首页 > 文献资料
-
基于植株性别差异的天花粉多糖、蛋白质含量比较
目的：比较雌雄株栝楼根中多糖、蛋白质含量差异，为天花粉主要来源于雄株栝楼的根提供理论依据。方法：水提醇沉法提取可溶性多糖，硫酸蒽酮比色法检测多糖含量；丙酮分级沉淀法提取天花粉蛋白，考马斯亮蓝染色紫外比色法检测蛋白含量。结果：雌、雄株栝楼根中多糖含量分别为2.628%、3.237%；雌、雄株天花粉蛋白含量分别为0.193%、0.280%，雄株天花粉多糖、天花粉蛋白含量均高于雌株。结论：以多糖和蛋白质含量为指标，雄株根入药优于雌株。
-
天花粉蛋白对A549细胞增殖和细胞凋亡的影响
目的 观察天花粉蛋白对人肺腺癌细胞株A549生长增殖的影响和在体外诱导A549肺腺癌细胞凋亡的效果.方法 应用MTT法检测栝萎中提取的天花粉蛋白对A549细胞生长增殖的影响,DNA Ladder凝胶电泳及流式细胞术检测天花粉蛋白对A549细胞的诱导凋亡作用.结果 经天花粉蛋白处理后A549细胞生长明显受抑,并呈一定的剂量时效依赖性;流式细胞仪直方图出现明显的亚二倍体峰,经TCS(40 μg/ml)处理48 h、72 h后A549细胞的凋亡率分别为(27.00±2.08)%和(39.43±4.92)%,均高于顺铂组(2 μg/ml)(P＜0.01).结论 天花粉蛋白在体外能抑制A549肺腺癌细胞的生长繁殖,并能诱导该细胞发生凋亡.
-
天花粉蛋白诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及APC基因去甲基化
目的:研究天花粉蛋白(TCS)抗宫颈癌作用机制.方法:MTT还原法检测TCS对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用,流式细胞仪检测TCS对HeLa细胞周期及凋亡率的影响,MSP检测TCS作用前后APC基因启动子甲基化状态.结果:TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用,呈剂量依赖性;TCS可以将HeLa细胞阻滞于S期;TCS诱导HeLa细胞发生凋亡,有剂量依赖性;80 mg/L TCS处理HeLa细胞48 h后,APC基因启动子出现去甲基化.结论:TCS对HeLa细胞有明显抑制作用,抑制机理与将HeLa细胞阻滞于S期、诱导细胞凋亡及APC基因启动子出现去甲基化有关,TCS有良好的抗宫颈癌临床应用前景.
-
天花粉蛋白注射终止瘢痕子宫、前置胎盘中期妊娠的效果观察与护理
总结了48例天花粉蛋白注射终止瘢痕子宫、前置胎盘中期妊娠的效果观察与护理.护理措施包括心理护理、加强观察、引产指导和不良反应处理.认为天花粉蛋白注射液用于瘢痕子宫、前置胎盘的中期妊娠引产可降低孕妇的风险系数.
-
天花粉蛋白对小鼠单纯疱疹病毒感染性脑损伤的保护作用
目的探讨天花粉蛋白对小鼠实验性单纯疱疹病毒感染性脑损伤的保护作用.方法动物随机分为3组,空白对照组(空白组),模型对照组(模型组),模型+天花粉蛋白处理组(治疗组).小鼠颅内接种单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)建立病毒性脑炎模型,于接种HSV-1前30 min腹腔注射天花粉蛋白注射液,接种病毒后1,12,24,48 h、4和7 d测定脑组织含水量;感染后7 d测定脑组织病毒滴定度,观察脑组织形态变化及动物神经症状评分.结果天花粉蛋白治疗组于接种HSV-1后48 h至7 d脑组织含水量明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.05),治疗组脑组织病毒滴度为1.16±0.45,明显低于模型组的2.89±0.44,差异有显著性;治疗组神经缺陷症状评分也明显低于对照组,病理形态观察治疗组脑组织间质水肿较轻,神经元无浓染、无坏死.结论天花粉蛋白对小鼠实验性单纯疱疹病毒感染性脑损伤具有保护作用.
