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NO及其合酶在实验性肝肺综合征发病机制中的作用研究
肝肺综合征是由于慢性肝病或门脉高压引起的肺内血管异常扩张，气体交换障碍，动脉血氧分压降低而导致的疾病。它见于晚期肝硬化患者的15％～20％，由于药物治疗疗效差，肝移植后可获得明显改善，成为近年研究的热点之一，但其确切机制尚不清楚[1]。有研究发现慢性胆总管结扎(chronic common bile duct ligation，CCBDL)可引起实验大鼠发生肝肺综合征的临床表现，可作为其发病机制研究的动物模型[2]。一氧化氮(nitricoxide，NO)是一种内皮细胞来源的舒血管因子，是引起肝硬化患者高动力循环状态的重要物质[3]，NO是由一氧化氮合酶(nitric oxide syn-thase，NOS)以L-精氨酸为底物催化而成，NOS有两种：诱导型(iNOS)和结构型(cNOS)。本研究拟以CCBDL的大鼠为模型观察血浆及肺组织的NO水平，肺组织的iNOS及cNOS水平，并用NADPHd组织化学的方法观察肺组织内NOS的分布，以探讨NO及其不同类型的合酶在实验性肝肺综合征发病机制的作用。 材料与方法 一、实验动物 雄性SD大鼠，体重200～250 g，购自中国科学院上海实验动物中心，随机分为3组，每组8只： (一)CCBDL组参照Easter[7]的方法，戊巴比妥钠麻醉下结扎胆总管。 (二)正常对照组对照组经过上述相同的手术过程，但胆总管不结扎。 (三)肾上腺皮质激素预防组(激素组)操作过程同CCBDL组，但从第2周起每天经腹腔内注射地塞米松0．5mg／kg。 在手术后第2周和第5周取静脉血作血气分析，取动脉血测肝功能；第5周经眼球取血后处死大鼠，摘取肝脏作HE染色；取一侧肺剪碎，置于10 ml离心管中，按1：5加入PBS，匀浆，10 000 rpm离心15 min，收集上清液待测NO；另一侧肺作NADPIId组织化学染色。 二、方法 (1)肝功能测定；(2)血气分析测定：Chiron 248自动血气分析测定；(3)血浆及肺组织NO水平：由军事医学科学院放射医学研究所提供NO检测试剂盒；(4)肺组织NOS水平测定：由中国协和医科大学提供NOS检测试剂盒；(5)肺组织NADPHd组织化学染色：经支气管灌注0．1 mol／L的PBS缓冲液(pH 7．4)50 ml以冲去血液，再灌注含4％的多聚甲醛的PBS缓冲液500 ml固定，取肺置于上述固定液中后固定3 h，在转入含30％蔗糖的PBS中，4℃过夜，作冰冻切片，切片与NADPH-黄递酶底物反应液孵育60 min(反应液为含0．3％Triton X-100、0．5 mg／mlNBT及1 mg／ml β-NADPII的0．1 mol／L的PBS)，冲洗晾干，二甲苯透明，封片，光镜下观察，NADPIId阳性细胞为蓝色。(6)肝和肺组织的病理学：10％的甲醛固定肝或肺组织，石蜡包埋，HE染色，光镜下观察其病理变化。
