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天花粉化学成分的药理活性及其提取与检测方法研究进展
目的:为建立天花粉的质量评价标准提供参考.方法:以"天花粉""化学成分""质量评价""天花粉蛋白""天花粉凝集素""天花粉多糖""药理活性""检测方法""Trichosanthis Radix""Chemical component""Quality evaluation""Trichosanthin""Trichosan-thes kirilowii lection""Polysaccharides of trichosanthis radix"等为关键词,组合查询1980年1月-2018年1月在中国知网、万方、维普、ScienceDirect、PubMed、Web of Science等数据库中的相关文献,对天花粉化学成分的药理活性、提取与检测方法进行论述.结果与结论:共检索到相关文献857篇,其中有效文献54篇.天花粉含有蛋白质类、多糖类、皂苷类、黄酮类、氨基酸等多种活性成分,其中研究较多的为天花粉蛋白、天花粉多糖、天花粉凝集素这3种成分的药理活性、提取与检测方法,而皂苷类成分和黄酮类成分研究较少,停留在总皂苷或总黄酮的层面上,缺乏化学结构鉴定及药理活性研究.天花粉蛋白是天花粉的专属性成分,具有抗病毒、抗肿瘤、中期引产等多种药理活性,可作为天花粉质量评价指标性成分.
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天花粉蛋白的药用研究概况
天花粉(Radix trichosanthis)是我国传统中药,采自葫芦科植物栝楼的块根.其用药早见于《神农本草经》;李时珍在《本草纲目》中肯定了天花粉具有治疗胞衣不下和通月水的功效.
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腹腔镜术后肌肉注射天花粉蛋白预防持续性异位妊娠72例
目的：探讨单次肌肉注射天花粉蛋白预防腹腔镜保守性手术后持续性异位妊娠的临床疗效。方法选取2010年5月至2014年5月行腹腔镜保守性治疗的异位妊娠患者144例，随机分为观察组和对照组，各72例。两组患者均行腹腔镜保守性治疗，对照组术中于病灶局部注射甲氨蝶呤20 mg，观察组于术后单次肌肉注射天花粉蛋白1.2 mg。结果观察组患者术后持续性异位妊娠发生率为5.56%，略高于对照组的2.78%，但无显著性差异（ P>0.05）。治疗后，两组患者血β－人绒毛膜促性腺激素（β－HCG）和孕酮水平均较治疗前显著下降，观察组的下降幅度大于对照组，两项指标恢复正常的时间也少于对照组（ P<0.05）。观察组盆腔包块消失时间平均为（32.51±8.43）d，明显短于对照组的（41.07±11.72）d（ P<0.05）。观察组不良反应总发生率为58.33%，明显高于对照组的31.94%（ P<0.05），但严重程度远低于对照组。结论腹腔镜保守性异位妊娠患者术后单次肌肉注射天花粉蛋白，可降低术后持续性异位妊娠发生率，快速降低血β－HCG和孕酮水平，不良反应发生率虽高但均较轻微。
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融合蛋白EGF-TCS的纯化及体外靶向杀伤肿瘤细胞的研究
目的 在大肠杆菌中表达并纯化EGF-TCS融合蛋白,观察该融合蛋白对肿瘤细胞的靶向选择性杀伤作用.方法 将重组表达质粒PQE30/EGF-TCS转化至大肠杆菌M15中,表达该融合蛋白(EGF-TCS).产物经Ni-NTA Agrose亲和层析柱纯化;用流式细胞仪检测肿瘤细胞株和正常肝LO2细胞株的EGFR表达量;进行细胞杀伤实验,验证EGF-TCS的选择性杀伤能力;用流式细胞仪检测细胞凋亡的方法进一步考察EGF-TCS的靶向选择性杀伤能力,并用电镜观察细胞形态.结果 重组表达质粒PQE30/EGF-TCS在大肠杆菌M15中获得稳定、高效的融合表达,表达上清柱纯化纯度达95%以上;肝癌BEL-7402细胞表面EGFR表达量高(72.33%),正常肝LO2细胞表面EGFR表达量低(5.51%),重组的融合蛋白对肿瘤细胞具有较大的杀伤能力(BEL-7402、MCF-7和BGC-823的IC50分别为11.40、22.47、12.53 μg/ml),对正常细胞的杀伤能力微弱(IC50为53.19 μg/ml).结论 应用基因工程技术,成功构建了融合蛋白EGF-TCS,该融合蛋白可明显促进肿瘤细胞的凋亡.
