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小鼠外周血网织红细胞微核吖啶橙染色法的研究
微核试验是遗传毒理学中一个重要的监测指标,但现采用的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核Giemsa染色法,染色特异性差、伪核难辨,不能进行连续动态的观察.近年来日本的Hayashi[1]报道了一种小鼠外周血网织红细胞微核吖啶橙染色新方法.该方法染色特异性强,对评价化学物质的诱变性有较大的实用价值.为此,我们在建立该方法的基础上,对染色步骤进行了改进,使之更加简便和完善.以6种染色体诱变剂探讨了不同年龄,不同性别小鼠外周血网织红细胞微核的变化,微核出现高峰的时间.为该方法的推广应用提供依据.
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家蝇幼虫血细胞荧光染色法的形态观察
目的 用荧光染色法结合相差显微镜观察家蝇3龄幼虫血细胞的形态、分类.方法 应用吖啶橙和碘化丙啶对家蝇3龄幼虫血细胞进行染色,荧光显微镜结合相差显微镜观察血细胞形态特征并进行分类.结果 (1)家蝇3龄幼虫血细胞可分为原血胞、浆血胞、粒血胞、珠血胞、类绛血胞5类.其中浆血胞又分为大核浆血胞和小核浆血胞2种.(2)家蝇幼虫原血胞在相差显微镜下容易辨认,通过荧光染色后特征不显著.(3)家蝇幼虫粒血胞与大核浆血胞、珠血胞与小核浆血胞在相差显微镜下容易混淆,但在荧光显微镜下很好区分.结论 用荧光染色法结合相差显微镜能揭示未知的昆虫血细胞特征,并能正确地将家蝇3龄幼虫血细胞分为5类.
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在线HPLC-DAD-MSn-DNA-AO-FLD系统的建立及紫草中DNA结合活性化合物的研究
本文首次以吖啶橙为荧光探针建立了在线HPLC-DAD-MSn-DNA-AO-FLD检测系统并应用于天然药物的活性成分研究中,该系统可以同时给出所测天然药物的指纹图谱、各色谱峰的紫外光谱、总离子流图,多级高分辨MS数据以及各化合物与DNA结合的活性图谱,能够对天然药物进行高效分离、结构鉴定和活性检测以及构效、量效关系和作用机理研究.本文采用该系统对紫草正己烷提取物进行了快速分离、结构鉴定和活性研究,证明5个萘醌类化合物具有明显的DNA结合活性;构效和量效关系研究表明,紫草萘醌化合物的母核能嵌插在DNA碱基对中,阻断DNA的复制,侧链上的羟基酰化能够促进与DNA结合,对活性有较大的影响.本文为天然药物中发现抗肿瘤药物提供了简便、快速、精密度高、稳定性好的研究方法.
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吖啶橙-溴酸钾-萘酚光谱性质及其在痕量尿酚测定中的应用研究
目的 研究吖啶橙-溴酸钾-萘酚体系的光谱性质及其共振光散射增强机制,建立共振光散射法测定人尿中痕量萘酚新方法.方法在稀硫酸介质中,萘酚与溴酸钾、吖啶橙(acridine orange,AO)发生反应形成聚集离子,导致共振光散射(resonance light scattering,RLS)显著增强,产生新的RLS光谱.研究了反应体系的吸收、荧光、RIS光谱特征,适宜的反应条件.结果 α-萘酚和β-萘酚大的RLS峰均位于468.0 nm处,线性范围分别为1.41×10-7～2.80×10-5 mol/L,1.28×10-7～3.00×10-5 mol/L,相关系数分别为0.999 6,0.999 3,检出限分别为0.422×10-7 mol/L和0.385×10-7 mol/L.RSD为4.8%～7.3%,平均回收率为90.70%(n=6).结论 该方法灵敏度高.便捷,成本低,可用于检测人尿中的痕量a-萘酚,结果 满意.
