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用乳凝集法和实时荧光定量法确诊b型流感嗜血杆菌脑膜炎一例
患儿女性,1岁,出生地湖北省宜昌市.2007年4月13日凌晨起病急,体温39℃,烦躁不安,在宜昌市夷陵区某卫生室就诊,以肠道病治疗12 h,病情无好转,下午到夷陵区人民医院就诊时发现患儿精神萎靡、嗜睡、高热,病情危重,转入宜昌市中心医院救治.
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实时荧光定量法和PCR-DGGE技术研究大肠癌患者肠道微生态特征
大肠癌是常见的恶性肿瘤之一,随着我国经济发展以及人群膳食结构、生活方式的转变,其发病率逐年升高。长期以来,大肠癌的早期诊断基本靠传统的肠镜检查,对被检查者有一定的诊疗风险和痛苦,不易于推广。研究发现,哺乳动物肠道中有多达1000余种、1014个以上的细菌与之共存。肠道菌群的生态状况、其代谢产物及产生的抗原可通过与机体代谢和免疫的相互作用对宿主产生巨大的影响,与肠癌的发生密切相关[1]。了解大肠癌患者和健康人群之间肠道菌群的异同,探索肠道菌群检测在大肠癌早期筛查中的可行性具有潜在意义[2]。本研究采用实时荧光检测( real-time q-PCR)及变性梯度凝胶电泳( denatured gradient gel electrophoresis , DGGE)技术分别从定量、定性角度对大肠癌和正常个体粪便样品进行检测,以期发现大肠癌患者与健康人群肠道菌群的异同,找到肠道微生物的指示菌群,为疾病的预防和早期监测提供一定的理论依据。
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乙、丙型肝炎病毒基因联合诊断芯片的研制及应用
目的:制备一款肝炎病毒检测芯片,能同时实现对乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、HBV YMDD变异株及HCV基因型的检测,并与其他检测方法进行比较,以探讨基因芯片技术临床应用的可行性.方法:根据HBV、HCV的序列设计出探针,采用点样法制备芯片.收集HBV DNA阳性和HCV RNA阳性血清各20份,YMDD变异株阳性血清20份,HBV DNA阴性和HCVRNA阴性血清各10份,用基因诊断芯片检测,并与荧光定量法、错配PCR及测序法比较.结果:HBV DNA阳性标本和HCV RNA阳性标本用芯片检测均为阳性;芯片法检测HBV YMDD变异株和错配PCR法的符合率为75%,和测序法的符合率为95%;芯片法检测HCV基因型和测序法的符合率为75%.结论:基因诊断芯片的敏感性和特异性较高,且能检测出不同病毒株的共生状态,但在检测HCV基因型方面存在一定的假阴性和假阳性.
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拉咪呋啶预防乙肝相关性肝硬化肝移植术后乙肝再感染的临床对照研究
目的:了解乙肝相关性失代偿肝硬化肝移植术后使用拉咪呋啶预防移植物乙肝再感染的疗效及乙肝标志物在血清及肝组织中的动态变化.方法:用酶联放免法,血清HBVDNA荧光定量法、肝穿组织免疫组化LSAB法及HBV DNA原位杂交法定期检测25例受体血清及肝穿组织,观察肝移植术后HBV标志物在血清及肝组织中的动态变化.本研究设计为前瞻的开放的非随机的临床对照研究.25例被分为乙肝病毒活跃复制(15例)及非活跃复制组(10例)两组,皆以拉咪呋啶100 mfd术前后服用预防,非活跃复制组中有3例未能及时服用拉咪呋啶作为对照组.结果:在HBV活跃复制组,术前口服拉咪呋啶平均2 wk能使80%以上的患者血清HBVDNA阴转;继续口服,术后表面抗原消失,部分血清乙肝病毒抗体(表面抗体HBsAb 9/15,核心抗体HBcAb 13/15及HBeAb 11/15)可在术后1-2 wk出现,至6 mo可逐渐消失;血清中HBVDNA荧光定量可一直维持阴转的状态;肝穿组织中HbsAg,HBcAg及HBVDNA原位杂交可长期维持阴性.10例乙肝病毒活跃复制受体其HBV血清标志物在12--44 wk之间完全消失;本组中2例(2/15,13.3%)在2 a时发生拉咪呋啶预防失败而致移植物再感染或乙肝复发;在HBV非活跃复制组,乙肝病毒抗原抗体表达同活跃复制组:表面抗原术后即消失,乙肝病毒抗体即在1-2 wk出现(BsAb4/7,HBcAb 6/7,HBeAb 2/7),6 mo左右消失.3例(43%,3/7)在近2 a时血清及肝组织中HBV标志即完全消失.本组无移植物再感染,乙型肝炎复发及乙肝病毒相关死亡.若血清中重新出现表面抗原或HBVDNA荧光定量阳性或肝穿组织免疫组化或HBVDNA原位杂交阳性则可诊断为HBV再感染.未能及时服用拉咪呋啶的3例非活跃复制的乙肝受体分别在术后8、10、12 mo移植物感染及复发新肝乙型肝炎,移植物再感染率及乙肝复发率为100%,其中1例死于纤维淤胆性肝炎,后二者经加用拉咪呋啶治疗为主的综合治疗而缓解.本研究除对照组外,拉咪呋啶预防下移植物总的乙肝再感染率为9.1%(2/22),受体HB复发率为4.5%(1/22),1-2 a生存率达87%.结论:拉咪呋啶能有效地预防失代偿期乙肝相关性肝脏疾病受体、尤其是乙肝病毒活跃复制受体肝移植术后移植物乙肝病毒的再感染及乙型肝炎复发,甚至使血清中及移植物的乙肝病毒达到临床清除.远期疗效正在进一步的评价中.