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天花粉蛋白对小鼠黑色素移植瘤血管生成拟态及PI3K表达的影响
目的:研究天花粉蛋白对小鼠黑色素移植瘤血管生成拟态、PI3K mRNA及蛋白表达的影响.方法:小鼠接种B16细胞复制模型,接种结束后小鼠随机分为天花粉蛋白高、中、低剂量组(0.6、0.4、0.2 mg/kg)和空白对照组接受治疗.观察肿瘤一般状况,CD31与过碘酸-雪夫双重染色法检测血管生成拟态形态学,RT-PCR检测PI3K mRNA的表达,免疫组织化学检测PI3K蛋白的表达.结果:与空白对照组相比,天花粉蛋白高剂量组(0.6 mg/kg)瘤组织体积与重量、VM密度、PI3K mRNA与蛋白的表达均明显降低.结论:天花粉蛋白能够抑制小鼠黑色素移植瘤的血管生成拟态,推测可能与调控PI3K的表达有关.
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凉血清营颗粒对Ⅰ型变态反应的影响
目的:研究凉血清营颗粒对Ⅰ型变态反应的影响.方法:用天花粉蛋白所致小鼠速发型超敏反应及大鼠同种异体被动超敏反应(PCA)观察对Ⅰ型变态反应的影响;用化合物48/80所致小鼠过敏性休克死亡及大鼠颅骨肥大细胞模型观察对肥大细胞脱颗粒的影响;用组织胺所致小鼠皮肤毛细血管通透性亢进试验观察对组织胺的直接对抗作用.结果:凉血清营颗粒能一定程度拮抗天花粉蛋白所致小鼠过敏性休克及大鼠PCA,并能明显抑制化合物48/80及天花粉蛋白所致腹腔或骨膜肥大细胞脱颗粒,还能明显对抗组织胺所致毛细血管通透性亢进.结论:凉血清营颗粒具有显著的抗Ⅰ型变态反应作用,此作用可能是其能抑制IgE生成、肥大细胞脱颗粒及直接拮抗组织胺作用的综合效果.
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天花粉蛋白注射液治疗异位妊娠的疗效观察
目的:比较天花粉蛋白注射液和甲氨蝶呤配伍米非司酮治疗异位妊娠的有效性和安全性.方法:320例异位妊娠随机分为研究组和对照组各160例.研究组采用天花粉蛋白注射液治疗,对照组采用甲氨蝶呤配伍米非司酮治疗,分别于治疗前1天及治疗后第7天抽取静脉血,检测β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)和孕酮.并比较两组治疗成功率,观察副反应发生情况.结果:两组治疗后血β-HCG和孕酮均下降,与治疗前比较差异有统计学意义(P＜0.05).两组治疗成功率比较差异无统计学意义(P＞0.05).两组治疗副反应发生率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:天花粉蛋白注射液和甲氨蝶呤配伍米非司酮均能有效治疗异位妊娠,但前者副反应较少.
关键词： 异位妊娠 β-人绒毛膜促性腺激素 孕酮 天花粉蛋白 -
天花粉蛋白的制备及其性质
目的 采用两步层析法快速制备天花粉蛋白(TCS),并验证其SOD活性.方法 粉碎栝楼块茎并抽提,经硫酸铵分级沉淀,再经Blue-Sepharose CL 6B和SP-Sepharose两步层析,可获得TCS纯制剂;采用SDS-PAGE和PAGE鉴定其均一性;用MTT法检测TCS对Hela细胞的抑制作用;采用PAGE-NBT活性染色法与邻苯三酚自氧化法相结合检测了TCS的SOD活性.结果 用两步层析法可获得高纯度和高收率的TCS;经SDS-PAGE和PAGE鉴定,均为单一蛋白质着色带;TCS对Hela细胞增殖具有明显抑制作用,呈时间和浓度依赖关系;TCS不具有SOD活性.结论 所用TCS纯化方法简单、快速、收率高,可大量制备具有生物活性的TCS,同时也首次证明了TCS不具有SOD活性.
