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胚胎脊髓移植联合应用bFGF对脊髓损伤后神经再生的影响
目的:探讨胚胎脊髓(fetal spinal cord, FSC)移植联合外源性碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)的应用对脊髓损伤后脊髓神经再生的影响.方法:采用大鼠胸段(T8～Tll)脊髓左侧半横切损伤模型.移植供体为同种异体妊娠14 d的孕鼠,将实验动物分为3组:A组为损伤+FSC移植组;B组为损伤+FSC移植+bFGF组;C组为单纯损伤组.术后l～8周每周行综合行为评分(combined behavioral score, CBS)评定大鼠功能,并取术后8周损伤区脊髓组织0.5 cm作嗜银染色及NF200免疫组织化学检查,分别标记轴突和胶质细胞,进行定量分析,观察神经纤维再生情况.结果:胚胎脊髓移植和外源性bFGF可以防止成鼠脊髓损伤后神经元的萎缩,图像分析发现其作用A、B组优于C组,可以较好的恢复神经元形态.CBS评分提示大鼠神经功能的恢复也有同样趋势,统计学分析治疗组与对照组间有显著性差异.免疫组织化学检查,术后8周A、B组NF着色点较C组密集,且没有明显的胶质增生.结论:脊髓损伤后联合应用胚胎脊髓移植和 bFGF可以防止神经元的萎缩,并且对神经纤维再生及功能的恢复有促进作用.
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盐酸法舒地尔对NF200在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中表达的影响
目的:利用新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)动物模型,检测HIBD脑组织中神经丝蛋白-200 (Neurofilaments Protein-200,NF200)表达的动态变化,观察盐酸法舒地尔(Fasudil Hydrochloride Injection)对大鼠NF200表达的影响及对神经损伤后的保护与修复作用.方法:将新生7d龄Wistar大鼠120只,随机分为假手术组(Sham 组,40只),缺氧缺血作用(HIBD组,40只),法舒地尔治疗组40只,每组再分为6h、12h、24h、72h、7d,5个亚组.Sham组只做左颈总动脉分离.HIBD组,法舒地尔组做左侧颈总动脉永久性结扎及缺氧处理后,分别腹腔注射生理盐水和法舒地尔(10mg/kg).采用免疫组化法检测海马区NF200的表达.结果:Sham组:可见NF200有微量表达,各组间无统计学意义.HIBD组:NF200阳性细胞在造模6h出现表达,12h开始下降,24h降到低,此后逐渐升高.与Sham组NF200阳性细胞数比较差异有统计学意义(P＜0.01).法舒地尔治疗组各时间点NF200的表达均高于HIBD组,差异有统计学意义(P＜0.01).HIBD组和法舒地尔组阳性细胞数明显多于Sham组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:法舒地尔可能通过抑制Rho/Rock通路促进轴突再生和修复进而使NF200的表达增加.
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法舒地尔对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织Nogo髓鞘相关蛋白及NF200表达的影响
目的 探讨法舒地尔对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠Nogo髓鞘相关蛋白(Nogo-A)及NF200表达的影响.方法 将120只新生7日龄Wistar大鼠按随机数字表法分假手术组(40只)、HIBD组(40只)和法舒地尔治疗组(40只),假手术组只做颈总动脉分离后不结扎,直接缝合切口不做缺氧处理,HIBD组造模后腹腔注射9 g/L盐水,法舒地尔组腹腔注射法舒地尔(10 mg/kg).分别于术后6h、12 h、24 h、72 h和7d断颈处死大鼠.HE染色镜下观察各组大鼠脑组织病理变化.免疫组织化学法检测脑组织Nogo-A和NF200表达.结果 1.肉眼观察:假手术组两侧大脑半球对称;HIBD组随时间延长脑组织水肿加重,可见大脑半球坏死灶;法舒地尔组脑组织水肿减轻.2.HE染色:假手术组脑组织结构形态正常;HIBD组可见细胞肿胀,核固缩、裂解,炎性细胞增多;法舒地尔组神经细胞水肿及核固缩数量减少.3.免疫组织化学:假手术组Nogo-A可见少量表达;HIBD组Nogo-A阳性细胞12h开始升高,24 h达峰值,随后表达逐渐降低;法舒地尔组除6h外,各时间点的表达均低于HIBD组(P ＜0.01);HIBD组和法舒地尔组阳性细胞数多于假手术组(P＜0.01).假手术组NF200可见微量表达.HIBD组NF200阳性细胞6h出现表达,12h开始下降,24 h降到低,此后逐渐升高.法舒地尔组各时间NF200的表达均高于HIBD组(P＜0.01),HIBD组和法舒地尔组NF200多于假手术组(P＜0.01).结论 法舒地尔可能通过降低Nogo-A的表达和升高NF200的表达促进新生大鼠HIBD后神经细胞轴突的再生和修复.
关键词： 缺氧缺血性脑损伤 Nogo髓鞘相关蛋白 NF200 法舒地尔 神经再生 -
磁刺激对脊髓损伤后神经再生的影响
目的探讨应用磁刺激(magn etic stimulation, MS)对脊髓损伤后脊髓神经再生的影响.方法利用Al len氏WD技术,以10 g×2.5 cm致伤力造成Wistar大白鼠T8脊髓损伤模型,MS组于术后即刻、1、2、4、8、12、24及48 h分别给予磁刺激,以后每周2次磁刺激至术后第8周;对照组在损伤后不做治疗.2组均于术后第8周取损伤区脊髓组织0.5 cm作NF200免疫组织化学检查,观察神经纤维再生情况.结果术后第8周,NF200免疫组织化学检查发现MS组神经纤维生长情况明显优于对照组, 经统计学分析2组间差异有显著性意义.结论脊髓损伤后应用MS可以保护脊髓神经组织,并且对神经纤维的再生有促进作用.
