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降纤酶生产过程中测活方法探讨
降纤酶是从尖吻蝮蛇毒纯化的蛋白水解酶。酶的活力是衡量酶制剂水平的一个重要指标,它所处环境的酸碱性、离子强度、温度、金属离子等对其活性有很大的影响。部颁标准的降纤酶测活方法是针对原料药及制剂的,它们纯度高,一般为冻干品且含盐分少,可用合适pH及离子浓度的缓冲液溶解,因而能在降纤酶适测活环境中进行测定。然而,在从尖吻蝮蛇毒纯化降纤酶的过程中,由于工艺的需要[1],所用的各种层析缓冲液中含有不同浓度的盐,酸碱度也与测活系统不一样。高浓度的盐与偏酸、偏碱都影响降纤酶的活性测定,甚至出现与客观事实相反的结果,给纯化工作造成误导。
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人肌肉组织褪黑素受体鉴定及意义
1 材料和方法1.1 材料取4例活检人骨骼肌组织,患者年龄28~56(40±12)岁.Mel、2-I-Mel、6-氯-Mel、6-羟-Mel等由香港大学彭树勋教授惠赠,125I-Mel: 33.3 TBq/mmol,美国Donpont公司产品.1.2 肌肉组织MR测定采用放射配体结合法.骨骼肌组织加6倍体积Tris-HCl缓冲液匀浆,高速离心后取上清.37℃孵育60 min,用多头细胞收集仪,通过玻璃纤维滤膜清洗游离核素,然后用γ计数仪测定滤膜的放射活性.
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褪黑素腹腔注射对小鼠胸腺及脑组织褪黑素受体的调节作用
1 材料和方法1.1 材料 C57小鼠(购自中科院生化所动物房),3周龄,用药组小鼠每天腹腔注射褪黑素(Mel)0.01、0.05、0.1、0.5 mg/kg,共2周.然后处死动物,取出胸腺和脑组织,液氮冻存.对照组小鼠每天腹腔注射等量生理盐水.1.2 膜受体制备取出冷冻的胸腺、下丘脑组织在0℃环境中解冻.解冻的组织加10倍体积(W/V)的Tris-HCl缓冲液(0.05 mol/L,pH 7.4)匀浆;匀浆液经高速低温离心(44 000×g,25 min,4℃)后弃上清, 用Tris-HCl缓冲液洗涤并离心1次.提取粗制的膜组织, 加Tris-HCl缓冲液制成膜制备样品,用Lowry法测定膜蛋白浓度.
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甲状腺功能亢进症患者甲状腺组织糖皮质激素受体的改变及意义
1 材料和方法1.1 研究对象甲状腺功能亢进症(甲亢)组患者20例,年龄(30±4)岁;甲状腺腺瘤组15例,年龄(35±6)岁;对照组15例,年龄(33±5)岁.3组均为女性.1.2 甲状腺组织GR测定方法采用放射配体结合法.取甲亢患者手术切除的甲状腺组织,甲状腺腺瘤患者手术切除的甲状腺组织以及周围正常组织(作对照),加入10倍体积Tris-HCl缓冲液(pH 7.45, 0.05 mol/L), 匀浆,高速离心10 000×g 20 min, 分离出细胞核;分别加入0.5、1、5、10、15、20、25 nmol/L 3H-Dex(1.78 TBq/mmol,英国放化中心产品),进行Scatchard分析,非特异性结合管加1 000倍浓度的非标Dex.