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天花粉蛋白对IL-1β介导下的人牙周膜细胞MMP-1表达的影响
目的 观察天花粉蛋白(TCS)对白细胞介素-1β(IL-1β)介导下人牙周膜细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的影响,为进一步研究对抗牙根吸收的可能途径提供实验依据.方法 用IL-1β 10 ng/ml作用于体外培养的人牙周膜细胞(hPDLCs),通过噻唑蓝比色测定法(MTT)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),观察IL-1β对hPDLCs生长状态及MMP-1表达影响;将TCS 0.05 ng/ml作用于IL-1β介导状态下的hPDLCs,观察hPDLCs生长状态及MMP-1表达的变化.结果 在IL-1β及IL-1β复合TCS作用下,hPDLCs的增殖状况无明显改变(P＞0.05);IL-1β介导下,hPDLCs中MMP-1的mRNA表达呈上升趋势.相对于IL-1β单独作用,IL-1β复合TCS作用下,hPDLCs中MMP-1的mRNA表达下调.结论 IL-1β介导下的hPDLCs 的MMP-1表达增高;TCS有抑制IL-1β介导下的hPDLCs MMP-1表达增高作用.
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天花粉有效成分及药理活性研究进展
天花粉为葫芦科植物栝楼或双边栝楼的干燥根,是我国临床上常用的一种中药材.主要含糖类、蛋白质、皂苷和氨基酸等有效成分,具有降血糖、终止妊娠、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抑菌和凝血等多种药理活性.就天花粉的有效成分及其药理活性进行综述,为天花粉的质量控制、药效药理及临床应用等后继工作的研究奠定基础和提供参考.
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天花粉蛋白注射液结合中药治疗异位妊娠临床分析
目的 探讨天花粉蛋白注射液结合中药治疗异位妊娠的临床效果.方法 将临床确诊为未破裂异位妊娠患者,按入院日期的单双日随机分为两组,天花粉蛋白注射液结合中药治疗异位妊娠为观察组(50例),单纯用天花粉蛋白注射液治疗异位妊娠为对照组(52例).比较两组治疗成功率、血β-HCG降至正常天数及其影响因素.结果 观察组治疗成功率90.0%,高于对照组治疗成功率80.8%,差异无统计学意义(P＞0.05).血β-HCG降至正常天数观察组显著少于对照组(P＜0.05).两组患者不良反应主要为天花粉治疗副反应,以发热、咽喉痛及注射部位红肿为主,经对症治疗均可治愈;血β-HCG降至正常的天数与用药前血β-HCG水平有显著相关性.结论 天花粉蛋白注射液结合中药治疗异位妊娠疗效高、疗程短,值得推广.
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不同方法治疗输卵管妊娠后生育结局的临床分析
目的 评价不同方法治疗输卵管妊娠后的生育能力.方法 回顾性分析176例首次输卵管妊娠患者经手术治疗和药物保守治疗后的生育状态,比较手术治疗与药物治疗、输卵管保守手术与根治性手术、腹腔镜手术与开腹手术之间的区别.结果 宫内妊娠率在手术组为59.6％,在药物治疗组为52.8％,两组重复异位妊娠率分别为14.4％和13.9％,两组不孕率分别为26.0％和33.3％,较差异无统计学意义(P＞0.05)；宫内妊娠率在输卵管保守手术组为62.5％,在根治手术组为55.0％,两组重复异位妊娠率分别为17.2％和10.0％,两组不孕率分别为20.3％和35.0％,差异无统计学意义(P＞0.05)；宫内妊娠率在腹腔镜手术组为69.8％,在开腹组为43.9％,两组重复异位妊娠率分别为12.7％和17.1％,两组不孕率分别为17.5％和39.0％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 输卵管妊娠可根据具体情况行手术治疗或者药物治疗；手术治疗应尽量选择腹腔镜手术；输卵管病情是决定手术方式的关键因素,应以保护患者生育能力,解除不孕隐患为原则.
