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天花粉蛋白与重组人干扰素α-1b协同抑制人肝细胞癌的实验研究
目的:联合应用天花粉蛋白(TCS)与重组人干扰素α-1b(rIFNα-1b),观察对肝癌的抑瘤作用及相互影响.方法:MTT比色法观察两药对不同肝细胞株的细胞毒;荷瘤裸鼠LCI-D20模型观察体内抑瘤作用.结果:体内抑瘤率分别为:TCS组48.5%,IFN组69.2%,联用组92.2%.TCS或IFN均有显著抑瘤作用(P＜0.01).联合用药组与单独用药组相比差异有统计学意义(P＜0.05),协同抑瘤作用明显.TCS对不同肝细胞株有敏感性差异:TCS对正常肝细胞(L-02)、肝癌高低转移细胞株(MHCC97H、MHCC97L)的72h细胞毒作用IC50分别为21.1μg/ml、6.9μg/ml、5.0μg/ml.联用IFN能提高L-02的IC50、降低MHCC97H的IC50,进一步提高安全性.IFN能拮抗TCS的肝脏毒性、提高抑瘤效果;TCS亦能改善干扰素对血液系统的干扰.结论:TCS对肝癌抑瘤作用明显.联合用药既能减少不良反应、又能增强抑瘤作用.
关键词： 天花粉蛋白 重组人干扰素α-1b 协同抑瘤 肝细胞癌 -
天花粉蛋白诱导的胃癌细胞凋亡与bcl-2表达下降有关
目的在体外实验中,探索天花粉蛋白诱导胃癌细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与bcl-2之间的关系.方法以细胞形态学和TUNEL染色法,定性、定量地研究天花粉蛋白与胃癌细胞凋亡的关系;通过免疫组化法和Northern Blot杂交法检测凋亡相关基因bcl-2的表达.结果天花粉蛋白在体外能诱导人胃癌细胞发生凋亡,下调bcl-2的表达.结论诱导胃癌细胞凋亡是天花粉蛋白抗胃癌作用的机制之一,天花粉蛋白可能经下调凋亡相关基因bcl-2的表达而诱导胃癌细胞发生凋亡.
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天花粉蛋白抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长及逆转syk基因甲基化的研究
目的:研究天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和诱导细胞凋亡过程中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,syk)基因甲基化状态的改变,以寻找新的去甲基化药物.方法:采用MTT法分析TCS对MDA-MB-231细胞增殖的影响,Giemsa染色法观察TCS作用后细胞形态学的变化,FCM检测不同浓度TCS作用48 h后MDA-MB-231细胞凋亡和细胞周期分布情况,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测MDA-MB-231细胞经TCS作用前后syk基因甲基化状态的改变,RT-PCR方法分析TCS作用后MDA-MB-231细胞中syk、Dnmts和MBD2 mRNA表达量的变化,比色法检测TCS对MDA-MB-231细胞DNA甲基转移酶活性的影响.结果:TCS体外对MDA-MB-231细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05),并呈时间和浓度依赖性;TCS可诱导MDA-MB-231细胞出现空泡样变性、核固缩和核碎裂等细胞凋亡形态学改变,能使MDA-MB-231细胞凋亡并可诱导细胞生长周期阻滞,凋亡率明显高于对照组(P<0.05),并呈时间和浓度依赖性.TCS可以逆转MDA-MB-231细胞syk基因启动子区甲基化状况;MDA-MB-231细胞syk mRNA表达阴性,经TCS作用后,syk mRNA表达阳性;MDA-MB-231细胞经TCS作用48 h前后Dnmts和MBD2 mRNA表达量没有明显变化(P>0.05),但Dnmts活性降低.结论:TCS在抑制MDA-MB-231细胞增殖、诱导细胞凋亡过程中对syk基因具有明显的去甲基化作用,因而可能成为新型的去甲基化药物.
