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PCR-SSCP法检测非小细胞肺癌中FADD基因突变的研究
目的:检测Fas相关死亡结构域蛋白(Fas-associated death domain protein,FADD)基因在人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的突变情况,以探讨该基因在肺癌发生发展中的作用及机制.方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(polymerase chain reaction and single-strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)检测74例NSCLC原发灶癌组织及13例癌旁正常肺组织中FADD基因突变情况.结果:74例NSCLC组织中检出5例发生FADD基因突变,FADD基因突变与癌的淋巴结转移呈显著正相关(rz=0.378,P=0.001),与其它临床病理特征无关.结论:NSCLC中存在着FADD基因突变.FADD基因突变在NSCLC的发生发展中可能起着重要作用.
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中药复方“金复康”抑制肺癌细胞生长机制的研究
目的:本文主要探讨中药复方金复康萃取物对人非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)A549细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制.方法:本文以人非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,应用CCK8试剂盒检测了金复康萃取物对细胞增殖活力的影响,流式细胞技术检测金复康对细胞凋亡诱导作用,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time qPCR,RT-qPCR)检测细胞凋亡相关基因的表达.结果:金复康萃取物对A549细胞增殖有较显著抑制作用,并且存在剂量依赖效应.与对照组相比,金复康处理组细胞数量明显减少,伴随着大量细胞间距增大,失去原有形态,DAPI细胞核染色结果显示细胞核受到损伤.流式细胞检测实验显示金复康明显诱导A549细胞凋亡.RT-qPCR检测发现金复康上调凋亡相关基因转录表达水平.结论:金复康通过诱导细胞凋亡抑制A549细胞增殖,这一过程可能与其诱导凋亡相关基因FADD和GADD45a表达上调有关.
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FADD基因的结构与功能
FADD是新近克隆出的一种能与Fas相互作用而诱导细胞凋亡的蛋白,其基因位于人11号染色体长臂上,由死亡效应结构域(DED)和死亡结构域(DD)两部分组成.FADD基因介导着多种死亡受体诱导的细胞凋亡信号传导通路.FADD基因在T细胞增殖及胚胎发育中也发挥着重要的作用.在基因治疗领域,FADD基因可促进胶质瘤细胞和类风湿性关节炎滑膜细胞的凋亡.有必要在FADD的基因治疗方面加大研究力度,为疾病的基因治疗开辟新的途径.
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PCR-SSCP法检测非小细胞肺癌中FADD基因突变的研究
目的检测Fas相关死亡结构域蛋白(Fas-associated death domain protein,FADD)基因在人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的突变情况,以探讨该基因在肺癌发生发展中的作用及机制.方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(polymerase chain reaction and single-strand conformation polymorphism, PCR-SSCP)检测74例NSCLC原发灶癌组织及13例癌旁正常肺组织中FADD基因突变情况.结果 74例NSCLC组织中检出5例发生FADD基因突变,FADD基因突变与癌的淋巴结转移呈显著正相关(rs=0.378,P=0.001),与其他临床病理特征无关.结论 NSCLC中存在着FADD基因突变.FADD基因突变在NSCLC的发生发展中可能起着重要作用.
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非小细胞肺癌组织中FADD基因的表达及突变分析
背景与目的:Fas相关死亡结构域蛋白(Fas-associated death domain,FADD)是细胞凋亡信号转导过程中重要的转接蛋白,研究表明其异常表达可能与肿瘤关系密切,但有关FADD与人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的研究尚鲜见报道.本研究检测FADD基因在NSCLC中的表达及突变情况,以探讨该基因在肺癌发生发展中的作用及机制.方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(polymerase chain reaction and single-strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)以及免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)分别检测62例NSCLC及13例癌旁非癌肺组织中FADD基因突变及蛋白表达情况,原位杂交法(in situ hybridization,ISH)检测其中30例肺癌组织FADD mRNA表达水平,原位末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUTP-biotin nick labeling,TUNEL)检测62例NSCLC中的癌细胞凋亡.结果:PCR-SSCP检出62例NSCLC组织中有4例N2期组织发生FADD基因突变,提示FADD基因突变与淋巴结转移有关.IHC结果显示:NSCLC组织中FADD蛋白阳性率为80.6%(50/62),其阳性表达程度与肿瘤分化程度呈显著正相关(rs=0.411,P＜0.01),癌组织中FADD阳性表达程度高于癌旁非癌肺组织(P＜0.05).ISH结果显示:FADD mRNA阳性表达与相应组织FADD蛋白阳性表达符合率为88.6%,两者差异无显著性(P＞0.05).所有NSCLC标本均检见癌细胞的凋亡,4例突变的NSCLC组织中FADD蛋白表达阳性,但TUNEL法显示其癌细胞凋亡指数均低于平均凋亡指数.NSCLC组织中,FADD蛋白表达水平与癌细胞凋亡程度之间呈显著正相关(rs=0.599,P＜0.001).结论:NSCLC中存在着FADD基因突变.FADD基因突变与异常表达在NSCLC的发生发展中可能起着重要作用.FADD蛋白表达水平与NSCLC细胞凋亡密切相关.
