首页 > 文献资料
-
枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液冲洗对小鼠急性角膜化学伤眼表的保护作用
背景 角膜化学性烧伤后即刻进行眼部冲洗是防止化学性物质进一步损伤眼组织的关键步骤,而理想的冲洗液才能有效地中和化学物质,改善患眼的预后. 目的 评价自制的枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液、枸橼酸-磷酸氢二钠-氯化钾缓冲液对小鼠急性角膜酸、碱烧伤的治疗效果. 方法 配制pH值为7.4的枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(缓冲液1)和枸橼酸-磷酸氢二钠-氯化钾缓冲液(缓冲液2).采用计算机取随机数方法将120只6~8周龄清洁级雄性C57小鼠随机分为酸烧伤模型组和碱烧伤模型组,分别用1 mol/L硫酸和0.15 mol/L氢氧化钠滤纸贴附于中央角膜制备急性角膜酸、碱烧伤模型,造模后即刻按照亚分组分别用40 ml缓冲液1、自来水、缓冲液2进行冲洗,未冲洗的模型鼠作为对照.分别于造模后和冲洗后3、7、14d在裂隙灯显微镜下按照角膜混浊程度进行评分,并观察各组小鼠角膜上皮荧光素染色阳性率、角膜新生血管和角膜溃疡发生率.结果 角膜酸烧伤后3、7和14 d,缓冲液1冲洗组、自来水冲洗组和缓冲液2冲洗组角膜混浊评分为1分的眼数均明显多于不冲洗组,差异均有统计学意义(均P<0.01);角膜酸烧伤后3d,缓冲液1冲洗组角膜混浊度为1分的眼数明显多于自来水冲洗组和缓冲液2冲洗组,差异均有统计学意义(x2=11.000,P=0.001;x2 =4.000,P=0.046);角膜酸烧伤后7d,缓冲液1冲洗组角膜混浊度为1分的眼数明显多于自来水冲洗组,差异具有统计学意义(X2 =6.000,P=0.014);角膜酸烧伤后14d,缓冲液1冲洗组、自来水冲洗组和缓冲液2冲洗组不同角膜混浊评分的眼数差异均无统计学意义(均P>0.05).碱烧伤后3、7、14 d,缓冲液1冲洗组、自来水冲洗组和缓冲液2冲洗组角膜混浊度评分为1分和2分的眼数均明显多于不冲洗组,差异均有统计学意义(均P<0.01).角膜酸烧伤后7d,缓冲液1冲洗组、自来水冲洗组和缓冲液2冲洗组角膜溃疡发生率分别为7%、27%和13%,均明显低于不冲洗组的73%,差异均有统计学意义(P=0.000、0.027、0.003);角膜碱烧伤后3、7、14 d角膜溃疡发生率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05).角膜酸烧伤后14 d,不冲洗组角膜新生血管发生率为50%,而缓冲液1冲洗组、自来水冲洗组和缓冲液2冲洗组小鼠未见角膜新生血管.角膜碱烧伤后各组小鼠在各时间点均未发现角膜新生血管. 结论 pH值为7.4的枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液对急性角膜酸、碱烧伤进行即刻冲洗均有较好的治疗效果,冲洗液中是否添加氯化钾对预后无明显影响.
-
DOT-BLOTTING在离子交换层析纯化SO-Rb50瘤细胞抗原中的应用
本实验采用Dot-blotting检测抗RB单克隆抗体相应的抗原,帮助选择及决定离子交换层析的缓冲液条件及洗脱策略,报告如下.