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天花粉蛋白两种方法治疗输卵管妊娠的临床观察
目的 通过观察天花粉蛋白孕囊内介入治疗和宫颈注射治疗输卵管妊娠的疗效和不良反应,探讨孕囊内注射天花粉蛋白的临床价值,比较2种治疗方法的疗效.方法 未破裂型输卵管妊娠患者95例,在患者知情同意的情况下,39例行孕囊内注射(孕囊组),56例行宫颈注射(宫颈组),2组患者年龄、孕次及一般资料差异均无统计学意义.比较2组治疗的成功率、血中人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-hCG)恢复到正常(≤100 U/L)的时间、患者住院时间以及不良反应发生情况.结果 孕囊组和宫颈组治愈率分别为97.4％与71.4％,差异有统计学意义(P＜0.05);孕囊组β-hCG恢复到正常的时间(14.5±7.2)d,住院时间(7.3±3.0)d,均显著少于宫颈组的(20.6 ±9.3)d和(15.6 ±6.0)d,2组比较差异有统计学意义(P＜0.05);孕囊组腹痛发生率(82.1％)明显高于宫颈组(19.6％),差异有统计学意义(P＜0.05),其他不良反应发生情况2组差异无统计学意义.结论 相对于宫颈注射治疗天花粉蛋白治疗输卵管妊娠,孕囊内注射天花粉蛋白介入治疗起效快、疗程短,对于未破裂型输卵管妊娠具有更好的治疗效果.
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天花粉蛋白治疗异位妊娠的临床应用及不良反应分析
目的 探讨天花粉蛋白治疗异位妊娠的临床应用价值及不良反应.方法 选择124例异位妊娠未破裂型患者,分别采用肌肉注射、官颈注射和孕囊注射天花粉蛋白1.2 ～2.4 mg,观察其疗效和不良反应.结果 124例均保守治疗成功,有18例辅以甲氨蝶呤肌肉注射或天花粉蛋白介入治疗,介入治疗后3～5d大部分患者血人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-hCG)下降60％以上.不良反应:44例患者出现发热,四肢酸痛,注射部位红肿、疼痛、皮疹；19例治疗后24h内出现腹痛加剧伴腹泻,个别出现呕吐,腹痛为阵发性胀痛或绞痛；15例出现腹部肌紧张、压痛、反跳痛,应与异位妊娠破裂鉴别；15例患者生命体征平稳,腹部叩诊移动性浊音阴性,发热时脉搏快但有力,床边B超检查盆腔、腹腔未见积液,予以止泻、解痉、调节肠功能等处理,24 ～ 48 h症状减轻；3例出现胸闷、呼吸困难,吸氧后缓解.结论 天花粉蛋白治疗血β-hCG值较高但胎膜未破裂的异位妊娠效果良好,但不良反应较大,应采取预防措施并给予对症治疗.
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宫颈注射天花粉蛋白治疗宫颈妊娠的疗效观察
目的 探讨宫颈注射天花粉蛋白治疗宫颈妊娠的疗效.方法 3例确诊为宫颈妊娠患者,肌肉注射地塞米松5 mg防过敏反应,再取皮试液做皮内试验,观察无不良反应后,于宫颈3点、9点处各注射天花粉蛋白1.2 mg,并间隔3～5d复查血人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-hCG),每周复查B超及血常规.结果 3例血β-hCG均下降至100 U/ml以下,B超提示宫颈包块或孕囊周围血流消失,行清宫术,术中、术后出血少于1000 ml,均治愈出院,保全了子宫,无明显不良反应.平均住院22 d.结论 宫颈注射天花粉蛋白治疗宫颈妊娠效果明显.
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异位妊娠保守治疗中二次使用天花粉蛋白的临床研究
目的 探讨在异位妊娠保守治疗中二次使用天花粉蛋白的临床意义.方法 40例异位妊娠者,首次选用天花粉蛋白保守治疗后7d出现血中人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)反弹,需继续巩固治疗.根据患者知情选择分为3组:A组16例,选择米非司酮巩固治疗;B组12例,选择氨甲喋呤(MTX)巩固治疗;C组12例,选择二次使用天花粉蛋白巩固治疗.观察每组血β-HCG下降至100U/L的情况及所需时间,分析不良反应情况.结果 A、B、C组巩固治疗的有效率分别75.0％、83.3％、100％,C组住院所需时间明显低于A、B组(P＜0.05),且与入院时血β-HCG水平呈正相关.结论 二次使用天花粉蛋白巩固治疗异位妊娠临床效果显著,但需严格把握适应证及预防过敏性反应.
