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胰高糖素样肽GLP-1(7-36)NH2对β细胞内游离钙和胰岛素分泌的影响
GLP-1(7-36)NH2是“肠-胰岛轴”中重要的调节胰岛素释放的激素,我们采用新生大鼠胰岛细胞单层培养的方法,探讨了GLP-1(7-36)NH2对胰岛素分泌的作用,并以Fluo-3为探针,用粘附式细胞仪,研究了它对胰岛β细胞内游离Ca2+的作用。 一、材料与方法 1.胰岛细胞培养:出生2~3d的Wistar大鼠,无菌取出胰腺,Hanks液漂洗,剪碎,加入0.2%胰蛋白酶和2g/L V型胶原酶(Sigma公司产品),置38℃水浴中反复振荡消化5~8min,用冰冷的Hanks液终止消化,及时分离消化物,离心收集细胞,加入含15%小牛血清的RPMI-1640培养基[1]。调整细胞浓度,接种于75mm3细胞培养瓶,置37℃、5% CO2和95%空气的培养箱中培养16h后,转入24孔培养板中,同时取一定量的细胞悬液接种于改良的Petri皿中(细胞浓度均为1×109个/L,记为0 d),培养48h后,用新配制的碘乙酸2.5mg/L处理3~5h,再换无碘乙酸培养液继续培养,每两天换培养液一次,培养7d后,选生长良好的细胞用于实验[1]。
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微重力培养提高大鼠胰岛冻存质量的研究
本研究应用三维组织细胞旋转培养系统(the rotary cell culture system, RCCS)对冻存前后的大鼠胰岛细胞进行三维微重力组织培养,以期能提高胰岛复苏率,从而为人类胰岛的建库、进行胰岛移植奠定基础.
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瘦素对体外培养大鼠胰岛细胞的分泌功能的影响
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微重力培养对大鼠胰岛细胞存活及形态的影响
我们应用微重力组织细胞旋转培养系统(RCCS)培养大鼠胰岛细胞,并观察其存活率及形态结构的变化.
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利培酮对体外培养大鼠胰岛细胞分泌功能的影响
随着非典型抗精神病药物(atypical antipsychotic dmgs,AAPDs)在临床上广泛应用,有关抗精神病药物引起血糖代谢障碍(包括糖耐量异常、新发糖尿病或原有糖尿病恶化、高渗性昏迷、糖尿病酮症酸中毒等)的报道不断出现,AAPDs对糖代谢的影响逐渐成为研究者所关注的问题.利培酮引起血糖代谢障碍的机理尚不清楚.胰岛素分泌缺陷和胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是发生糖尿病的两个重要环节.为了解利培酮对胰岛分泌胰岛素有无直接的影响,我们设计该实验观察利培酮对体外培养大鼠胰岛分泌功能的影响,以深入了解利培酮引起的血糖代谢障碍的机理.
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一种经济高效的SD大鼠胰岛细胞分离技术
目的 建立一种经济高效的大鼠胰岛细胞分离纯化方法,为胰腺的修复重建奠定实验基础.方法 成年雄性SD大鼠25只,体重230~380g,共进行5次实验,每5只大鼠一组进行消化和分离.采用医用复方氯化钠注射液(compound sodium chloride injection, CSCI)经胰总管灌注大鼠胰腺,0.5mg/mL V型胶原酶消化后,分别采用浓度为27.0%、23.0%、20.5%和11.0%的Ficoll 400形成不连续密度梯度介质,离心纯化胰岛细胞.双硫腙(dithizon, DTZ)染色行纯化前后胰岛细胞计数和纯度检测;荧光染料碘化丙啶(propidium iodide, PI)和二乙酸荧光素(fluorescein diacetate, FDA)储存液双染色鉴定胰岛细胞活性;RPMIl640培养基培养3d后,分别用浓度为2.8mmol/L的低糖和25.0mmol/L的高糖行葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测胰岛细胞功能.结果 5次实验胰岛细胞消化时间为(13.8±1.6)min.DTZ染色鉴定纯化前胰岛细胞数为(5626±422)个,纯化后为(2914±485)个,纯化后的胰岛细胞数较纯化前明显减少(P<0.01),回收率51.6%±6.0%,每个胰腺收获胰岛细胞数为(583±97)个/只.5次分离获得的胰岛细胞纯度为90.2%±3.4%,活性为81.6%±7.0%.培养3d后,葡萄糖刺激胰岛素释放实验显示:低糖环境下胰岛素水平为(39.7±7.5)EU/L,高糖环境为(116.1±17.4)EU/L,比较差异有统计学意义(P<0.01)刺激指数为3.0±0.4.结论 采用CSCI作为大鼠胰岛细胞分离纯化的主要液体试剂,并采用低浓度V型胶原酶消化,不仅可降低实验成本,同时可获得高质量的胰岛细胞.