-
风湿性心脏病肺动脉高压患者肺组织肾上腺髓质素受体mRNA的变化
肾上腺髓质素是一种内源性神经肽,它参与了肺动脉高压的形成[1],其作用机制之一是通过特异性受体发挥扩血管作用。我们采用印迹杂交(Northern blot)法检测风湿性心病肺动脉高压患者肺组织肾上腺髓质素受体(AM-R)mRNA的表达,以期探讨肾上腺髓质素在肺动脉高压中的作用机制。 一、材料和方法 1.标本来源:风湿性心脏病患者右肺组织18例,其中男11例,女7例,平均年龄31.7岁。根据平均肺动脉压分为3组[2],每组6例:平均肺动脉压<2.80 kPa(1 kPa=7.5 mm Hg)为肺动脉压正常组;2.80~5.33 kPa为肺动脉高压组;>5.33 kPa为严重肺动脉高压组。正常对照组为无心肺疾病的患者右肺组织5例。 2.探针:人AM-R cDNA探针 (美国 Montuenga 博士惠赠)。 3.方法:(1)肺组织总RNA提取:采用异硫氰酸胍一步法。(2)RNA甲醛变性:取20 μg RN A,加入1×电泳缓冲液、体积分数为17.5%甲醛和50.0%甲酰胺,65 ℃水浴20 min,冰浴2 min。(3)RNA电泳:在质量分数为1%甲醛凝胶、1×电泳缓冲液中80 V预电泳5 min,65 V恒压电泳2 h左右。(4)转膜:采用真空转印仪,20×标准柠檬酸盐中负压400 MPa持续转印0.5 h。(5)Northern blot分析:将尼龙膜放入杂交炉中,55 ℃,转速12 r/min,预杂交4~6 h。再将用α-32P 3-磷酸核糖腺嘌啉标记好的AM-R cDNA探针,加入杂交管中,相同条件下杂交24~36 h。(6)杂交信号的密度扫描:放射自显影后,X光片经显影、定影、水洗、室温下凉干用计算机图像分析仪扫描分析,将各点杂交信号做面积和灰度测定,然后用同一样品3-磷酸甘油醛脱氢酶的杂交信号值做校正,即:AM-R mRNA(%) = (AM-R杂交信号面积×AM-R杂交信号灰度值)/(3-磷酸甘油醛脱氢酶杂交信号面积×杂交信号灰度值)×100%。 4.统计学方法:数据以均数±标准差(****±s)表示,进行方差分析。 二、结果 严重肺动脉高压组、肺动脉高压组、肺动脉压正常组肺组织AM-R mRNA分别为(76.00±1 1.50)%、(97.26±5.79)%、(105.41±12.24)%,合并肺动脉高压组 AM-R mRNA表达明显低于正常对照组(119.31±16.29)%(P<0.05),肺动脉压正常组 AM-R mRNA表达与正常对照组差异无显著性(P>0.05),严重肺动脉高压组AM-R mRN A表达明显低于肺动脉压正常组(P<0.05)。
-
高渗盐液对豚鼠离体耳蜗外毛细胞内游离Ca2+浓度的影响
细胞内游离钙浓度的改变是细胞生理功能的重要物质基础,也是多种受体被激活后信息传递过程的中心环节[1]。高渗盐液对离体外毛细胞(OHC)的影响研究较多,但尚无定论。本文采用粘附式的细胞仪(ACAS 570,美国Meridian公司生产)对1.8%NaCl引起的豚鼠离体耳蜗外毛细胞内游离Ca2+浓度的变化进行定量分析,报告如下:1 材料和方法1.1 药物试剂与仪器用去离子水配制1.8%NaCl;胶原酶Ⅳ型(Sigma公司生产,浓度为0.5g/L,D-Hank's溶液配制);伴刀豆球蛋白(ConA)(浓度为0.1mg/ml三蒸水,Sigma公司产品);HEPES缓冲液(10 mMol/L生理盐水);Fluo-3/ml(浓度为10μmol/L HEPES缓冲液(美国Molecular Probes.Inc产品),主要仪器:570型粘附式细胞仪(ACAS-570),美国Meridian公司产品。
-
<中国药典>2000年版诺氟沙星胶囊溶出度检查中存在的问题
诺氟沙星属氟喹诺酮类抗菌药,主要用于治疗泌尿系统及胃肠道细菌感染.诺氟沙星的溶出度与疗效关系密切,近年来有文章报道其溶出度测定方法[1~3],故<中国药典>2000年版新增了溶出度检查[4].新版药典中采用的溶媒是pH4.0醋酸缓冲液(取冰醋酸286 ml与50%氢氧化钠溶液1 ml,置1000 ml量瓶中,加蒸馏水至900 ml,振摇,用冰醋酸或50%氢氧化钠调节pH值至4.0,再用蒸馏水稀释至刻度),而笔者在实际检验工作中发现该溶媒的配制存在很多问题.首先,取冰醋酸286 ml,加50%氢氧化钠溶液仅1 ml,加水稀释至900 ml后,溶液酸度太大,耗用大量50%氢氧化钠溶液仍很难调至pH4.0,而且冰醋酸浓度太大,胶囊一放入则马上破壳溶解,所以,在此介质中测溶出度没有实际生理意义,也不能正确评价药品质量.其次,取冰醋酸286 ml配制1000 ml缓冲液,浪费太大.现将该缓冲液的配制方法做以下改进,经反复实践,结果令人满意.
-
免疫组织化学抗原修复液PBS与EDTA的比较
免疫组织化学也称免疫细胞化学,是用标记抗体寻找组织细胞抗原的方法,来检测细胞中化学成分的科学技术.由于免疫组织化学技术特异性强,敏感性高,操作简单,设备要求简单,且该技术在组织中定位性能好,因此,常常应用于临床病理诊断及科学研究.影响免疫组织化学技术的因素有许多,其中抗原修复技术是关键步骤.本研究比较抗原修复过程中修复液柠檬酸盐缓冲液与EDTA缓冲液的使用,旨在优化抗原修复过程.