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超声引导下妊娠囊内注射天花粉蛋白治疗异位妊娠疗效观察
目的 探讨超声引导下妊娠囊内注射天花粉蛋白治疗异位妊娠的1临床价值.方法 38例异位妊娠未破裂型患者,根据患者意愿,在知情同意的情况下分为2组:天花粉蛋白介入组24例(天花粉组),其中5例血人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)≥15 000 U/L,12例4000~15 000 U/L,7例≤4000 U/L.在超声引导下经阴道后穹窿穿刺附件区包块,注射天花粉蛋白1.2～2.4 mg;14例β-HCG>1000 U/L的异位妊娠未破裂型患者为对照组,患者知情选择手术或口服甲氨蝶呤(MTX)治疗.结果 天花粉组24例均治疗成功,大部分患者天花粉介入治疗后3~5 d血β-HCG下降90%以上(治疗成功),3例辅以肌注MTX或天花粉蛋白注射液治疗成功,治疗成功率100%.对照组14例中,12例121服MTX治疗2~3周后,8例血β-HCG下降80%以上(治疗成功);4例口服MTX治疗失败转为手术治疗,另外2例β-HCG>4000 U/L的患者直接行手术治疗.结论 超声引导下天花粉介入治疗成功率高,为血β-HCG值较高的未破裂型异位妊娠提供了一种新的治疗方法.
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天花粉蛋白治疗子宫切口瘢痕妊娠的临床疗效及不良反应
目的：探讨天花粉蛋白治疗剖宫产子宫切口瘢痕妊娠的临床应用价值及不良反应。方法21例剖宫产子宫切口瘢痕妊娠者，在患者知情同意下，根据注射部位不同分成肌肉注射组（肌肉组，10例）和宫颈注射组（宫颈组，11例），皮试阴性后注射天花粉蛋白1．8～3．6 mg治疗，观察治疗后7 d血中人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）下降程度和不良反应。结果2组均治疗成功。治疗后7 d，肌肉组有8例β-HCG下降70％以上，2例β-HCG下降幅度＜50％，其中1例给予第2次天花粉蛋白肌肉注射，1例辅以甲氨蝶呤治疗。肌肉组有10例出现发热，四肢酸痛，注射部位红肿疼痛、皮疹；1例出现胸闷、呼吸困难，给予抗过敏和吸氧后缓解。宫颈组天花粉蛋白治疗后7 dβ-HCG全部下降70％以上，有4例出现发热、四肢酸痛，但症状比肌肉组轻。结论天花粉蛋白治疗剖宫产子宫切口瘢痕妊娠疗效较好，但存在一定的不良反应，肌肉注射的不良反应较大，宫颈注射的不良反应相对较小。无论采取何种注射方法，给药后均应严密观察不良反应，给予对症处理。
关键词： 剖宫产子宫切口瘢痕妊娠 不良反应 天花粉蛋白 -
羊膜腔注射天花粉蛋白终止疤痕子宫中期妊娠的临床观察
瘢痕子宫是指剖宫产手术或肌壁间肌瘤剥除术后的子宫。天花粉蛋白是我国首先发现的世界上第一个具有抗生育作用的植物性蛋白药物［1］。将天花粉蛋白应用于疤痕子宫中期妊娠（妊娠第13～27周末）的引产，疗效显著，现报道如下。
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聚乙二醇化天花粉蛋白注射液中天花粉蛋白的HPLC测定
建立了HPLC法检测聚乙二醇化天花粉蛋白注射液中天花粉蛋白的含量.采用硅胶基TSK-G3000SW凝胶柱,0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-0.15mol/L氯化钠溶液-95%乙醇(45∶45∶10)为流动相,检测波长222nm.灭花粉蛋白在5～50μg/ml范围内线性关系良好.平均回收率为100.0%,RSD为1.8%.
