原修复有一个比较隐蔽的缺陷:它能使某些膜受体的阳性分布区域向细胞质内扩大.比如NMDA-R2A是一种广泛分布于脑内的促离子型谷氨酸受体,免疫电镜显示它应当分布在神经细胞的突触后膜上[1].但使用枸橼酸缓冲液对大鼠中脑石蜡切片进行抗原修复后,阳性结果分布于神经细胞的整个胞质(图1B);这与NMDA-R2A的实际分布有明显出入.由于细胞质阳性的图像比较美观,并且这种阳性的成因也有解释的余地,因此常常被实验人员误认为是正常的.我们尝试了其它一些修复方法,综合比较后认为乙二胺四乙酸(EDTA)溶液对于NMDA-R2A这类膜受体的检测是一种更好的抗原修复液,并对其使用方法和效果探讨如下.
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免疫胶体金在标记超薄切片中抗原的几点体会
金标法是利用胶体金在碱性环境中带负电的性质,使其与抗体相吸引,从而将抗体标记.我们在使用免疫胶体金标记超薄切片抗原的实验中深深地体会到,要提高标记阳性的成功率,某些因素将在实验中起到很重要的作用.1、材料和方法1.1材料 20例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为IgA肾病的肾活检组织的环氧树脂包埋块.1.2方法取肾活检组织,经0.05%戊二醛,1%多聚甲醛(二甲砷酸钠缓冲液配制)固定3-4h,1%OsO4后固定2h,梯度丙酮脱水,Epon812包埋,60℃聚合12h,制备超薄切片(50-70nm),粘贴于带有formar膜的镊网上.以下实验在湿盒内进行:10%H2O2蚀刻30min,双蒸水冲洗;正常羊血清30m in;0.05M TBS冲洗;一抗((1:10)4℃冰箱内孵育20h,加室温2h; 0.05M Tris冲洗;正常羊血清孵育15min;0.05M Tris冲洗,0. 02M Tris(其中含0.1%BSA 0.05%NaN3pH8.2)冲洗;二抗 (1:20),室温孵育2h;0.02M Tris冲洗,0.05M Tris冲洗, 0.05M Tris加Tritonx-100浸洗,3次每次10min,双蒸水冲洗 ;1%戊二醛固定15min,双蒸水冲洗;铅铀双重染色,电镜观察.2、结果金颗粒主要集中于肾小管上皮细胞的胞质,有的沉积在线粒体内,或刷状缘其间 .详细内容见(用金标法检测细胞因子在人IgAN肾细胞内的位点及意义)金晓明等一文.3、体会和注意事项3.1 戊二醛的浓度直接影响抗原的保存.我们经过多次实验,戊二醛浓度在0.05%, 多聚甲醛1%时,固定时间不少于3小时,组织大小在1-2mm3,组织结构保存良好 ,同时对抗原影响也不大.3.2 抗体的稀释液采用0.05M Tris,0.15M NaCL,pH7.0,含 0.05%聚乙二醛(PEG)和0.05%NaN3.其中PEG可以使金颗粒分散, 提高蛋白质间的结合力,有利于一抗与二抗的结合,血清和BSA作为稀释液时都没有PE G效果好.一抗与二抗的稀释比例根据所标记抗原的情况而定.3.3 Triton x-100加入到0.05M Tris缓冲液中作为冲洗液,可以提高胶体金的穿透力,同时Triton x-100又是一种表面活性剂,在2抗标记后用含有0.05Triton x-100的Tris缓冲液浸洗30min,可以清除一部分非特异性反应的胶体金,使切片中组织形态清晰,提高样品的反差,而过量浓度的Tri ton和过长时间的浸洗会破坏组织中的膜结构.3.4 在实验中采用网架装载铜网,一次可以同时孵育几张到几十张超薄切片,同时不用担心在孵育过程中切片的正反面,又可避免镊子夹破支持膜和切片,节省每一实验步骤中的操作时间.网架是用铜网装载盒制成的,钻漏铜网盒,按所需的大小锯成小网架.清洗时用浓盐酸浸泡几分钟后冲洗,放在无水乙醇中保存,待下次使用前晾干.
