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天花粉蛋白抗小鼠H22肿瘤作用的研究
对天花粉蛋白注射液(TCS)抗BALB/c小鼠体内H22肿瘤的作用进行了初步研究.建立移植型H22肝癌小鼠模型,腹腔注射TCS治疗,检测抑瘤率、皮内肿瘤微血管新生等指标,并通过细胞流式分析和体外鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验对其抗肿瘤作用机制进行探讨.结果显示,TCS治疗组实体瘤重与皮内肿瘤微血管新生数都明显小于模型对照组(P＜0.01).证明TCS通过抑制血管生长表现出一定的抗小鼠体内H22肿瘤生长的作用.
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天花粉蛋白体外诱导HL-60细胞凋亡的实验研究
目的:本研究探讨天花蛋白(Trichosanthin,TCS)对HL-60细胞凋亡的影响.方法:采用MTT比色法测定细胞的增殖抑制率;光学显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:TCS抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,随作用时间的延长、TCS浓度的增加,增殖抑制及促凋亡作用更加明显.结论:TCS对HL-60细胞有时间和剂量依赖性的细胞凋亡诱导效应.
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激光共聚焦镜下观察天花粉蛋白进入瘤细胞的动态过程
目的:观察FITC标记的天花粉蛋白(TCS)进入瘤细胞的过程.方法:通过低温离心、丙酮分级沉淀、等电点沉淀及透析技术由新鲜栝楼根原汁中提取TCS;用FITC标记TCS,在激光共聚焦显微镜下动态观察FITC-TCS进入瘤细胞的过程.结果:纯化的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析为单一带,且与标准TCS泳率相同;终浓度50μg/ml FITC-TCS的孵育3h时已经进入黑色素瘤B-16细胞,6h时FITC-TCS进入细胞量达到高,12h时已轻度下降,组间差异有统计学意义(P＜0.01).FITC-TCS组与对照组(FITC-BSA)荧光强度差异有统计学意义(P＜0.01).结论:采用FITC-TCS,可在激光共聚焦显微镜下观察到进入瘤细胞的动态过程.
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天花粉蛋白突变体的构建及其在原核系统中的表达
目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体,并将其在原核系统内进行表达及纯化.方法:借助计算机预测TCS可能的抗原决定簇(YFF81-83)并设计出适当的突变引物.以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增TCS突变体全长基因,经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态E.coliDH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序.将所获阳性重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western blot鉴定.后用Ni-NTA亲和层析柱对所获突变体蛋白进行纯化.结果:成功构建了TCS突变体(TCSYFF81-83ACS),并获得了突变体蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,产生出大量均一的TCS突变体蛋白.结论:TCS的定点突变及其在原核系统内的表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径.
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天花粉蛋白治疗未破裂型异位妊娠临床观察
我院自1996年1月～2002年12月采用天花粉蛋白治疗未破裂异位妊娠,效果满意,现报道如下.
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天花粉蛋白在妇产科临床应用进展
天花粉蛋白（trichosanthin，TCS）是从葫芦科植物栝楼的块根中分离纯化得到的一种碱性蛋白，属于I型核糖体失活蛋白，为我国传统中药“天花粉”的有效成分。研究发现，天花粉有抗肿瘤[1]、抗病毒[2]、抗真菌[3]的作用；可抑制艾滋病病毒在感染的免疫失活细胞内的复制繁衍，起到调节免疫功能的作用[4]。本文主要就天花粉蛋白在妇产科领域的应用作一综述。
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天花粉研究进展
天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)是从多年生宿根草质藤本括楼(Trichosanthes kirilowii Maximovich)的块根(用作中药时名为天花粉)中提取的一种碱性植物蛋白质[1].通过对天花粉蛋白进行药理学、病理学、免疫学的研究,已经明确它具有引产、抗肿瘤[2]、抗病毒[3]、抗真菌[4]、等生物学活性.