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天花粉蛋白对结肠癌细胞株CMT-93凋亡及增殖的影响
目的 探讨低剂量天花粉蛋白(TCS)对结肠癌细胞株CMT-93凋亡及增殖的影响.方法 以不同质量浓度的TCS对体外培养的CMT-93进行干预,设立未添加TCS的CMT-93作为对照组,利用实时细胞动态监测(RTCA)系统检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡,Real-Time PCR检测细胞凋亡相关基因的表达,Western blotting检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Akt和γ-H2AX蛋白表达以及Akt磷酸化水平(pAkt 473和pAkt 308蛋白表达).结果 与对照组比较,5.0 μg/mL TCS干预能使CMT-93增殖活性降低,细胞凋亡率升高;促凋亡相关蛋白Bid、Bax、Bad mRNA表达上调;pAkt 473和pAkt 308蛋白表达减少,γ-H2AX蛋白表达增加.结论 TCS对结肠癌细胞株CMT-93具有诱导凋亡和抑制增殖的作用;其机制可能与TCS通过抑制Akt的活性,进而激活促凋亡相关蛋白诱导细胞发生凋亡,以及TCS的DNA损伤作用有关.
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宫颈注射天花粉蛋白治疗输卵管妊娠
目的 通过比较天花粉蛋白宫颈注射和肌肉注射的疗效和副反应，探讨宫颈注射天花粉蛋白治疗输卵管妊娠的临床价值。方法 对输卵管妊娠患者18例行天花粉蛋白宫颈注射和20例行肌肉注射，通过2～3d复查尿hCG定量、B超监测盆腔包块大小变化，了解临床疗效。通过用药后患者头痛、咽痛、四肢酸痛及发热发生率和程度评价两种用药方法 的副反应发生和严重程度。结果 两组患者年龄和一般资料无显著性差异，肌肉注射组和宫颈注射组治愈率分别达90％与94％，无显著性差异。宫颈注射组的副反应轻于肌肉注射组，尤其在体温升高及持续时间上，有显著性差异(P<0．05)。结论 天花粉蛋白治疗输卵管妊娠总有效率达92％，宫颈注射与肌肉注射效果相似，而全身副反应前者显著较轻。
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三种药物终止中孕的比较研究
目的研究口服米非司酮配伍米索前列醇终止中期妊娠的效果.方法观察效果并与利凡诺及天花粉羊腹腔内注射法比较.结果米非司酮配伍米索前列醇组的有效率为98.1%,与利凡诺及天花粉组之间无明显差异.完全流产率为67.3%,平均引产时间为55.6±4.5h,均介于其它两组之间.平均出血量为95.3±82.6ml,大于天花粉组,与利凡诺组无明显差异.仅有轻度胃肠道副反应.结论米非司酮配伍米索前列醇终止中孕是安全有效的方法.
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复方天花粉保守治疗异位妊娠58例
异位妊娠是妇产科的常见病,直接危及孕妇的生命安全.本文总结了1986～1997年间我院收治的异位妊娠患者中,用复方天花粉治疗的体会.
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天花粉蛋白基因的克隆及其诱导大肠癌细胞LoVo凋亡的作用
目的 克隆天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)基因及研究重组TCS诱发大肠癌细胞LoVo凋亡的作用.方法 RT-PCR法克隆TCS基因的cDNA序列并表达纯化TCS;MTT法测定TCS对LoVo细胞生长抑制作用,评估TCS体外诱导LoVo凋亡的作用;琼脂糖凝胶电泳法进行细胞凋亡DNA分析.结果 成功克隆了TCS基因,TCS对LoVo细胞体外生长具有抑制作用, DNA电泳呈梯状条带,表明TCS对LoVo细胞确实存在诱导凋亡作用,TCS对LoVo细胞半数抑制浓度(IC50)为45.0 μg/mL.结论 TCS体外能抑制LoVo细胞生长并诱导细胞凋亡,为今后TCS应用于大肠癌的临床治疗提供了重要的实验依据.