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ThT结合试验法检测Aβ42聚集情况的条件探讨
目的 探讨硫黄素(ThT)结合试验法检测β-淀粉样多肽l～42(Aβ42)聚集情况的条件.方法 Aβ42经六氟异丙醇(HFIP)单体化处理后,进行复溶,然后将Aβ42与ThT溶于缓冲体系,一定温度下于96孔板中共孵育不同时间,酶标仪检测450 nm激发下485 nm的荧光强度.分析Aβ42不同的浓度,孵育温度,96孔板类型,缓冲液种类以及复溶方式对ThT结合试验法测定Aβ42聚集情况的影响.结果 在ThT结合试验法中,Aβ42孵育浓度与荧光值成线性正比关系,孵育温度对此正比关系无较大影响;选用半透明板及PBS缓冲体系与其它条件相比,此线性正比关系更稳定;以终NH3·H2O 20 mmol/L的浓度加入1％ NH3·H2O对单体化处理后的Aβ42复溶,并进行过滤的方法,与其它方法相比,寡聚体更少,以终2％ v/v (DMSO/PBS)的比例加入二甲基亚砜(DMSO)进行复溶的方法,寡聚体较多,且Aβ42更快更多地发生了聚集;而利用ThT结合试验法研究Aβ42由单体到聚合体进程变化的动力学时,使用20 mmol/L NH3·H2O复溶方式进行复溶,观察到的动力学趋势过程更明显直观.结论 不同条件对ThT结合试验法检测Aβ42聚集情况的结果影响较大,条件不同结果不同,实验中应根据实验目的及具体情况来选择不同的条件.
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前列腺素的引产机制
前列腺素(prostaglandin,PG)是一种广泛存在于人体组织和体液中的二十碳不饱和脂肪酸,含量极微而效应很强.前列腺素及其衍生物属生物体内强的自体有效物质,对体细胞的各种活动都有重要调节作用.它早是在人精液中发现的一种血管活性物质,并认为其在前列腺产生,故命名为前列腺素.根据其分别易溶于乙醚、硫酸缓冲液而分为前列腺素E和前列腺素F.
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Bio Vue血型分析技术及其临床应用
在日益重视输血安全的今天,准确进行ABO及Rh血型鉴定在临床上显得尤为重要.寻找一种既安全准确又简捷适用的血型分析方法是保障输血安全的重要手段.我院引进美国强生BioVue血型分析技术检测已逾2300人次,现将此技术及应用介绍如下.1材料与方法1.1 BioVue系统(美国强生公司生产),包括专用梯度离心机、专用工作架、加样枪等.1.2 BioVue血型分析卡,包括ABO/Rh(D)正反定型卡、Rh及K分型卡两种.一卡6柱,柱中都含有牛蛋白的大分子量增强剂的缓冲液,一人一卡.各卡所含抗血清如表1所示.
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玻璃酸钠在眼科的临床应用
玻璃酸钠(sodium hyaluronate,SH)为广泛存在于动物和人体内的生理活性物质,是由Ⅳ-乙酰氨基葡糖和葡糖醛酸组成的高分子粘多糖,呈无色透明,能溶于生理缓冲液,一般分子量》8×105,粘度》4 000mm/s,pH值7.0,分子量链越长,粘弹性越高,在人皮肤、关节滑膜液、脐带、房水、眼玻璃体中均有分布.高分子量玻璃酸钠溶液的高粘弹性及仿形性使它在手术中可做为保护工具和手术工具,广泛应用于骨科、外科、妇科、眼科、皮肤科及医学美容化妆品学方面,现就在眼科方面的应用作一简要介绍.
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玻璃酸钠在眼科的临床应用
玻璃酸钠(sodium hyaluronate,SH)为广泛存在于动物和人体内的生理活性物质,是由Ⅳ-乙酰氨基葡糖和葡糖醛酸组成的高分子粘多糖,呈无色透明,能溶于生理缓冲液,一般分子量＞8×105,粘度＞4 000mm/s,pH值7.0,分子量链越长,粘弹性越高,在人皮肤、关节滑膜液、脐带、房水、眼玻璃体中均有分布.高分子量玻璃酸钠溶液的高粘弹性及仿形性使它在手术中可作为保护工具和手术工具,广泛应用于骨科、外科、妇科、眼科、皮肤科及医学美容化妆品学方面,现就在眼科方面的应用作一介绍.