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两种药物保守治疗异位妊娠的对照研究
目的:探讨米非司酮和结晶天花粉保守治疗异位妊娠的有效性.方法:选择符合药物保守治疗指征的异位妊娠病例138例,口服米非司酮68例(米非司酮组),宫颈注射结晶天花粉蛋白70例(天花粉组),均辅以中药治疗,观察血β-hCG下降、异位妊娠包块吸收情况.结果:米非司酮组治愈率90.41%,天花粉组治愈率96.7%,两组比较,P>0.05.在血β-hCG>1000mIU/ml组中天花粉的治愈率93.3%,高于米非司酮组的治愈率66.7%,但两组比较,P>0.05;血β-hCG降至正常时间两组比较,P>0.05,包块吸收时间,P<0.01.结论:米非司酮和天花粉治疗符合保守治疗指征的异位妊娠均有较高的治愈率,对血β-hCG>1000mIU/ml的病例以选择结晶天花粉蛋白治疗为宜.
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天花粉蛋白羊膜腔注射终止瘢痕子宫前置胎盘中期妊娠的临床观察
引产是计划外妊娠的一种补救措施,但是一些特殊情况下的中期妊娠引产在临床工作中棘手;选择一种安全、有效的引产方式很重要.本院自2003年3月至2006年1月采用天花粉蛋白羊膜腔注射用于瘢痕子宫、前置胎盘中期妊娠引产20例,取得良好的临床效果,现报道如下.
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IκB-α蛋白降解对天花粉蛋白抗肿瘤作用的影响
[目的] 检测天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)对不同细胞株的生长抑制作用,并分析TCS 处理后胞浆 IκB-α蛋白水平的改变.[方法] 人羊膜上皮细胞株 FL、人宫颈癌上皮细胞株 Hela、人滋养层绒毛膜癌细胞株 JAR 及大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株 PC12 经一系列浓度 TCS 处理 24h 和 48h 后,采用 MTT 法检测细胞存活率.应用透射电子显微镜观察 TCS 处理后 Hela 和 JAR 细胞超微结构的改变.应用 Westem blot 法检测 Hela、JAR 和 HepG2 细胞经 50μg/ml TCS 处理不同时间点(30min、3h及12h)胞浆中 IκB-α蛋白水平的改变.[结果] TCS 能有效抑制 Hela 和 JAR 细胞生长,具有剂量和时间依赖性,且 TCS 对 Hela 细胞的生长抑制作用略强于 JAR 细胞;而 TCS 对 FL 和 PC12 细胞的生长抑制率较低.透射电镜观察显示,Hela 和 JAR 均具有典型的凋亡细胞的特征.Western blot 检测显示,TCS 处理后HepG2 细胞 IκB-α蛋白减少水平明显,响应速度快,JAR 细胞次之,Hela 细胞几乎无改变.[结论] TCS 对细胞具有选择性杀伤的作用,具有较好的抗肿瘤应用前景；IκB-α蛋白降解导致的 NFκB 活化可能是影响肿瘤对 TCS 敏感性的机制之一.
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肿瘤微环境双重响应性的智能型蛋白毒素给药系统的构建和表征
目的 利用蛋白重组技术和PEG定点修饰技术,制备具有肿瘤微环境双重响应性的智能型蛋白毒素给药系统.方法 利用基因重组技术,在天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)的C端引入天冬酰胺内肽酶(legumain)的底物天冬酰胺肽段和半胱氨酸残基,将所构建的突变体转化到大肠杆菌中表达目的蛋白并纯化.进一步将重组蛋白末端的半胱氨酸与具有巯基反应性的mPEG-Hz-Mal偶联合成TCS-Asn10-Hz-PEG,采用弱阳离子交换柱纯化TCS-Asn10-Hz-PEG,并在体外考察了TCS-Asn 10-Hz-PEG的酸敏感性和酶敏感性.结果 成功制备、分离和纯化得到了TC S-Asn 10-Cys,完成了mPEG-Hz-Mal 与TCS-Asn10-Cys的定点偶联,得到智能型蛋白毒素给药系统TCS-Asn 10-Hz-PEG.TCS-Asn10-Hz-PEG在体外pH 5.6的介质中和天冬酰胺内肽酶的作用下,能够水解或酶解释放出TCS,具有酸敏感特性和酶敏感特性.结论 本实验设计的蛋白毒素给药系统,具有酸敏感和酶敏感双重响应特性.