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天花粉蛋白诱导胃癌细胞MKN-45凋亡中P53、Bcl-2、c-myc蛋白表达变化
目的选用对天花粉蛋白敏感的胃癌细胞株MKN-45,研究天花粉蛋白抗肿瘤机制.方法免疫组化法测定凋亡相关基因(P53、Bcl-2、c-myc)的表达变化.结果胃癌细胞MKN-45经天花粉蛋白(1μg/ml,24、48 h)处理后,凋亡相关基因P53、Bcl-2、c-myc表达未出现显著性改变.经5μg/ml的天花粉蛋白处理24 h后,得到相同结论.但当MKN-45细胞经5 μg/ml的天花粉蛋白处理48 h后,发现野生型P53蛋白表达增加,而Bcl-2、c-myc蛋白表达未出现显著性改变.结论天花粉蛋白可诱导MKN-45细胞凋亡,可能与上调野生型P53基因的表达有关.
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大苞栝楼的药用价值分析
比较了常用的三种提取天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)方法的提取效果,通过SDS-PAGE分析了大苞栝楼籽的蛋白组成和分子质量分布,以及大苞栝楼的根、叶、茎和愈伤组织中蛋白组成的异同,同时分析了各个器官中26ku蛋白的氨基酸组成.结果表明,Wong的方法较好;栝楼和大苞栝楼的图谱符合程度为56.3%,图谱特征系数为43.7%;大苞栝楼的各个器官的蛋白组成差异较大,其中多数为低分子质量蛋白,具有很多共同的谱带,而且,根、叶、茎和种子中都具有与TCS和核糖体失活蛋白TCK电泳行为相似的蛋白,氨基酸分析也证明了它们组成上的一致性.从而证明大苞栝楼具有潜在的药用价值.
关键词： 栝楼 大苞栝楼 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 天花粉蛋白 氨基酸组成 -
天花粉蛋白与甲氨蝶呤治疗子宫瘢痕妊娠的疗效比较的多中心研究
目的：通过多中心研究探索天花粉蛋白与甲氨蝶呤对于子宫瘢痕妊娠的治疗效果。方法选取信阳市中心医院、郑州大学第二附属医院、驻马店市中心医院妇产科收治的子宫瘢痕妊娠患者共90例，采用随机数字表将其分为2组。对照组45例，给予甲氨蝶呤臀部肌注射，一次50 mg，并空腹服用米非司酮50 mg，2次/天，1周为1个疗程；实验组45例，予天花粉蛋白，肌肉注射1.2 mg/次，2次/天，同时口服布洛芬，0.6 g/d，1周为1个疗程。1个疗程结束后，对比治疗前后2组患者血清中孕酮、β-HCG水平，及患者用药后产生的副反应。结果治疗后孕酮水平均明显降低，且实验组血清中的孕酮水平较对照组降低显著，其差异具有统计学意义（P＜0.05）。治疗后血清β-HCG水平明显降低，且实验组血清中的β-HCG水平降低显著，其差异具有统计学意义（P＜0.05）。患者副反应比较中，实验组明显低于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论对于治疗子宫瘢痕妊娠，天花粉蛋白和甲氨蝶呤都有一定疗效，但天花粉蛋白对于降低血清中孕酮、β-HCG水平较甲氨蝶呤效果更加显著，用药之后天花粉蛋白组的副反应率低。
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天花粉蛋白诱导H22肝癌细胞凋亡的研究
目的:观察天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)在体外诱导H22肝癌细胞凋亡的效果.方法:以不同剂量的TCS加入到H22肝癌细胞溶液中,在24孔培养板上培养72h后荧光染色并涂片,激光共聚焦显微镜下观察TCS诱导H22肝癌细胞凋亡的作用效果.结果:10μg/ml浓度的TCS就可诱导H22肝癌细胞出现典型的凋亡形态学特征.经统计学分析,100μg/mlTCS组与50μg/mlTCS组间差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间差异均有统计学意义(P<0.01).TCS的作用浓度与凋亡指数间有正相关关系(r=0.9713,P<0.01).结论:TCS在体外可诱导H22肝癌细胞发生凋亡,诱导H22肝癌细胞凋亡是TCS抗肝癌作用的机制之一,具有成为肝癌治疗新药的潜在价值.