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天花粉蛋白对小鼠黑色素移植瘤血管生成拟态及Ln-5γ2表达的影响
目的：研究天花粉蛋白对小鼠黑色素移植瘤血管生成拟态、Ln-5γ2 mRNA 及蛋白表达的影响。方法：小鼠接种B16细胞复制模型，接种结束后小鼠随机分为天花粉蛋白高、中、低剂量组和空白对照组接受治疗。观察肿瘤一般状况，CD31与过碘酸-雪夫双重染色法检测血管生成拟态形态学，RT-PCR检测Ln-5γ2mRNA的表达，免疫组织化学染色检测Ln-5γ2蛋白的表达。结果：与空白对照组相比，天花粉蛋白高剂量组瘤组织体积、重量、VM 密度、Ln-5γ2mRNA与蛋白的表达均明显降低（P＜0．05）。结论：天花粉蛋白能够抑制小鼠黑色素移植瘤的血管生成拟态，推测可能与调控Ln-5γ2的表达有关。
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天花粉蛋白突变体TCSFYY163-165CSA的构建表达与纯化
目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体基因,并在原核系统进行表达及纯化.方法:应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇(FYY163 - 165),并进行定点突变.以栝楼基因组DNA为模扳,经PCR扩增突变基因,与pRSET-A表达载体连接,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序.将阳性重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western blot法鉴定和Ni-NTA层析纯化.结果:构建了带有TCS突变体基因(TCSFYY163- 165CSA)的重组表达质粒,使目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化后,得到均一的TCS突变体蛋白.结论:成功地构建了TCS突变体基因TCSFYY163 - 165CSA,并获得高效表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径.
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天花粉蛋白突变体TCSRL28-29CG的构建、表达与纯化
目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体基因,并进行表达及纯化.方法:应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇,并进行定点突变.以栝楼基因组DNA为模扳,经PCR扩增突变基因,与pRSET-A表达载体连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并对表达产物进行Ni-NTA层析纯化.结果:目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化后,得到均一的TCS突变体蛋白.结论:成功地构建了TCS突变体基因TCSRL28-29CG,并获得高效表达.
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突变型天花粉蛋白TCSYFF81-83ACS的生物活性及免疫原性分析
目的:构建一种突变型天花粉蛋白(trichosanthin,TCS),并对其生物活性和免疫原性进行分析.方法:选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83)进行定点突变,并将所构建的突变体(TCSYFF81-83ACS)在大肠杆菌中进行表达及纯化.随后与野生型TCS(wTCS)比较,分析其DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性和急性毒性.结果:初步检测显示,所构建的突变型TCS活性与wTCS活性几乎相当,而其免疫原性有所降低.结论:通过该方法改造TCS是可行的,有可能为抗HIV治疗提供一种高效、低毒、廉价的药物.
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EGF-Linker-TCSKDEL融合蛋白的构建及表达产物的纯化
目的构建EGF-Linker-TCSKDEL融合蛋白表达载体并纯化目的蛋白。方法以天花粉蛋白基因的改造产物TCSKDEL为毒素，人表皮生长因子EGFR为载体，构建重组免疫毒素EGF-Linker-TCSKDEL。PCR方法扩增EGF-Linker-TCSKDEL基因片段，插入表达载体PET28a中并诱导表达，使用Ni-NTA Agrose亲合层析纯化。结果该融合蛋白以可溶形式表达于大肠杆菌培养上清中，并获得有效纯化。结论成功构建了新型融合蛋白EGF-Linker-TCSKDEL，为其进一步的基础和临床研究奠定基础。
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突变前后天花粉蛋白的生物活性及免疫原性比较研究
目的:对天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)进行定点突变,比较其与野生型TCS(wTCS)间的生物活性及免疫原性差异. 方法:选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83和KR173-174)进行定点突变,并将所构建的突变体(TCSYFF-KR)在大肠杆菌中表达及纯化.随后将其与wTCS比较,分析其DNA酶活性、致核糖体失活活性和免疫原性. 结果:构建的突变体TCSYFF-KR其活性与wTCS活性几乎相当,而免疫原性有所降低. 结论:通过该方法改造TCS是可行的,所构建的突变体TCSYFF-KR值得进一步研究.
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天花粉蛋白在治疗植入性胎盘中的作用
目的:探讨天花粉蛋白在临床上治疗植入性胎盘的作用.方法:对1970～1998年间21例经病理证实的植入性胎盘的临床资料进行分析.结果:11例使用天花粉治疗全部治愈,产后8.3±0.4 dihCG转为阴性,阴道出血少,体温上升平均38.3±0.5℃,持续4.2±1.6 d,无严重不良反应;其余10例急诊手术治疗.结论:小面积植入性胎盘使用天花粉保守治疗,临床效果良好.
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天花粉蛋白配伍丙酸睾丸素在过期流产中的应用观察
1997年8月～1999年8月我院对确诊为过期流产的32例用天花粉蛋白配伍丙酸睾丸素治疗,并与常规应用乙酚加催产素治疗的32例作对照,现报道如下.