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大鼠局灶脑缺血区神经元轴突可塑性的实验研究
为探查脑缺血后期神经元轴突在梗塞灶的出芽和再生情况,运用免疫组织化学技术对36只雄性SD大鼠进行了研究.结果:在脑缺血3 d～7周,脑梗塞灶周围区NF200阳性神经元轴突的形态学改变不显著,但在梗塞灶中央区,神经元轴突排列紊乱,粗细不均和断裂,其数量显著减少;而在脑缺血2～6周,脑梗塞灶中央区神经元轴突的数量逐渐增加,其变化在脑缺血6周显著,阳性纤维明显增粗、扭曲和染色加深,并从梗塞灶周围区向中央区延伸.提示:神经元轴突在脑缺血区出芽和再生发生于脑缺血后期,表明神经元对脑缺血发生形态学的可塑性改变.
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硫氧还蛋白对大鼠脊髓损伤后神经元和神经功能的影响
我们建立大鼠脊髓损伤(SCI)模型并在硬膜外置管,每天经硬膜外置管给予一定量硫氧还蛋白(Trx),通过BBB评分观察大鼠脊髓损伤后不同时间后肢运动功能的恢复情况,采用免疫组织化学观察脊髓组织中神经中丝200(NF200)的分布特点,同时计数阳性细胞,探讨硫氧还蛋白对大鼠脊髓损伤后神经元和神经功能的影响.
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参芎葡萄糖注射液对脊髓损伤后运动功能恢复及GAP-43和NF200表达的影响
目的 探讨参芎葡萄糖注射液对急性脊髓损伤后运动功能恢复的影响和可能机制.方法 应用改良的Allen's法复制大鼠脊髓损伤模型60只,随机分为对照组(30只)和治疗组(30只),在建模后1、7、14、21和28 d用BBB评分和斜板试验评定脊髓损伤后后肢运动功能恢复并获取损伤段脊髓标本,用免疫组织化学方法和免疫印迹法检测两组脊髓在损伤后不同时段生长相关蛋白(GAP-43)和神经丝蛋白(NF200)的表达,对BBB评分、GAP-43、NF200进行相关分析.结果 BBB评分和斜板试验结果提示,治疗组大鼠7、14、21、28 d时的神经功能恢复较对照组明显提高(P＜0.05);免疫组织化学方法和免疫印迹法提示,与对照组相比治疗组在一定时间段能上调损伤脊髓区GAP-43和NF200的表达(P＜0.05);在术后7d和14d,BBB评分与GAP-43、NF200的表达正相关,在术后7、14、21、28 d GAP-43与NF200的表达正相关.结论 参芎葡萄糖注射液能促进损伤脊髓的功能恢复,其机制可能与参芎葡萄糖注射液上调损伤区脊髓GAP-43、NF200的表达有关.
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人参皂甙Rg1对原代培养胎鼠脑神经细胞存活和可塑性的影响
目的:研究人参皂甙Rg 1对原代培养胎鼠脑神经细胞存活和可塑性的影响.方法:实验分为:实验组(人参皂甙Rg 1 1 mg/L,10 mg/L,100 mg/L),阳性药物对照组(bFGF 20 μg/L)以及空白对照组.相差倒置显微镜观察细胞生长情况,并测量细胞突起的长度;用MTT法测定培养细胞的存活率;Western-blot法检测神经生长相关蛋白GAP-43和神经丝蛋白NF-200的表达.结果:(1)细胞平均突起长度:实验高中剂量组神经元突起的平均长度均长于对照组.(2)MTT值:实验高中低剂量组的灰度均明显大于对照组.(3)GAP 43和NF 200的表达:实验高中剂量组的蛋白表达均明显大于对照组.结论:人参皂甙Rg 1对于体外培养的胎鼠脑神经细胞的存活有较强的维持作用,并能促进突起生长,使神经可塑性相关蛋白表达上调.
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蛛网膜下腔置管灌注rhNCAM1促损伤脊髓再生修复的实验研究
目的:探讨神经细胞粘附分子1(neural cell adhesion molecule l,NCAMl)灌注治疗小鼠脊髓撞击伤后对脊髓修复及神经功能恢复的影响.方法:采用改良NYU(纽约大学)Weight-Drop lmpactor打击装置,以25 gcf(10 g重量从25 mm高度自由落下)制备脊髓损伤模型(打击面积为2 mm×2 mm).将SA小鼠30只随机分为3组:实验组(rhNCAMI组,n=10)于损伤即刻经蛛网膜下腔注入rhNCAMI蛋白2μl(约100μg),隔日1次,共5次;对照组(生理盐水组,n=10)于损伤即刻经蛛网膜下腔注入生理盐水2μl,隔日1次.共5次;假手术组仅做椎板切除术,术后缝合切口.观察各组小鼠1-8周行为学改变,行BBB评分.第8周灌注固定、取材,采用神经纤维200(NF200)免疫荧光检测,进行图像分析及统计处理.结果:(1)行为学评估:实验组BBB评分在各时间点均显著高于对照组(P<0.01);(2)NF200免疫荧光染色:实验组阳性着色明显多于、并强于对照组;实验组无组织瘢痕结构面积明显小于对照组.结论:蛛网膜下腔应用rhNCAM1后可能改善SCI后损伤区及两端的神经细胞之间的功能,促进轴突再生,促进双下肢运动功能的恢复.