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NO及其合酶在实验性肝肺综合征发病机制中的作用研究
肝肺综合征是由于慢性肝病或门脉高压引起的肺内血管异常扩张,气体交换障碍,动脉血氧分压降低而导致的疾病。它见于晚期肝硬化患者的15%~20%,由于药物治疗疗效差,肝移植后可获得明显改善,成为近年研究的热点之一,但其确切机制尚不清楚[1]。有研究发现慢性胆总管结扎(chronic common bile duct ligation,CCBDL)可引起实验大鼠发生肝肺综合征的临床表现,可作为其发病机制研究的动物模型[2]。一氧化氮(nitricoxide,NO)是一种内皮细胞来源的舒血管因子,是引起肝硬化患者高动力循环状态的重要物质[3],NO是由一氧化氮合酶(nitric oxide syn-thase,NOS)以L-精氨酸为底物催化而成,NOS有两种:诱导型(iNOS)和结构型(cNOS)。本研究拟以CCBDL的大鼠为模型观察血浆及肺组织的NO水平,肺组织的iNOS及cNOS水平,并用NADPHd组织化学的方法观察肺组织内NOS的分布,以探讨NO及其不同类型的合酶在实验性肝肺综合征发病机制的作用。 材料与方法 一、实验动物 雄性SD大鼠,体重200~250 g,购自中国科学院上海实验动物中心,随机分为3组,每组8只: (一)CCBDL组参照Easter[7]的方法,戊巴比妥钠麻醉下结扎胆总管。 (二)正常对照组对照组经过上述相同的手术过程,但胆总管不结扎。 (三)肾上腺皮质激素预防组(激素组)操作过程同CCBDL组,但从第2周起每天经腹腔内注射地塞米松0.5mg/kg。 在手术后第2周和第5周取静脉血作血气分析,取动脉血测肝功能;第5周经眼球取血后处死大鼠,摘取肝脏作HE染色;取一侧肺剪碎,置于10 ml离心管中,按1:5加入PBS,匀浆,10 000 rpm离心15 min,收集上清液待测NO;另一侧肺作NADPIId组织化学染色。 二、方法 (1)肝功能测定;(2)血气分析测定:Chiron 248自动血气分析测定;(3)血浆及肺组织NO水平:由军事医学科学院放射医学研究所提供NO检测试剂盒;(4)肺组织NOS水平测定:由中国协和医科大学提供NOS检测试剂盒;(5)肺组织NADPHd组织化学染色:经支气管灌注0.1 mol/L的PBS缓冲液(pH 7.4)50 ml以冲去血液,再灌注含4%的多聚甲醛的PBS缓冲液500 ml固定,取肺置于上述固定液中后固定3 h,在转入含30%蔗糖的PBS中,4℃过夜,作冰冻切片,切片与NADPH-黄递酶底物反应液孵育60 min(反应液为含0.3%Triton X-100、0.5 mg/mlNBT及1 mg/ml β-NADPII的0.1 mol/L的PBS),冲洗晾干,二甲苯透明,封片,光镜下观察,NADPIId阳性细胞为蓝色。(6)肝和肺组织的病理学:10%的甲醛固定肝或肺组织,石蜡包埋,HE染色,光镜下观察其病理变化。
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血细胞涂片瑞氏染色法缓冲液的选择
目的 探讨血细胞涂片瑞氏染色所用缓冲液的优选.方法 在室温(25℃)下分别用pH值为5.0、5.5、6.0、6.5、7.0的混合磷酸盐(KH2PO4-Na2HPO4)、乙酸盐(HAc-NaAc)缓冲液稀释的瑞氏染液对血涂片进行染色,并观察染色效果.结果 在pH 6.0、6.5时,血细胞着染色泽符合ICSH质量标准,尤以pH 6.0时染色效果佳,且乙酸盐缓冲液优于混合磷酸盐缓冲液.结论 血细胞涂片以pH 6.0~6.5的乙酸盐缓冲液稀释的瑞氏染液染色效果优良.
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CA-1500血凝仪测定纤维蛋白原缓冲液的研制及应用
本文自配Sysmex CA-1500全自动血凝仪测定纤维蛋白原含量的缓冲液,将其理化性质、精密度、准确度、缓冲能力与原装试剂进行对比分析,结果自配试剂与原装试剂理化性质一致,可以取代使用.现报道如下:
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不同抗凝剂和缓冲液放置时间对纤维蛋白原测定结果的影响
目的观察不同抗凝剂和缓冲液放置时间对纤维蛋白原测定结果的影响.方法同一份标本用做血液流变的肝素抗凝和做凝血象的草酸钠抗凝;同一份标本用当天的、放置一天的、放置两天的缓冲液做纤维蛋白原,观察纤维蛋白原的测定结果.结果两种抗凝剂对纤维蛋白原的测定结果的影响没有显著性差异;缓冲液放置时间对纤维蛋白原测定结果的影响有显著性差异 P<0.01.结论测定纤维蛋白原和血液流变可以用同一管血;每天要换新的缓冲液.