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因特芬干扰素致急性短暂性精神障碍1例报导
1 病历简介患者女,19岁,未婚未育.因"HBsAg阳性6年,反复乏力1月"入院,其本人及家族既往无精神疾病史.体查精神神态正常,未见异常体征,入院后查血常规正常;肝功能:ALT174U/L、AST86U/L、TBiL17.7umol/L;乙型肝炎病毒标志物呈HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性,HBV-DNA定量(PCR荧光定量法)为1.67×107拷贝/mL;B超示肝脏、胆囊、脾脏未见异常,诊断慢性乙型病毒性肝炎(中度),予甘草酸苷、维生素C等保肝及因特芬(重组人干扰素α-2a注射液,沈阳三生制药,批号20071103)500万IU隔日肌注抗病毒治疗,首针患者出现发热,伴头痛、全身肌肉酸痛,能自行缓解,此后注射时症状已基本缓解.
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SYBR荧光定量方法检测宫颈脲原体在妇产科中的应用
目的 建立基于SYBR的快速检测Ureaplasma urealyticum(UU)和Ureaplasma parvum(UP)的荧光定量检测方法 .方法 根据UU、UP的基因序列,设计分别针对UU、UP的特异性引物,建立了它们的荧光定量检测体系.通过Tm值扣对其他病原菌的分析验证其特异性,应用于临床样品验证其实用性.结果 在1×101-1×108拷贝/2μL DNA范围内拷贝数与CT值呈现良好的线性关系,检测灵敏度1×101-1×109拷贝/2 μL DNA,重复3次的相关系数为0.65%-1.75%.重复性好.结论 建立的荧光定量检测体系能够快速、简便地进行UU、UP的分型鉴定,具有实际应用价值.
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HCV RNA与抗-HCV在丙型肝炎诊断中的价值
HCV病毒主要是通过输血及输入血液制品传播,目前世界范围内感染率为3%.HCV病毒引起的肝炎约80%发展为慢性肝炎,其中约25%发展为肝硬化、肝癌,对人类健康危害极大.丙型肝炎治疗难度大、疗程长、疗效欠佳、费用高,所以选择理想的检测方法及早检出HCV病毒非常重要[1].本文对103例丙型肝炎患者同时进行了HCV RNA和抗-HCV检测,HCV RNA检测采用的是实时荧光定量法,抗-HCV检测采用的是酶联免疫法(ELISA).其结果如下.
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用荧光定量法对28例血清标本HBsAg与抗-HBc阳性者的结果分析及荧光定量的认识
对门诊病人进行筛选,保存28份HBsAg阳性、抗-HBc阳性、肝功能正常的血清标本进行荧光定量检测,现将结果报告如下.
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痕量DNA荧光检测方法建立
灵敏、准确的DNA定量方法在生物学研究及应用领域中发挥着重要的作用,尤其对痕量DNA定量时.根据2005版<中国药典2005版(三部)>检测外源DNA含量采用的是Southern blotting杂交法~([1]),此法可以检出pg水平的DNA~([2]),但其是半定量的方法.荧光定量法是一种灵敏的DNA定量方法,将荧光染料与DNA结合,利用荧光分光光度计采集结合后增强的荧光信号,通过DNA标准样品计算得出样品DNA的浓度.本研究基于SYBR Green I荧光发光原理,通过对DNA抽提方法的改进来提高抽提制品时痕量DNA回收率,以建立一种痕量DNA检测方法.