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人附红细胞体感染实验诊断方法的建立
目的 比较瑞氏-吉姆萨染色、吖啶橙荧光染色以及聚合酶链反应(PCR)对人附红细胞体的检出率,探索可靠的检测人附红细胞体病的方法.方法 选取体检健康人50名,同时从白血病及肾移植患者中分别选取50例,使用瑞氏-吉姆萨染色法以及吖啶橙荧光染色法检测附红体的感染率,同时选取1例2种方法检测结果均为强阳性的标本,根据GenBank中已收录的猪、牛、羊、猫、鼠等5种附红细胞体的16S rRNA基因序列设计一对特异性引物,初步建立人附红体病的分子诊断方法.结果 体检健康人群中瑞氏-吉姆萨染色法以及吖啶橙荧光染色法检出率分别为32％和24％,白血病组的检出率分别为94％和62％,肾移植组的检出率分别为88％和68％,同时初步建立了人附红细胞体病的分子诊断方法,但需进一步研究将其完善.结论 吖啶橙荧光染色法适合临床作为人附红细胞体病的临床检测方法.
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吖啶橙染色法用于湖北钉螺血淋巴细胞的观察
将湖北钉螺软体组织挤压后获取血淋巴液制成涂片,采用荧光染料吖啶橙染色,荧光显微镜下观察血淋巴细胞.结果可见12种形态的血淋巴细胞:红色多浆型无颗粒圆形淋巴细胞、红色多浆型有颗粒圆形淋巴细胞、红色少浆型无颗粒圆形淋巴细胞、红色少浆型有颗粒圆形淋巴细胞、绿色多浆型无颗粒圆形淋巴细胞、绿色多浆型有颗粒圆形淋巴细胞、绿色少浆型无颗粒圆形淋巴细胞、绿色少浆型有颗粒圆形淋巴细胞、多浆伸展型淋巴细胞、少浆伸展型淋巴细胞、红色胞质梭形淋巴细胞、绿色胞质梭形淋巴细胞,表明该方法可用于湖北钉螺血淋巴细胞的染色,为探讨贝类免疫防御、研究灭螺药物或各种生物与理化因素对湖北钉螺血淋巴细胞的影响提供技术支持.
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硫酸皮肤素的分光光度法测定
建立了分光光度法测定硫酸皮肤素.在Britton-Robinson缓冲液(pH 6.1)中,硫酸皮肤素与吖啶橙形成离子缔合物,染料褪色,硫酸皮肤素浓度与体系在490nm处吸光度的降低(△D)成正比,在0.1～3.5μg/ml范围内符合朗伯-比尔定律.定量限为0.1μg/ml.
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吖啶橙-碘化丙啶染色法检测补体依赖的淋巴细胞毒活性
移植受者体内预存的循环抗体是诱发超急性排斥反应的主要原因,目前各实验室将淋巴细胞毒交叉配合试验作为术前筛选抗体的常规方法.补体依赖淋巴细胞毒活性(complement dependent cytotoxicity,CDC)检测的基本原理是将被检血清与淋巴细胞及补体共同温育,如果被检血清中含有相应的细胞毒抗体,则可以和淋巴细胞表面抗原特异性结合,激活补体,引起细胞膜破损,细胞死亡,细胞膜通透性增加,染料渗入细胞内,使死亡细胞染上颜色,根据着色细胞的数目,可以估计淋巴细胞毒的强度.
关键词： 补体依赖的淋巴细胞毒活性 吖啶橙 碘化丙啶 -
精子染色质完整性对IVF/ICSI临床结局的预测价值
目的:通过分析精子染色质完整性与体外受精胚胎移植(IVF-ET)、卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)结局之间的关系,探讨精子染色质完整性检测在辅助生殖技术(ART)中的预测价值. 方法:采用精子染色质结构分析试验(SCSA)方法检测187个ART周期中精子的染色质完整性,以精子DNA损伤指数(DFI)为参数,分为高DFI组(DFI≥30％)和低DFI组(DFI＜ 30％),两组中根据采用不同的体外受精方式分为IVF亚组和ICSI亚组.分别比较高DFI组、低DFI组中IVF亚组和ICSI亚组间受精率、卵裂率、D2天胚胎质量、D3天胚胎质量、临床妊娠率差异性. 结果:在高DFI组中,行ICSI治疗的夫妇临床妊娠率显著高于行IVF治疗的夫妇,具有统计学意义；在行IVF治疗的夫妇中,比较高DFI组与低DFI组的各临床结局,未见统计学差异；在行ICSI夫妇中,比较高DFI组与低DFI组的各临床结局,未见统计学差异. 结论:精子染色质完整性影响辅助生育技术的结局,在选择辅助生殖技术方案时,可作为常规精液检查的一个补充.