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一种快捷的 Warthin- Starry染色方法
临床上常用 Warthin- Starry染色方法来检测胃粘膜活检标本中的幽门螺杆菌,但该染色方法耗时较长,我们利用超声波组织处理仪改良此染色方法,缩短染色时间,结果可靠,快速方便.材料和方法 : 超声波处理仪为国产 PHT- 400型病理样品快速超声处理仪,水浴锅温度设置为 70℃.试剂配制醋酸缓冲液 (pH 3.6): 无水醋酸钠 1.64 g, 醋酸 2.5 ml, 蒸馏水 200 ml; 1% 硝酸银溶液 : 硝酸银 0.5 g, 醋酸缓冲液 50 ml; 2% 对苯二酚溶液 : 1, 4- 对苯二酚 200 mg, 醋酸缓冲液 10 ml; 2% 明胶溶液 : 明胶 1 g, 醋酸缓冲液 50 ml, 加温溶解 ; 显色液 : 2% 明胶溶液 20 ml, 2% 对苯二酚溶液 3.5 ml, 1% 硝酸银溶液 1.5 ml, 显色前混合.操作方法 : (1) 胃粘膜活检标本及手术切除标本,常规石蜡切片 4 μ m, 90℃烤片 10~ 15 min; (2)切片脱蜡至水化,醋酸缓冲液洗 ; (3)加入硝酸银溶液,超声波处理 10 min, 70℃ ;(4)倒掉硝酸银溶液,加入显色液,超声波处理 2~ 3 min, 70℃ ; (5) 60℃水快速洗 ;(6)醋酸缓冲液洗 ;(7)常规脱水,透明,封片 .
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重症监护室患者连续性肾脏替代治疗中应用不同缓冲液的利与弊
重症监护室(ICU)患者通常需行连续性肾脏替代治疗(CRRT).CRRT过程中,不同类型的缓冲液可能对水电解质酸碱平衡及临床预后产生不同的影响.本文拟对乳酸盐、碳酸氢盐及枸橼酸缓冲液的利弊,在不同危重情形下如何选择这些缓冲液做一综述.
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聚合酶链反应快速检测念珠菌属
病原真菌因具有特殊的细胞壁结构,故聚合酶链反应 (PCR)检测方法自建立以来一直需要经过反复的真菌破壁和 DNA抽提过程才能获取提纯的 DNA,以进行下一步的 PCR检测 [1- 3]。近来有学者已使用基因释放剂、 CTAB及异硫氰酸胍等 [4- 6]对真菌菌株或临床标本进行前期处理,然后进行 PCR检测,但这仍需要配制复杂的原生质体形成缓冲液、原生质体裂解缓冲液 [6]等,或者高额购买商品化的基因释放剂 [4,5],这不仅需要较高的技术要求、较大的实验成本、经过一定训练的技术人员,还要历经较长的实验时间,严重限制了真菌病 PCR检测方法在临床的应用和普及。因此我们以念珠菌属作为突破口,对其破壁—破膜—释放 DNA系列程序的条件及相应的 PCR扩增体系作了反复研究,终获得了一种简便、快速的 PCR检测方法,现介绍如下。
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关于滴眼用利福平含量测定中所遇重要问题的探讨
目的:比较用乙腈和所附缓冲液溶解测定滴眼用利福平含量所得的结果.方法:分别用乙腈和所附缓冲液溶解利福平片,用HPLC法测定含量.结果:用乙腈溶解,含量合格;但用所附缓冲液溶解,含量不合格.结论:不能用乙腈替代缓冲液测定利福平滴眼液的含量.
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磷酸盐缓冲液能提高陈旧组织的切片质量
病理陈旧标本及陈旧组织蜡块通过磷酸盐缓冲液处理后,与对照组切片染色比较,显著提高了切片的染色效果.方法简单,操作方便,实用性强.
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低浓度铬天青S测铝降低试剂空白吸光值
<生活饮用水卫生规范>铬天青分光光度法测铝时,试剂空白的颜色很深,以水为参比,试剂空白的吸光值多在0.2以上,肉眼几乎无法判断标准系列的色差[1].我们在工作中通过降低铝天青的浓度,用10%乙酸铵代替乙二铵-盐酸缓冲液,显著降低了试剂空白的吸光值,肉眼就能明显地区分标准系列的色差,且铝含量在0~0.2mg/L范围内与吸光值线性相关,回归方程:A=M=11.816A+0.021,r=0.9995.现报告如下.
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二氧化硫配套试剂在工作场所空气检测中的应用
二氧化硫是常见的硫,无色气体,有强烈刺激性气味,是大气主要污染物之一.二氧化硫具有酸性,易被湿润的黏膜表面吸收生成亚硫酸、硫酸.对眼及呼吸道黏膜有强烈的刺激作用.大量吸入可引起肺水肿、喉水肿、声带痉挛而致窒息.所以国家对工作场所中二氧化硫的职业限值有严格的规定.目前国内检测空气中二氧化硫的方法主要有自动分析仪法、离子色谱法、原子吸收光谱法和分光光度法.而分光光度法又有四氯汞钾-盐酸副玫瑰苯胺分光光度法、甲醛缓冲液-盐酸副玫瑰苯胺分光光度法和二苯碳酰二肼分光光度法3种方法[1-7].
