免疫胶体金在标记超薄切片中抗原的几点体会
摘要： 金标法是利用胶体金在碱性环境中带负电的性质,使其与抗体相吸引,从而将抗体标记.我们在使用免疫胶体金标记超薄切片抗原的实验中深深地体会到,要提高标记阳性的成功率,某些因素将在实验中起到很重要的作用.1、材料和方法1.1材料 20例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为IgA肾病的肾活检组织的环氧树脂包埋块.1.2方法取肾活检组织,经0.05%戊二醛,1%多聚甲醛(二甲砷酸钠缓冲液配制)固定3-4h,1%OsO4后固定2h,梯度丙酮脱水,Epon812包埋,60℃聚合12h,制备超薄切片(50-70nm),粘贴于带有formar膜的镊网上.以下实验在湿盒内进行:10%H2O2蚀刻30min,双蒸水冲洗;正常羊血清30m in;0.05M TBS冲洗;一抗((1:10)4℃冰箱内孵育20h,加室温2h; 0.05M Tris冲洗;正常羊血清孵育15min;0.05M Tris冲洗,0. 02M Tris(其中含0.1%BSA 0.05%NaN3pH8.2)冲洗;二抗 (1:20),室温孵育2h;0.02M Tris冲洗,0.05M Tris冲洗, 0.05M Tris加Tritonx-100浸洗,3次每次10min,双蒸水冲洗 ;1%戊二醛固定15min,双蒸水冲洗;铅铀双重染色,电镜观察.2、结果金颗粒主要集中于肾小管上皮细胞的胞质,有的沉积在线粒体内,或刷状缘其间 .详细内容见(用金标法检测细胞因子在人IgAN肾细胞内的位点及意义)金晓明等一文.3、体会和注意事项3.1 戊二醛的浓度直接影响抗原的保存.我们经过多次实验,戊二醛浓度在0.05%, 多聚甲醛1%时,固定时间不少于3小时,组织大小在1-2mm3,组织结构保存良好 ,同时对抗原影响也不大.3.2 抗体的稀释液采用0.05M Tris,0.15M NaCL,pH7.0,含 0.05%聚乙二醛(PEG)和0.05%NaN3.其中PEG可以使金颗粒分散, 提高蛋白质间的结合力,有利于一抗与二抗的结合,血清和BSA作为稀释液时都没有PE G效果好.一抗与二抗的稀释比例根据所标记抗原的情况而定.3.3 Triton x-100加入到0.05M Tris缓冲液中作为冲洗液,可以提高胶体金的穿透力,同时Triton x-100又是一种表面活性剂,在2抗标记后用含有0.05Triton x-100的Tris缓冲液浸洗30min,可以清除一部分非特异性反应的胶体金,使切片中组织形态清晰,提高样品的反差,而过量浓度的Tri ton和过长时间的浸洗会破坏组织中的膜结构.3.4 在实验中采用网架装载铜网,一次可以同时孵育几张到几十张超薄切片,同时不用担心在孵育过程中切片的正反面,又可避免镊子夹破支持膜和切片,节省每一实验步骤中的操作时间.网架是用铜网装载盒制成的,钻漏铜网盒,按所需的大小锯成小网架.清洗时用浓盐酸浸泡几分钟后冲洗,放在无水乙醇中保存,待下次使用前晾干.
-
护理专业解剖学课程形成性评价体系的设计与应用
目的 研究以护理操作为主线设计形成性评价体系,并分析其在解剖学教学中的应用效果.方法 选择2016级护理本科专业1班43名学生为对照组,2班44名学生为实验组.对照组采用终结性评价,实验组采用形成性评价.通过比较两组学生的考试成绩,并调查实验组学生对以护理操作为主线设计的形成性评价的满意情况.结果 实验组学生实验成绩、期末成绩明显高于对照组学生成绩,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01);调查问卷结果显示,实验组所有学生认为以护理操作为主线设计的形成性评价有利于后续专业学习,88％以上的护生认为对该评价方式能及时发现学习中的不足、有利于理论联系实践操作、调动学习兴趣与积极性、能培养自主学习能力、综合学习能力和团队协作精神、活跃课堂气氛等.结论 以护理操作为主线设计的形成性评价提高了护理专业解剖学教学质量,突显了护理专业特点,为进一步学习其他护理相关知识和进行护理基本技术操作奠定基础.