关键词： 精子 染色质完整性 辅助生育技术 精子染色质结构分析试验 吖啶橙 -
寻常型银屑病受累表皮细胞在增殖与终末分化中DNA量的变化
我们已应用吖啶橙标记组织切片细胞DNA通过粘附式细胞仪(ACAS570)测试了正常人表皮细胞DNA在各层中的变化[1],现采用同样的方法对银屑病受累表皮各层细胞DNA含量、浓度、分布范围等作了初步的测试,试图揭示银屑病表皮细胞在增殖分化各阶段中DNA的异常变化规律.
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吖啶橙分光光度法测定硫酸软骨素含量
目的建立一种测定硫酸软骨素含量的分光光度分析新方法.方法在pH 4.0的Britton-Robinson(B-R)缓冲溶液中,吖啶橙与硫酸软骨素发生相互作用生成生物超分子复合物.吖啶橙在492 nm处有一特征吸收峰,加入硫酸软骨素后,大吸收波长不变,但吸收峰强度降低.结果在佳条件下,溶液吸收度值的降低与硫酸软骨素浓度成线性关系,线性范围为0.04～3.00mg/L,表观摩尔吸光系数(ε)=6 600L/(mol·cm),工作曲线为△A=0.000 1+0.065 5 C(mg/L)(n=8,r=0.998).结论此法简单、准确、灵敏、选择性好.优化了结合反应的条件,建立了分光光度法测定硫酸软骨素的方法.
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采用TUNEL检测人精子凋亡及其初步应用
在不育、职业性毒物接触和吸烟男性均发现精子凋亡增多[1,2].目前,国外报道的精子凋亡检测方法主要有精子染色体结构检查(SCSA)、TdT介导缺口末端原位标记法(TUNEL)、吖啶橙染色(AOT)、彗星实验等[3].我们应用二氨基联苯胺(DAB)显色TUNEL方法检测精子凋亡,探讨其在精子凋亡临床和基础研究中的应用.
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乌司他丁对肠缺血-再灌注大鼠肠黏膜屏障的影响
目的:探讨蛋白酶抑制剂乌司他丁(Ulinastatin,UTI)对大鼠肠缺血-再灌注损伤后肠黏膜屏障功能的保护作用. 方法: 雄性Wistar大鼠夹闭肠系膜上动脉1 h,再灌注时间为1 h和2 h,随机分为对照组(A组)和治疗组(B组).B组于缺血后经颈静脉缓慢泵入UTI(5万单位/kg),A组给予等量等渗盐水,于各时间点检测内毒素(ET)、血浆D-乳酸、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD),并对肠系膜淋巴结、肝组织行荧光标记菌计数,在光镜下观察小肠病理组织学变化. 结果:A组各时间点内毒素、血浆D-乳酸、MDA和SOD均显著高于B组,肠系膜淋巴结、肝组织荧光标记菌检出数亦明显高于B组,光镜下观察小肠黏膜损伤呈进行性加重,A组损伤程度明显重于B组. 结论:乌司他丁能显著减少肠缺血-再灌注时氧自由基释放及ET移位、增强氧自由基清除,从而减轻肠黏膜屏障的损伤和肠通透性增高的程度.
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附红细胞体病瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法及PCR检测法的比较研究
目的比较瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法以及PCR法对附红细胞体的检出率,探索比较可靠的检测附红细胞体的方法.方法以瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法以及PCR法检测附红细胞体病的方法的建立为基础,对20例病例用四种方法进行检测,并比较其检出率.结果瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法以及PCR法的检出率分别为20%、30%、85%、80%,PCR与三种染色法的符合率分别为35%、50%、95%.结论吖啶橙及PCR法优于瑞氏及姬姆萨氏染色法.