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苦豆籽胶囊的含量测定
苦豆籽系槐科植物苦豆子(Sophra alopecaroides L)的成熟种子.从苦豆籽中分离得到了20余种生物碱,具有广泛的生理活性,药用价值很高.苦豆子总生物碱的含量测定有重量法、酸碱滴定法等,因苦豆子中生物碱结构多属于喹啉联啶类衍生物,可在pH 7.6的缓冲液中与溴麝香草酚蓝形成离子对,经氯仿提取后于420nm进行比色测定.我们采用这种酸性染料分光光度法进行了苦豆籽胶囊中总生物碱的含量测定,为其质量标准的测定提供了依据.
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一阶导数光谱法测定利巴韦林喷鼻剂的含量
利巴韦林喷鼻剂为我院医院制剂。在小儿流感、一般性感冒及小儿腺病毒肺炎的预防和治疗中疗效确定[1]。为进一步提高疗效,减少对鼻粘膜的损伤该制剂采用新型高分子材料卡波普(Carbopol)及苯扎溴胺作为辅料[2,3]。本文采用在碱性条件下,一阶导数光谱法测定该制剂中利巴韦林的含量。现将方法报告如下。1 处方 利巴韦林(温州市第三制药厂,980824),卡波普934p(符合药用标准,下同),5%苯扎溴胺,氯化钠,氢氧化钠,pH 11.0缓冲液(参见中国药典95版)。
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阴道炎患者常见病原感染情况分析
阴道炎作为妇女常见病,常见的有念珠菌性阴道炎、滴虫性阴道炎、细菌性阴道病(BV)等;其中BV由于以往缺乏简便可靠的实验诊断手段,对临床治疗带来困难.为了解上述三种常见阴道炎在妇女中的发病情况,现将有关资料分析报道如下:1 资料及方法1.1 一般资料 2000年4~10月来我院就诊,临床诊断为阴道炎,白带常规检查清洁度为Ⅲ~Ⅳ度的1479例患者,并且患者在24小时内未曾用药.1.2 取材用窥阴器暴露宫颈及阴道,用消毒棉签取患者阴道分泌物于适量生理盐水中作念珠菌、滴虫检查;用专用棉签取阴道分泌物直接放于试剂盒随带的缓冲液小管中,作细菌性阴道病检测.
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介绍一种温水清洗脱水机的方法
全自动组织脱水机的使用为病理科常规工作带来了诸多便利,如满足大小标本分开处理的要求、提高不同组织的脱水效果等。但因其长期工作于中性福尔马林缓冲液及醇类脱水剂的环境中,极易产生磷酸盐结晶和脂肪滴等物质吸附在脱水机处理槽及管道中,而这些沉积物如果未及时清理,不仅影响脱水机处理效力,也较易对机器本身造成损害。因此,除了日常组织处理程序结束后或更换脱水液时常规清洗机器外,仍需在一定时间内对机器管道及处理槽进行清洗保养。本文就本科室使用的樱花Tissue-Tek VIP全自动组织脱水机,采用温水清洗的方法介绍如下。
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柠檬酸盐和EDTA缓冲液对弥漫性大B细胞淋巴瘤Ki-67和bcl-2抗原修复的比较
目的探讨柠檬酸盐和EDTA缓冲液对弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphomas,DLBCL)中Ki-67和bcl-2抗原修复的比较.方法运用高压锅热抗原修复法,选择柠檬酸盐和EDTA两种缓冲液同时进行抗原修复,比较了78例弥漫性大B细胞淋巴瘤Ki-67和43例DLBCL bcl-2的免疫组化染色应用效果.结果免疫组化染色采用EDTA与柠檬酸盐缓冲液相比,Ki-67指数78例中有76例明显提高,两者差异有统计学意义(P<0.01);bcl-2染色43例中有13例表达明显提高,两者差异有统计学意义(P<0.01).结论在实际免疫组化染色中,EDTA缓冲液较柠檬酸盐缓冲液能极大地提高弥漫性大B细胞淋巴瘤的Ki-67和bcl-2抗原的表达.