-
翻转课堂教学模式在组织学与胚胎学教学中的探索
随着信息技术的发展,翻转课堂已成为教育改革的新方向.本研究利用形态学数字化教学平台,对翻转课堂教学模式在组织学与胚胎学教学中进行了尝试与探索,结果显示学生对翻转课堂教学的欢迎度高,翻转课堂教学模式具有一定的优越性,在组织学与胚胎学教学中的应用是切实可行的.
-
网络信息化教学在高职院校医学形态课程中的实践与体会
随着科技的发展,以多媒体计算机技术和网络技术为核心的信息技术手段正逐渐的渗透到医学教育领域当中,加快了教学改革,提高了教学质量,从而更好的为教师和学生提供方便.本文就网络信息化教学模式如何在医学形态课程中的应用进行了一些探索,并取得了良好的教学效果,仅供同行参考交流.
-
浅析深化医教协同模式下医学基础课程的教育改革思考
医教协同推进医学教育改革与发展,加强医学人才培养是提高医疗卫生服务水平的基础工程,是深化医药卫生体制改革的重要任务,是推进健康中国建设的重要保障.医教协同模式下,笔者思考医学基础课程的教育改革方向是:深挖教学资源,始终贯穿医德教育于教学全过程;改良教学方法,摸索构建“基于器官/系统的整合式教学”模式;优化考核体系,建立能考察学生解决实际问题能力的标准.
-
小测验在系统解剖学教学中的应用探索
为探讨小测验在系统解剖学教学中的应用,本文将临床医学专业本科学生分成传统教学组和增加小测验教学组.采用问卷调查和期末考试的方法进行效果评价.结果显示,增加小测验教学组较传统教学组有一定的优势,学生成绩显著高于传统教学组.提示小测验的应用有助于提高系统解剖学的教学质量.
-
小组讨论式学习在护理学专业解剖学实验改革中的运用
人体解剖学是护理学专业学生必修的医学课程,在护理学专业的医学本科教育阶段发挥奠基石和桥梁的作用.面对信息网络化的迅猛发展,想要在现实课堂中吸引护理专业学生的注意力,解剖学教学必须改革.本文针对本校护理学专业学生的实际情况,在解剖学实验教学过程中尝试开展小组讨论式学习方法,取得一定效果.
-
学生对系统解剖学运动系统实验课开展结合四个联系的PBL教学的感知
PBL教学是一种基于问题的教学法.但要设计合理有效的PBL问题并非易事.文章从“联系发生发育、联系器官功能、联系临床及联系活体”四个联系人手来设计PBL问题,并应用至系统解剖学运动系统实验课教学中,与传统教学法进行教学效果对比,探讨学生对教学的感知情况.
-
生物分子实验课程设计性实验讨论课的教学与探索
设计性实验讨论课对培养学生的综合能力的运用和创新能力的培养有着重要的作用.本文阐述了开设设计性实验讨论课的要求、教学内容、教学的方式、成绩考评的实施方法.并对实验设计讨论课的教学特色进行了总结.实践证明,这种教学方式有利于学生的综合能力提高以及创新能力的培养.
-
我校国家级医学基础实验教学中心建设探索
本文介绍我校国家级医学基础实验教学中心的建设目标,着重阐述建设后中心取得的一些显著变化.主要从课程体系的科学化、教学方法、实验教学队伍的提高、实验教学条件进一步优化、示范性作用提升进行了论述,并对实验中心今后的发展提出了探讨性建议.
-
“以学生为中心”教育理念在中医院校解剖学教学中的应用
“以学生为中心”是一种新型的教学理念,越来越受到教育界的重视.在中医院校的解剖学教学中,应用“以学生为中心”的PBL、TBL、翻转课堂等教学模式和转变评价方式,旨在提高学生学习的主动性和兴趣,提高教学质量.