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21058 先兆子痫发生前母血中有核红细胞计数升高
[英]/WoHgang Holzgreve…∥Am J Obstet Gynecol.-2001,184.-165-168.妊高征是妊娠相关的高血压疾病,其病因不清,发病率为10%,仍是孕产妇和新生儿死亡的主要原因.目前尚无可靠方法在早期筛选妊高征之高危孕妇,以采取预防措施.有研究报道,先兆子痫孕妇和胎儿有核红细胞计数升高,研究者采用富集孕妇外周血中胎儿细胞这一无创伤的方法作为产前诊断,做了该项前瞻性研究,以确定在先兆子痫临床症状出现之前是否有核红细胞计数已升高.对象和方法:由于子宫动脉血流减少是发生先兆子痫和胎儿宫内发育迟缓(IUGR)的高危因素,故对孕妇在妊娠中期(19～24周)常规进行双侧子宫动脉的多普勒超声检查.研究组为单侧或双侧子宫动脉血流减少的43个孕妇,采血15mL.对照组包括子宫动脉血流正常的51个孕妇及未做多普勒超声检查的3个孕妇.采血时平均孕周为21±3周.既往无高血压病史,间隔4小时测量血压≥140/90mmHg(18.7/12.0kPa),同时伴有蛋白尿者,诊断为先兆子痫.胎儿细胞的富集:采用磁性分离法富集有核红细胞.简言之,用磷酸钠缓冲液稀释后,加入相等容积的1077 Ficoll Paque,以800转/分的速度离心20分钟.用抗-CD71-结合柱富集有核红细胞.用血细胞计数器计数有核红细胞,富集的有核细胞用磷酸钠缓冲液洗涤后,以细胞离心法分离,移入玻璃玻片,May-Grunwald-Giemsa染色法染色.有核红细胞的分数是计数1000个有核细胞中有核红细胞的个数,即有核红细胞的个数＝有核细胞的个数×有核红细胞的分数.结果:研究组15例孕妇发生先兆子痫,9例发生IUGR而未发生先兆子痫,其余21例孕妇无任何并发症.对照组除了1例孕妇发生IUGR外,其余无任何并发症.富集的有核红细胞数目与妊娠结局相关.子宫动脉血流减少但终无并发症的孕妇,其有核红细胞数目与子宫动脉血流正常的孕妇无差异(186.7 Vs 1140.0,P=0.154).发生IUGR的病例与对照组相比,有核红细胞数目无明显升高(355.6 Vs 928.9,P=0.772).研究结果表明,发生先兆子痫的孕妇在妊娠中期血有核红细胞的数目已升高(6041.7 Vs 928.9,P=0.008).讨论:发生先兆子痫的孕妇,在妊娠早期外周血中的有核红细胞就已明显升高.虽然该研究没有区分有核红细胞是来自胎儿还是母亲,但既往用荧光原位杂交和单细胞多聚酶联反应研究发现,母亲外周血中有核红细胞大部分来自胎儿.因此,研究结果表明,胎儿细胞在孕早期就进入母亲外周血中者,后期会发生先兆子痫.因为先兆子痫的初病理机制可能是胎盘植入缺陷,滋养细胞不能有效侵入蜕膜层重铸母体螺旋动脉,这些都与胎儿细胞漏入母体有关.尽管IUGR与先兆子痫有关,但发生IUGR未发生先兆子痫的孕妇,其血中有核红细胞数目并未升高,这表明IUGR和先兆子痫的病因有基本的不同,并且与胎盘功能异常有关的胎-母细胞交流的紊乱可能是先兆子痫,而不是IUGR的一特异性特征.母亲外周血中有核红细胞是否可作为先兆子痫的预测指标,需进一步探讨.(张淑萍 白丽萍摘 苟文丽审校)
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降血脂别指望一洗了之
目前在一些大城市,洗血疗法成了一种时尚的保健方法.经商者和白领是洗血疗法的追捧者,因为他们忙于应酬,很少有时间运动.一些血脂高者认为有了洗血疗法就可以放心地吃喝了,也用不着花费时间和体力去锻炼,因为血脂高可以去医院一洗了之.这种做法是否有效,有益健康吗?洗血疗法始于治疗罕见病洗血疗法全称为肝素诱导低密度脂蛋白沉淀法(HELP).血液以每分钟70毫升的速度从病人的手臂中引出体外,经过一套HELP血脂分离系统时被分离为血细胞和血浆,血细胞重新输人体内,而血浆则加入肝素缓冲液,将低密度脂蛋白、纤维蛋白原沉淀后清除,其他如甘油三酯、胆固醇也明显降低.血液过滤后,重新回输病人的体内.