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肺炎衣原体包涵体核酸组分衍化分析法的建立
吖啶橙(AO)染色可以作为肺炎衣原体(Cpn)包涵体的染色方法.它是一种快速检查 Cpn 感染的较好方法,有可能替代荧光单抗染色的功能,克服单抗染色时细胞结构显示不清的缺点,具有简捷、价廉和既能反映衣原体包涵体的形态和成份,又能反映包涵体不同时期 RNA 和 DNA 含量变化的独特优点.
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应用于激光扫描共聚焦显微镜的活细胞标本制作方法
目的介绍急性神经元贴壁的简易方法和应用激光扫描共聚焦显微镜观察药物作用后神经元内核酸代谢的方法.方法以双重荧光染料吖啶橙(Acridine orange,AO)进行染色.在36°C孵育箱内孵育15分钟.激光扫描共聚焦显微镜对染色后的细胞进行光束扫描,以观测细胞内核酸代谢变化的规律. 结果皮层神经元RNA有显著改变.结论本方法的建立可以成功地应用于激光扫描共聚焦显微镜对胞内核酸代谢变化的研究.
关键词： 激光扫描共聚焦显微镜 急性分离神经元 吖啶橙 RNA DNA -
共振光散射法测定痕量甲醛
目的:建立测定环境样品中微量甲醛的催化共振光散射新方法.方法:基于硫酸介质中,甲醛能催化溴酸钾氧化吖啶橙的反应,使其共振光散射强度减弱.采用单因素转换法优化反应条件;采用化学热力学方法研究催化反应的性能和机理.结果:新建方法测定甲醛的浓度线性范围为0.025～0.25μg/ml,检出限6.13×10-6 μg/ml.RSD为1.30%、0.24%,样品加标回收率为95.5%～96.2%.结论:新建方法简便快速,选择性好,用于环境水样、室内空气中甲醛的测定,结果满意.
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吖啶橙-罗丹明6G共振能量转移荧光猝灭法测定铅
目的 根据吖啶橙和罗丹明6G两分子间能够有效地发生荧光共振能量转移,建立一种检测铅离子的新方法.方法 在表面活性剂SDS的存在下,吖啶橙和罗丹明6G分子间发生荧光共振能量转移,使罗丹明6G的荧光强度增大;加入铅离子后能对AO-R6 G体系的荧光产生猝灭作用,其荧光猝灭程度随着铅离子浓度的增大而增强,据此建立了检测Pb2+的新方法.结果 当pb2+浓度为2.0 ×10-7mol/L ～ 3.0×10-6mol/L时,与荧光猝灭程度△F有良好的线性关系,线性回归方程为y=16.34x +42.79,相关系数(r) =0.998,检出限为6.06×10-8mol/L,相对标准偏差(RSD)为3.4％ ～5.3％,加标回收率为95.1％ ～96.5％.结论 本方法操作简便、灵敏,可用于实际水样中铅含量的测定.
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共振光散射法测定人尿中痕量萘酚
目的:建立共振光散射测定尿中痕量萘酚新方法.方法:在稀硫酸介质中,萘酚与溴酸钾、吖啶橙发生反应形成聚集离子,产生共振散射光谱,且导致共振光散射显著增强.结果:α-萘酚和β-萘酚大的共振光散射峰均为468.0 nm;线性范围分别是1.41×10-7～2.80×10-5～mol/L,1.28×10～3.00×10-5mol/L;相关系数分别为r1=0.9996,r2=0.9993,检出限分别为0.422×10-7mol/L和0.385×10-7～mol/L.将其用于测定人尿中痕量α-萘酚,相对标准偏差为4.8%～7.3%,平均回收率为95.7%.结论:新建方法灵敏、简单、快速,尿样测定结果满意.
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双波长催化动力学光度法测定食品中痕量钒
目的:建立用双波长催化动力学光度法测定痕量钒的新方法.方法:在硫酸介质中,利用钒催化溴酸钾氧化吖啶橙和酸性铬蓝K褪色反应,分别在476 nm和556nm处测量催化体系和非催化体系的吸光度的变化,用双波长催化光度法测定痕量钒.结果:测定钒的线性范围:0.00040～0.030 μg/ml.检出限为:8.8×10-11g/ml.结论:该法简单,灵敏度高,选择性好,可用于食品中痕量钒的测定.