-
利福平滴眼液质量标准的探讨
利福平滴眼液是常用的眼科用药,规格有"滴丸加缓冲液"、"溶液片或颗粒加缓冲液".2003年初,该品种的质量标准从地方标准上升为国家标准,收载于<国家药品标准>(化学药品地方标准上升国家标准)第十一册[1],其中鉴别系用紫外分光光度法对供试品进行光谱扫描,要求在236nm、255nm、334nm、474nm波长处应有大吸收,但我们按现行质量标准检验,安徽某药厂生产的规格为颗粒加缓冲液的利福平滴眼液时,供试品在236nm处无大吸收,与检验标准不符.为此,我们做了进一步的探究工作,发现质量标准有欠完善之处,故在此提出粗浅的看法,供大家在检验中借鉴参考.
-
腹膜透析液发展现状
目前临床应用的腹透液中高糖、高渗透透压、低PH值、乳酸盐等成分可对机体产生一些不良影响,是一种生物不相容性的腹透淮.近几年,研究的热点是从以下两方面改善腹透液的生物相容性;降低或代替葡萄糖浓度,改变渗透透剂,改变缓冲液类型.体外实验和动物实验研究表明,氨基酸、多肽腹透液和碳酸盐、丙酮酸腹透液等新型腹透液有着一定的应用前景,本文就此方面做一综述.
-
正交试验优选HPCE法测定人参中4种皂苷含量的方法研究
目的:建立胶束毛细管电泳(HPCE)法测定人参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd含量的方法.方法:采用正交试验L9(34),以缓冲液中表面活性剂的浓度、有机溶剂含量、缓冲盐浓度、缓冲液pH值为因素,4种人参皂苷分离度综合评分为评价指标,优选胶束毛细管电泳测定人参中4种人参皂苷含量的佳方法.结果:在优选的试验条件下,以pH为10,25 mmol/L的硼砂(含20 mmol/L去氧胆酸钠)与乙腈4:1 (V/V)混合配制作为电泳缓冲液,测定人参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd的含量.结论:30 min内4种人参皂苷可实现基线的完全分离,分离度好、灵敏度高且易于重复,适用于人参中皂苷类成分的含量测定与鉴别.
-
心肌细胞分离术
心肌细胞分离方法在不断得到改进.根据实验目的的不同,不断调整分离程序及方法[1~3].但要得到高产量,有持久(>2 h)兴奋性和收缩功能的心肌细胞,仍不是一件容易的事[3],尤其是我们在整体或离体心脏复制各种疾病模型(缺血,心肌肥大等),要在单心肌细胞功能方面研究其病理生理机制时.胶原酶消化分离出的心肌细胞在产量及活力方面受胶原酶, 缓冲液成分,pH,温度,灌流量及消化时间的影响[3,4].
-
诺氟沙星胶囊溶出度检查的介质选择
有报道[1]诺氟沙星胶囊在不同介质中的溶出度,其不同介质为0.1mol/L NaOH与pH4.0醋酸缓冲液.本文对诺氟沙星胶囊进行溶出度的介质的实验选择中,发现0.1mol/L NaOH作溶出度介质不合适.
-
硫酸庆大霉素微生物检定法缓冲液的改进
目的对硫酸庆大霉素的微生物检定法所用的缓冲液进行改进.方法与结果改用本文缓冲液2号,在不改变其他检定条件下,可获得直径符合要求且清晰的抑菌圈,测定结果符合微生物检定的要求.结论解决了该抗生素对试验菌的敏感度较低,抑菌圈直径难达到要求的问题
-
一种简易的滤气装置
随着细胞和组织培养技术的日益成熟,对其操作的要求也越来越严格。在一些原代培养中,如心肌细胞或血管平滑肌细胞或神经细胞等,要求从大体标本取材到分离细胞的全过程有氧气供应,也就是在缓冲液或培养基中通入氧气,以模拟体内生理环境(特殊的组织细胞或实验模型也可要求NO、CO、CO2等气体供给以制造特定的生物组织、细胞生活环境)。
-
MRSA-PBP2a单克隆抗体乳胶凝集检测法的建立
[目的]应用抗PBP2a单克隆抗体,以化学交联法致敏羧化聚苯乙烯乳胶,建立快速检测MRSA-PBP2a的乳胶凝集法.[方法]以辛酸-硫酸铵法纯化PBP2a单克隆抗体,将纯化后单克隆抗体和羧化乳胶经碳化二亚胺(EDC)共价偶联,并对偶联条件(偶联抗体浓度、乳胶浓度、偶联时间和偶联缓冲液)进行探索和优化,建立检测PBP2a的乳胶凝集法.[结果]140 ms/L的抗体浓度与15 g/L的羧化聚苯乙烯乳胶,在pH 5.8缓冲液中偶联8 h后有较好的凝集效果和偶联效率,所建立的乳胶凝集法敏感性和特异性良好.[结论]初步建立了检测PBP2a的胶乳凝集法,为研制MRSA快速鉴定试剂盒奠定了良好的基础.