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毛细管区带电泳分离大肠埃希菌部分因素的探讨
目的 探讨毛细管区带电泳分离大肠埃希菌的有关影响因素.方法 用毛细管区带电泳法对大肠埃希菌ATCC25922进行了分离研究,分析缓冲液pH值、添加剂PEO分子量及浓度、电压和毛细管长度对分离的影响.结果 缓冲液pH值、添加剂PEO分子量及浓度、电压和毛细管长度对毛细管区带电泳分离大肠埃希菌有较大影响,在优化的条件下,大肠埃希菌ATCC25922能达到很好的分离.结论 调节贮存缓冲液TBE(4.5 mmoL/L Tris,4.5 mmoL/L硼酸,0.1mmoL/L EDTA)pH值至9.0,添加剂0.0125 g/dl PEO(Mr600 000),毛细管总长度50.2 cm,电压25 KV,毛细管区带电泳分离大肠埃希菌ATCC25922,分离时间20 min,峰形尖锐,效果佳.
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Array 360特种蛋白分析仪的保养和常见故障的处理
Array 360特种蛋白分析仪是美国贝克曼(Beckman)仪器公司产品.它的检测原理是在抗体过量的前提下,光束通过时,悬浮于缓冲液中的抗原-抗体免疫复合物颗粒所产生的散射光速率变化强弱与抗原浓度成正比,速率峰值经微电脑处理后转换成抗原浓度.因其测定方法具有敏感、精确、快速和简便的特点,故已在临床检验工作中得到较广泛地使用.我单位于1996年购进该机,下面是笔者使用五年多来的一些经验体会.
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IL1306血气分析仪的电极保养及漏液报警处理
我院于1993年11月购进了一台美国IL1306血气分析仪，此仪器自购进至今使用良好，测定结果稳定可靠。但该仪器的主要部件为电极，电极的保养和维护对其使用寿命影响较大，对于保证检验质量和仪器的正常工作都占重要位置。现就我们使用该仪器在电极保养和仪器出现漏液报警的处理方面介绍如下。1 电极保养为提高各电极测量的灵敏度及准确性，及时消除血液蛋白质的污染，坚持每天工作后用仪器清洁液对测量腔清洁一次，每两周用2 500 ppm次氯酸按仪器操作要求对仪器进行清洁处理，并同时对电极进行如下维护保养。1.1 pH电极清洁法使用浸有无水乙醇的数层纱布以圆周动作轻擦pH顶端。以除去任何积累在电极上的脂类和蛋白质，使电极顶端洁净，无薄层和暗淡的感觉为止或用0.1%胃蛋白酶盐酸液浸泡半小时，然后用pH 7.384缓冲液冲洗即可。
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本—周氏蛋白热沉淀反应法的改进
加热法检查本—周氏蛋白尿往往受其它蛋白质的干扰，影响结果判断，我们对本试验做了一点改进，现介绍如下。1 试剂 2 mol/L醋酸盐缓冲液：取醋酸钠(含3个结晶水)17.5 g，加冰乙酸4.1 ml、蒸馏水100 ml，调pH至4.9。2 方法2.1 取患者尿液4 ml置于玻璃试管中，加入醋酸盐缓冲液1 ml，混匀，56 ℃水浴15 min，出现浑浊沉淀。将试管置离心机以1 500 r/min离心3 min，将上清液倒入一玻璃试管内，并保留原试管中的沉淀物。2.2 将盛有上清液的试管放入沸水中煮沸3 min，若上清液中有沉淀，再以3 000 r/min离心5 min，将上清液倒入盛有56 ℃沉淀物的试管中，将该沉淀物与上清液混合均匀，置于沸水中加热3 min，观察浑浊变清或减弱，本—周氏蛋白为阳性。
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医学检验用稀释液的研制概述
稀释液(缓冲液)是医学检验常用的试剂之一,它可应用于血液自动分析仪、免疫特定蛋白分析仪等;这些分析仪使用的试剂用量大,价格昂贵.因此进口试剂的国产化是我国医学检验发展的重要任务之一[1].国内对自配试剂有不少报道[2～4],但大多数停留在与进口试剂比较的水平上,自配试剂配方各有不同,重要的是影响试剂质量有关参数的研究.本文就有关稀释液研制概述如下.
