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风湿性心脏病肺动脉高压患者肺组织肾上腺髓质素受体mRNA的变化
肾上腺髓质素是一种内源性神经肽，它参与了肺动脉高压的形成［1］，其作用机制之一是通过特异性受体发挥扩血管作用。我们采用印迹杂交(Northern blot)法检测风湿性心病肺动脉高压患者肺组织肾上腺髓质素受体(AM-R)mRNA的表达，以期探讨肾上腺髓质素在肺动脉高压中的作用机制。 一、材料和方法 1.标本来源：风湿性心脏病患者右肺组织18例，其中男11例，女7例，平均年龄31.7岁。根据平均肺动脉压分为3组［2］，每组6例：平均肺动脉压＜2.80 kPa(1 kPa=7.5 mm Hg)为肺动脉压正常组；2.80～5.33 kPa为肺动脉高压组；＞5.33 kPa为严重肺动脉高压组。正常对照组为无心肺疾病的患者右肺组织5例。 2.探针：人AM-R cDNA探针 (美国 Montuenga 博士惠赠)。 3.方法：(1)肺组织总RNA提取：采用异硫氰酸胍一步法。(2)RNA甲醛变性：取20 μg RN A，加入1×电泳缓冲液、体积分数为17.5%甲醛和50.0%甲酰胺，65 ℃水浴20 min，冰浴2 min。(3)RNA电泳：在质量分数为1%甲醛凝胶、1×电泳缓冲液中80 V预电泳5 min，65 V恒压电泳2 h左右。(4)转膜：采用真空转印仪，20×标准柠檬酸盐中负压400 MPa持续转印0.5 h。(5)Northern blot分析：将尼龙膜放入杂交炉中，55 ℃，转速12 r/min，预杂交4～6 h。再将用α-32P 3-磷酸核糖腺嘌啉标记好的AM-R cDNA探针，加入杂交管中，相同条件下杂交24～36 h。(6)杂交信号的密度扫描：放射自显影后，X光片经显影、定影、水洗、室温下凉干用计算机图像分析仪扫描分析，将各点杂交信号做面积和灰度测定，然后用同一样品3-磷酸甘油醛脱氢酶的杂交信号值做校正，即：AM-R mRNA(%) = (AM-R杂交信号面积×AM-R杂交信号灰度值)/(3-磷酸甘油醛脱氢酶杂交信号面积×杂交信号灰度值)×100%。 4.统计学方法：数据以均数±标准差(****±s)表示，进行方差分析。 二、结果 严重肺动脉高压组、肺动脉高压组、肺动脉压正常组肺组织AM-R mRNA分别为(76.00±1 1.50)%、(97.26±5.79)%、(105.41±12.24)%，合并肺动脉高压组 AM-R mRNA表达明显低于正常对照组(119.31±16.29)%(P＜0.05)，肺动脉压正常组 AM-R mRNA表达与正常对照组差异无显著性(P＞0.05)，严重肺动脉高压组AM-R mRN A表达明显低于肺动脉压正常组(P＜0.05)。