-
Array-360型全自动特定蛋白分析仪缓冲液、稀释液的研制及应用
Array-360型全自动特定蛋白分析仪是美国Backman公司生产的速率散射免疫浊度测定系统,该仪器具有操作简单,准确度高及重复性好等优点,能检测IgG、IgA、IgM、C3、C4、AsO、RF等30多种特定蛋白,唯一不足是其配套试剂价格较贵.为了节约检测成本,我们经过反复试验与对比分析,研制出适用于该机的配套缓冲液和稀释液,经临床试用,各项指标均与进口原装试剂一致,现报告如下.
-
Roche电化学发光免疫分析系统发光缓冲液和清洗液配制及应用
目的研制Roche 1010/2010电化学发光免疫分析系统发光缓冲液和清洗液.方法用自配的发光缓冲液和清洗液代替原装ProCell和CleanCell液,利用Roche原装试剂和定标液在Roche 1010/2010仪器上检测相同标本,考察准确度、精密度、灵敏度和检测大范围并与原装试剂对比分析.结果分别测定代表几种不同方法的7个项目,并与原装试剂比较,二者结果差异无统计学意义(P>0.05),相关系数(r)均>0.98,日内、日间重复性二者均接近,自配试剂放置12个月后,与原装试剂差异无统计学意义(P>0.05),r均>0.98.结论自制试剂与原装试剂检测结果差异无统计学意义,适合临床应用.
-
乙型肝炎患者外周血单个核细胞中乙肝病毒前S/S基因片段的检测
1. 资料与方法:(1)研究对象:19例慢性乙型肝炎患者均符合1995年第6次全国病毒性肝炎会议诊断标准,为瑞金医院1998年门诊及住院患者,年龄12~46岁,平均32.79岁,女4例,男15例。同时收集PBMC和配对血清,并记录病程及ALT浓度。(2)分离PBMC及提取DNA:抽取肝素抗凝血7ml,用比重1.077的聚蔗糖-泛影葡胺液分离淋巴细胞,2500r/min,15min,吸出淋巴细胞,用HanKs液将细胞清洗5次,以去除可能残留的血浆DNA,分别收集第5次洗涤液(500μl)及细胞,提取PBMC DNA,DNA溶于500μl TE缓冲液。(3)血清及洗液中DNA的抽提:从500μl PBMC洗液及100μl血清中提取DNA后,分别溶于30μl及20μl TE缓冲液。
-
滴鼻用安乃近溶液片的稳定性考察
滴鼻用安乃近溶液片是国内新型小儿解热镇痛制剂,由安乃近溶液片和缓冲液组成,缓冲液为pH值5.0~6.5的磷酸盐溶液,并含有吸收促进剂及鼻粘膜保护剂等成分,是国家四类新药.该药的给药途径为鼻粘膜给药,具有给药方便、用量小、安全、婴幼儿易接受、吸收迅速、起效快、退热效果确切等特点.为考查这一特殊剂型药品在有效期内的稳定性,我们于1998~2000年对三个批号的滴鼻用安乃近溶液片进行了室温留样考察.含量测定用紫外分光光度法,降解产物检查用高效液相色谱法[1-3].
-
IMx全自动免疫发光仪2号缓冲液的配制与死腔试剂的利用
雅培公司的IMx全自动免疫发光仪在我国有较多应用,它综合了微粒子酶免疫分析(MEIA)、离子捕捉免疫分析(ICIA)、荧光偏振免疫分析(FPIA)3种方法,可对肝炎、肿瘤、生殖功能、甲状腺功能、新陈代谢、优生优育、药物浓度等的一些血清学指标进行检测.通过对IMx的使用,总结经验报道如下.
-
血片和骨髓片退色后的处理
在临床血液学的教学过程中,血片和骨髓片需反复使用.由于长期保存,血片和骨髓片经二甲苯多次脱油后会造成细胞及其背景要么出现过多的蓝色;要么出现核细胞颜色太浅;若用瑞氏法复染,将使细胞本身及其背景呈深蓝色,细胞结构不清,影响教学质量.我们经反复试验,筛选出用pH 3.6乙酸盐缓冲液浸泡处理的方法,经长期使用,效果满意,现介绍如下.