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天花粉蛋白配合清宫术终止剖宫产术后子宫瘢痕妊娠
目的:探讨天花粉蛋白配合清宫术在终止剖宫产术后子宫瘢痕妊娠中的疗效.方法:对本院2002年1月-2008年8月收治的16例剖宫产术后子宫瘢痕妊娠(CSP)患者用天花粉蛋白配合清宫术进行治疗,治疗方法为:天花粉蛋白2.4 mg宫颈注射,1周后复查B超及血β-hCG值,若孕囊周围血流信号明显减弱或β-hCG值减少>30%,即可行清宫术;1周后若孕囊周围血流信号无明显减弱或β-hCG值减少<30%,可加用米非司酮口服,1次50 mg,每12小时一次,共3d,观察1周后行清宫术.治疗前大出血的4例患者均先行输液、卡前列素氨丁三醇宫体注射,出血量明显减少,生命体征稳定后行天花粉蛋白1.2 mg宫颈注射,1周后行清宫术治疗.为了给病灶定位和避免子宫穿孔,所有的清宫术均在超声监护下进行.结果:9例于天花粉蛋白治疗1周后行清宫术,7例于2周后行清宫术.16例患者术中刮出的组织达1～10 g不等,均经病理检查确诊.术中出血20～200 mL,治疗前大出血的4例患者无一例再次发生大出血.住院时间8～17d,平均12.5d治愈出院.16例患者均成功地保留了生育功能.结论:天花粉蛋白配合清宫术在治疗剖宫产术后子宫瘢痕妊娠中的疗效肯定,可以明显缩短病程,是可选择的安全有效的治疗方法.
关键词： 剖宫产术后子宫瘢痕妊娠 天花粉蛋白 清宫术 -
天花粉蛋白对肝癌细胞的放射增敏作用及机制研究
目的 探讨天花粉蛋白对肝癌细胞HepG2的放射增敏作用及机制研究.方法 应用MTT法检测天花粉蛋白对HepG2细胞的抑制率,克隆形成实验分析放射增敏效应,采用流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡,采用透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化.结果 天花粉蛋白对HepG2细胞的生长呈抑制作用,显著增加了HepG2细胞的放射敏感性.FCM显示单药组和单照组的凋亡率均高于未处理组(均P＜0.05),联合组的凋亡率明显高于单照组和单药组(均P＜ 0.05).电镜下处理组细胞呈现典型的凋亡形态学变化.结论 天花粉蛋白能增加HepG2细胞的放射敏感性,其机制可能与增加凋亡相关.
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天花粉蛋白保守治疗剖宫产瘢痕妊娠的临床观察
目的 探讨天花粉蛋白在剖宫产瘢痕妊娠保守治疗中的有效性和安全性.方法 将临床确诊为剖宫产瘢痕妊娠的64例患者随机分为天花粉蛋白组和甲氨蝶呤(MTX)组,分别给予天花粉蛋白和MTX治疗,比较两组治疗的成功率、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)下降正常天数、下降水平和患者住院时间以及不良反应.结果 两组治疗均有效.两组治疗后血β-HCG均有下降,与治疗前比较差异均有统计学意义(均P＜0.01),且两组治疗后β-HCG水平差异有统计学意义(P＜0.05).结论 与MTX相比,天花粉蛋白用于剖宫产瘢痕妊娠的保守治疗具有起效快、疗程短及用药安全等特点,值得推广应用.
