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胰高糖素样肽GLP-1(7-36)NH2对β细胞内游离钙和胰岛素分泌的影响
GLP-1(7-36)NH2是“肠-胰岛轴”中重要的调节胰岛素释放的激素,我们采用新生大鼠胰岛细胞单层培养的方法,探讨了GLP-1(7-36)NH2对胰岛素分泌的作用,并以Fluo-3为探针,用粘附式细胞仪,研究了它对胰岛β细胞内游离Ca2+的作用。 一、材料与方法 1.胰岛细胞培养:出生2~3d的Wistar大鼠,无菌取出胰腺,Hanks液漂洗,剪碎,加入0.2%胰蛋白酶和2g/L V型胶原酶(Sigma公司产品),置38℃水浴中反复振荡消化5~8min,用冰冷的Hanks液终止消化,及时分离消化物,离心收集细胞,加入含15%小牛血清的RPMI-1640培养基[1]。调整细胞浓度,接种于75mm3细胞培养瓶,置37℃、5% CO2和95%空气的培养箱中培养16h后,转入24孔培养板中,同时取一定量的细胞悬液接种于改良的Petri皿中(细胞浓度均为1×109个/L,记为0 d),培养48h后,用新配制的碘乙酸2.5mg/L处理3~5h,再换无碘乙酸培养液继续培养,每两天换培养液一次,培养7d后,选生长良好的细胞用于实验[1]。
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全国第六届组织学与胚胎学青年学术研讨会论文摘要(续)
73.NO诱导血管平滑肌细胞凋亡原癌基因调控的初步研究田雪梅李进第一军医大学组织学胚胎学教研室广州 510515 血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖引起的细胞数量过度增加是动脉粥样硬化发生发展的一个主要病理特征,而VSMC凋亡又在其中起着重要作用.引起细胞凋亡的因素有多种,近期发现,广泛存在于心血管系统的一氧化氮(NO)除已知的多种生物作用外,还具有诱导巨噬细胞、VSMC凋亡的功能.但是,NO诱导VSMC凋亡的调控机制尚不十分明确.而bcl-2、p53、bax、c-myc、fas等都是参与细胞凋亡调控的原癌基因.鉴此,本实验探讨NO诱导VSMC凋亡与bcl-2、p53、bax之间的关系.方法:采用贴块法培养大鼠主动脉VSMC,3~8代细胞用于实验.以亚硝基乙酰青霉胺(SNAP)作为NO供体.构建逆转录病毒载体,将bcl-2基因转入VSMC,使VSMC中bcl-2蛋白过量表达,通过原位末端标记和流式细胞术检测VSMC在SNAP作用下的凋亡.并采用免疫荧光染色,借助粘附式细胞仪(ACAS507)检测细胞中bcl-2、p53、bax原癌蛋白表达的变化.结果:通过转染bcl-2基因能使VSMC中bcl-2蛋白过量表达,且能使SNAP作用下VSMC的凋亡率减少,而细胞中p53、bax蛋白表达在转染和未转染bcl-2的VSMC中无明显差异.结论:bcl-2过量表达阻止NO诱导的VSMC凋亡,但此作用不是通过减少细胞中p53、bax蛋白的表达,而可能是通过增加Bcl-2/bax比例的方式实现的.
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寻常型银屑病受累表皮细胞在增殖与终末分化中DNA量的变化
我们已应用吖啶橙标记组织切片细胞DNA通过粘附式细胞仪(ACAS570)测试了正常人表皮细胞DNA在各层中的变化[1],现采用同样的方法对银屑病受累表皮各层细胞DNA含量、浓度、分布范围等作了初步的测试,试图揭示银屑病表皮细胞在增殖分化各阶段中DNA的异常变化规律.
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高渗盐液对豚鼠离体耳蜗外毛细胞内游离Ca2+浓度的影响
细胞内游离钙浓度的改变是细胞生理功能的重要物质基础,也是多种受体被激活后信息传递过程的中心环节[1]。高渗盐液对离体外毛细胞(OHC)的影响研究较多,但尚无定论。本文采用粘附式的细胞仪(ACAS 570,美国Meridian公司生产)对1.8%NaCl引起的豚鼠离体耳蜗外毛细胞内游离Ca2+浓度的变化进行定量分析,报告如下:1 材料和方法1.1 药物试剂与仪器用去离子水配制1.8%NaCl;胶原酶Ⅳ型(Sigma公司生产,浓度为0.5g/L,D-Hank's溶液配制);伴刀豆球蛋白(ConA)(浓度为0.1mg/ml三蒸水,Sigma公司产品);HEPES缓冲液(10 mMol/L生理盐水);Fluo-3/ml(浓度为10μmol/L HEPES缓冲液(美国Molecular Probes.Inc产品),主要仪器:570型粘附式细胞仪(ACAS-570),美国Meridian公司产品。