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应用荧光定量PCR测定肝移植受者HBV-DNA
血清中乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)的存在一直被认为是病毒复制的标志,且与传染性有关。以前主要应用聚合酶链反应(PCR)技术检测,但由于PCR只能定性,对病毒基因无法定量,且检测过程中染色剂溴乙锭具有较强的致癌作用且污染环境。随着分子诊断学的发展,新技术不断被开发,荧光定量PCR检测具有定量、高灵敏度、高速循环及高重复性等优点。本文采用荧光定量法和酶联免疫方法对7例肝移植患者进行术前、术后的血清HBV-DNA和乙肝标志物的检测,共95例次,以评价荧光定量PCR测定HBV-DNA在肝移植术中的……
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肺炎支原体不同原理检测方法及其实用性探讨
目的:探讨肺炎支原体不同检测方法的临床应用价值,为临床实验室方法的选择提供依据。方法用不同原理的三种方法检测儿童呼吸道感染者体内肺炎支原体,并对其进行比较。结果荧光定量法优于被动凝集法和酶联免疫法(P<0.05,P<0.01),后两者中又以被动凝胶法更有优势(P<0.05)。结论酶联免疫法适于初筛实验,被动凝集法适于早期诊断及治疗效果的监测。用咽拭子做实时荧光PCR法对于有定量要求的患者意义重大。荧光PCR法与初筛方法联合使用,能互相弥补方法学原理的缺陷、提高肺炎支原体的检出率,更适用于临床需要。
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荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的应用
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是肝癌发生的重要危险因素[2].我们用基因扩增荧光定量法测定了乙型肝炎病人血清中HBV DNA,并与酶联免疫吸附测定(ELISA)乙肝病毒血清标志物关系作一比较.
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解脲脲原体和沙眼衣原体与女性生殖道感染的关系
解脲脲原体(UU)和沙眼衣原体(CT)与女性生殖道感染有密切联系,是引起非淋菌性尿道炎、宫颈炎的主要病原体,近几年发病率逐年升高.现我们对我院妇产科疑有生殖道感染的259例门诊及住院患者进行宫颈分泌物的UU、CT检测,采用实时荧光定量法分析探讨UU、CT与生殖道感染之间的关系.
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硅胶吸附离心柱法提取血浆中游离DNA的方法学评价
目的:利用硅胶吸附离心柱法提取血浆中游离的DNA并用荧光定量法测定,对方法学进行评价.方法:采用硅胶吸附离心柱法提取血浆中游离的DNA,并纯化DNA.制成0ng/ml、8ng/ml、80ng/ml、800ng/ml标准品,并采用荧光定量法检测血浆中游离的DNA含量,从重复性、线性范围、回收率几方面进行方法学评价.结果:硅胶吸附离心柱法提取血浆中游离DNA的重复性较好,其变异系数为5.1%和7.1%;在0-1000ng/ml范围呈线性;回收率在45%-55%之间.结论:硅胶吸附离心柱法提取血浆中游离DNA的回收率较高,适合于小片段DNA的提取.
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甘肃省56万例新生儿苯丙酮尿症筛查结果分析
目的:回顾性分析甘肃省567691例新生儿苯丙酮尿症筛查结果,了解甘肃省新生儿苯丙酮尿症(PK U )的发病情况,为甘肃省PK U的防治提供基础数据。方法标本为甘肃省新生儿筛查中心于2009~2014年收集的567691例新生儿足跟血滤纸干血斑样品,用荧光定量法检测苯丙氨酸水平,并采用尿碟呤谱分析及苯丙氨酸羟化酶(PA H )基因突变检测进行鉴别诊断。结果在567691例新生儿中,确诊PK U患儿166例;总体检出率为1/3420,其中经典PK U 119例(71.7%),中等型PK U 33例(19.9%),轻型PK U 14例(8.4%)。结论甘肃省PK U发病率远高于全国平均发病水平,以经典型PK U 发病为主,应成为PK U重点防治地区。
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两种人乳头瘤病毒检测方法的比较
目的 通过对宫颈病灶组织的人乳头瘤病毒分型基因芯片法和宫颈分泌物的PCR荧光定量法检测结果 比较,为临床人乳头瘤病毒的诊断提供比较恰当的选择方法 .方法 采用人乳头瘤病毒分型基因芯片检测系统,对200例患者的子宫颈癌新鲜冻存组织进行人乳头瘤病毒分型检测,其中的134例患者同时采用荧光定量PCR方法 对宫颈病灶分泌物进行人乳头瘤病毒16、18型检测.结果 人乳头瘤病毒分型基因芯片检测的人乳头瘤病毒阳性率为94.00%(188/200),均为高危型.其中存在人乳头瘤病毒16和/或18的占90.00%(180/200),而荧光定量PCR检测的人乳头瘤病毒16和/或18阳性率为36.57%(49/134).荧光定量法检测为阳性的49例均在基因芯片法检测结果 中显示含有HPV16和/或18型.两种方法 的人乳头瘤病毒检出率有明显差异(χ2=106.2862,P<0.005).结论 虽同以PCR技术为基础,但人乳头瘤病毒分型基因芯片检测系统的敏感性要优于荧光定量PCR检测方法 ,同时前者还可对人乳头瘤病毒分型,是临床应用的较好选择.