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杀胚消癥法治疗异位妊娠50例分析
采用天花粉蛋白杀胚结合中医消癥药物治疗异位妊娠50例，结果：50例中有效45例，无效5例，有效率90.0％。有生育要求的17例输卵管通畅率达94.1％。所有病例经随访，无再次异位妊娠发生。结论：天花粉蛋白结合中药，不但可杀死异位胚胎，还可治疗炎症和粘连，从而恢复输卵管功能，免除患者的手术创伤。
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OPCML、DAPK基因甲基化与宫颈癌CasKi细胞凋亡相关性的研究
目的 研究天花粉蛋白(TCS)诱导宫颈癌CasKi细胞凋亡过程中肿瘤抑制基因OPCML、DAPK甲基化的变化情况,并探讨其在宫颈癌的发生发展中的作用及细胞凋亡和抑癌基因甲基化的相关性,寻找新型的去甲基化药物.方法 ①应用MTT法检测TCS对CasKi细胞增殖抑制的影响;流式细胞仪分析天花粉蛋白对宫颈癌CasKi细胞诱导凋亡作用;②应用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测人宫颈癌细胞OPCML和DAPK基因启动子CpG岛甲基化的状况及天花粉蛋白的去甲基化作用.结果 TCS对宫颈癌CasKi细胞生长有明显抑制作用,流式细胞仪检测见特征性的亚二倍体凋亡峰;MSP检测表明宫颈癌CasKi细胞OPCML、DAPK基因启动子区CpG岛呈高度的甲基化状态,TCS处理后OPCML、DAPK基因启动子区CpG岛无异常甲基化表现.结论 天花粉蛋白具有抑制宫颈癌CasKi细胞生长、诱导CasKi细胞凋亡和对CasKi细胞OPCML、DAPK基因明显的去甲基化作用;其抑制生长和诱导凋亡作用可能与对OPCML、DAPK基因的去甲基化作用有关.TCS有可能是一种新型的甲基化抑制剂.
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天花粉蛋白诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的分子机制研究
目的 利用基因芯片技术研究天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞基因表达谱的影响,以深入探讨其作用的分子机制.方法 提取药物处理前后HeLa细胞总RNA并逆转录成cDNA,在获得的cDNA上分别标记CY3和CY5两种荧光物质,然后与BiostarH-Ⅰ表达谱芯片杂交,扫描后对获得的数据用GenePix Pro 3.0软件分析.结果 两组间存在差异性表达基因78条,其中与细胞凋亡密切相关的NOP56、TNFSF10、CASP9、DFFB等62条基因表达上调,与细胞黏附及细胞间相互作用相关的COL9A3、MGST3、LGALS3BP等16条基因表达下调.结论 天花粉蛋白可以引起HeLa细胞中多个基因的表达改变,基因芯片技术进一步揭示了其诱导HeLa细胞凋亡的作用机制.
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天花粉蛋白对黑色素瘤细胞血管生成拟态及PI3K信号通路的影响
血管生成拟态 (vasculogenic mimicry,VM)是对经典的内皮性血管生成之外肿瘤血管生成方式的重要补充,临床上针对VM抑制将可能成为肿瘤治疗的新靶点[1-2].天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)是从中药栝楼中提取的一种碱性蛋白质,近年来发现对胎盘滋养层的肿瘤及其它多种肿瘤均具有抗肿瘤作用[3-4].本研究观察天花粉蛋白对体外三维培养的恶性黑色素瘤细胞血管生成拟态及磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase, PI3K)信号通路的影响,探讨天花粉蛋白的抗肿瘤作用及机制.
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天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞增殖和细胞调亡的影响
天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)是从葫芦科植物栝(蒌)的块根中提取出来的一种单链核糖体失活蛋白(ribosome-in-activating protein,RIP),主要引发中期流产,抑制爱滋病病毒(HIV)增殖,调节人体免疫功能等多方面的作用[1].
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天花粉蛋白注射液治疗未破裂型输卵管妊娠的临床观察
目的探讨天花粉蛋白注射液治疗未破裂型输卵管妊娠的临床疗效.方法天花粉蛋白注射液皮试阴性后,天花粉试探液0.045 mg肌注2 h后无不适,给予天花粉蛋白1.2mg肌注.结果55例未破裂输卵管妊娠,有52例血β-HCG降为正常.B超提示患侧附件区团块呈吸收状.结论用天花粉蛋白注射液治疗未破裂型输卵管妊娠,方法简便,特别对未生育妇女,有效保全了患者生育功能.