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正常男女须部雌雄激素受体的研究
正常男性青春期后有胡须长出,而女性则无,此类差别,有人以男女体内雌、雄激素水平的不同加以解释,本研究试图以受体水平对此类差别进行探讨. 材料和方法标本正常成人28例,男21例,女7例,年龄18～61岁,每例以下巴须毛生长处或相应部位切取1cm×1cm大小全层皮肤. 主要材料与试剂冰冻切片机,荧光显微镜,2%牛血清白蛋白,0.01mol/L(pH=7.4)PBS缓冲液,未标记的雌二醇、二氢睾酮,荧光素标记物:雌二醇-牛血清蛋白-异硫氰酸荧光素结合物由深圳膜生公司提供,二氢睾酮丁二酸酯-牛血清蛋白-异硫氰酸荧光素结合物由华西医科大学病理科提供.
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青霉素类药品含量测定中缓冲液对测定结果的影响
青霉素及半合成青霉素是临床应用极为广泛的抗菌药物.中国药典(CP)2000年版二部将青霉素钠、青霉素钾等品种的含量测定定为硝酸汞电位滴定法.该法在滴定过程中,使用的是pH4.6醋酸盐缓冲液,与CP2000年版附录中pH4.5醋酸盐缓冲液比较,两种缓冲液pH值虽然相差0.1,但其配制方法差别甚大.为此,我们考察了pH4.5和pH4.6的醋酸盐缓冲液对青霉素钠含量测定结果的影响.
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缓冲液pH值对血涂片Wright's染色的影响分析
目的研究缓冲液pH值对血涂片染色的影响.方法将600张血涂片分为6组,每组滴加pH值不同的缓冲液.结果滴加了不同pH值缓冲液的血涂片染色效果差别较大,在缓冲液pH值为6.98时,染色效果好.
关键词： 缓冲液 血涂片 Wright's染色 pH值 -
抗原修复技术方法的应用比较
目的探讨关于组织抗原修复技术不同的方法在应用中的比较.方法运用微波炉、高压锅和胰蛋白酶法及柠檬酸盐、EDTA两种缓冲液进行抗原修复,比较了40种抗体的免疫组化染色在不同技术条件下的应用效果.结果 40种抗体中,25种抗体由不处理的(+)或(-)提高到(++),6种抗体提高至(++),微波和高压锅结果相同的有26种,高压加热较微波提高了一个(+)的有12种.结论在实际工作中运用不同的抗原修复技术能极大地改善免疫组化结果,提高难以检测的细胞内、细胞核的抗原检出率,缓冲液的使用是关键.
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68Ge/68Ga发生器的临床应用
对新型68 Ge/68 Ga发生器的佳淋洗时间、佳峰段以及不同缓冲液对68 Ga显像及生物分布的影响进行研究,为动物实验和临床应用提供参考.采用4 mL 0.05 mol/L HCl淋洗740 MBq ITG 68 Ge/68 Ga发生器,首次淋洗后分别隔2、4、6、8、10、12、14 h再次淋洗,记录放射性活度;先以每段0.5 mL收集淋洗液,在比活度较高段以每0.1 mL收集淋洗液,记录放射性活度;分别用乙酸钠、NaOH、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)调节68 Ga3+溶液pH,在正常小鼠体内行microPET显像.结果表明:在淋洗4 h后,放射性活度可达平衡时的91%;佳峰段为2~3 mL,放射性活度峰段的0.1 mL可收集22 MBq的68 Ga3+;68 Ga3+在血液中摄取值高,1 h仍有6.9%ID/g,表明游离的68 Ga3+可能会影响图像的对比度,需要在标记放射性药物后去除残余的游离68 Ga3+;膀胱的放射性摄取高,提示68 Ga3+通过泌尿系统排泄;乙酸钠、NaOH、HEPES调节pH后对68 Ga在正常小鼠体内显像及生物分布均无统计学差异(P>0.05).新型68 Ge/68 Ga发生器操作简便,每4 h即可淋洗一次,淋洗液的峰段在2~3 mL,建议临床采用乙酸钠缓冲液.