-
天花粉蛋白对体内体外单纯疱疹病毒-1的抑制作用
目的 探讨天花粉蛋白对体内体外单纯疱疹病毒-1(HSV-1)的抑制作用.方法 动物随机分为模型对照组和天花粉蛋白治疗组,小鼠颅内接种HSV-1建立病毒性脑炎模型,治疗组于接种HSV-1前30 min腹腔注射天花粉蛋白注射液,接种病毒后12、24、48和96 h、7 d分别测定各组脑组织病毒滴定度.培养神经细胞分为正常对照组、病毒对照组、药物预处理组,接种病毒后12、24、48和96 h分别测定各组培养神经细胞的病毒滴定度.结果 天花粉蛋白治疗组于小鼠颅内接种HSV-1后12、24、48和96 h、7 d脑组织病毒滴度分别为(1.32±0.39)、(1.27±0.44)、(1.33±0.41)、(1.29±O.48)、(1.16±0.45),明显低于模型组(2.91±0.55)、(2.95±O.56)、(2.93±O.54)、(2.89±0.58)、(2.89±O.44),差异有显著性(P<0.001).药物预处理组在12、24、48和96 h后培养神经细胞病毒滴度分别为(1.12±0.34)、(1.18±0.40)、(1.24±0.38)、(1.26±O.42),明显低于病毒对照组(2.65±0.64)、(2.59±O.53)、(2.83±0.55)、(2.82±O.57),差异有显著性(P
-
TSLC1基因甲基化与宫颈癌HeLa细胞凋亡相关性的研究
目的 研究天花粉蛋白诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中肿瘤抑制基因TSLC1的甲基化的变化情况,并探讨其在宫颈癌的发生发展中的作用及细胞凋亡和抑癌基因甲基化的相关性,寻找新型的去甲基化药物.方法 应用MTT法检测对HeLa细胞增殖抑制的影响;流式细胞仪分析天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞诱导凋亡作用;甲基化特异性PCR技术(MSP)检测天花粉蛋白处理前、后宫颈癌HeLa细胞中TSLC1基因启动子区CpG岛的甲基化的变化情况.结果 宫颈癌HeLa细胞中TSLC1基因启动子区CpG岛是呈高度的甲基化状态,经天花粉蛋白处理后,HeLa细胞生长明显受抑,流式细胞仪分析出有特征性的亚二倍体凋亡峰,TSLC1基因启动子区CpG岛无异常甲基化表现.结论 天花粉蛋白诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中对TSLC1基因有明显的去甲基化作用,可能是新型的甲基化抑制剂,肿瘤细胞凋亡与抑癌基因的甲基化失活之间可能存在某些相关性.并且TSLC1基因甲基化的检测有可能成为宫颈癌的早期诊断和指导临床治疗的又一指标.
-
免疫毒素EGF-TCSredlk的表达及其活性测定
目的 表达新型免疫毒素EGF-TCSredlk,并进行抗人胃癌细胞活性的初步测定.方法 利用大肠杆菌系统表达抗胃癌重组免疫毒素EGF-TCSredlk,表达产物经Ni-NTA Agrose亲和层析柱纯化并进行特异性杀伤活性检测.结果 该新型免疫毒素以可溶性形式表达于大肠杆菌培养上清中,并获得有效纯化,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法初步检测其对入胃癌细胞MGC803具有选择性杀伤活性.结论 成功制备了具有抗入胃癌细胞活性的新型免疫毒素EGF-TCSredlk,为其进一步的基础研究和临床应用研究奠定了基础.
-
EGF-Linker-TCS融合蛋白诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡
目的 表达和纯化由人表皮生长因子、柔性肽和天花粉蛋白组成的融合蛋白(EGF-Linker-TCS),检测其对肿瘤细胞的杀伤能力并探讨其在肿瘤治疗中的可能作用.方法 诱导、表达EGF-Linker-TCS嵌合毒素,使用HiTrap Chelating亲和层析纯化,采用生长曲线、结晶紫法、电镜和流式细胞仪等技术研究EGF-Linker-TCS对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用.结果 EGF-Linker-TCS纯度达到95%,细胞活性检测证明EGF-Linker-TCS能够明显抑制肝癌细胞的生长和集落形成,0.1μg/ml EGF-Linker-TCS和1μg/ml EGF-Linker-TCS作用于肝癌BEL-7402细胞,集落形成率分别为(15.17±1.19)%和(7.83±1.32)%,明显低于对照组(31.23±3.98)%(P＜0.05).EGF-Linker-TCS对BEL-7402细胞有较强的细胞毒作用,IC50为10.98 μg/ml.结论 EGF-Linker-TCS嵌合毒素对肝癌BEL-7402细胞有增殖抑制和诱导细胞凋亡作用,具有治疗肝癌的潜在价值.
-
天花粉蛋白诱导小鼠前列腺癌细胞
目的:研究天花粉蛋白诱导小鼠前列腺癌细胞RM-1凋亡的作用,并探讨其作用机制.方法:将不同浓度的天花粉蛋白作用于小鼠RM-1前列腺癌细胞,用MTT法检测其半数抑制浓度(IC50),用这一浓度作用于RM-1细胞一定时间后,通过Hoechest33258荧光染色、流式细胞仪检测RM-1细胞凋亡的情况.采用Western Blot检测凋亡基因bax蛋白表达的变化.结果:MTT法测得天花粉蛋白对RM-1细胞的IC50值为117.32 mg/L;Hoechest33258荧光染色提示天花粉蛋白干预后RM-1细胞出现凋亡小体;流式细胞仪检测结果显示随着天花粉蛋白干预时间的延长,RM-1细胞凋亡率增加,同时凋亡基因bax蛋白的表达在天花粉蛋白干预后逐渐增加.结论:天花粉蛋白具有抗小鼠前列腺癌细胞RM-1的作用,其作用机制之一是诱导肿瘤细胞凋亡;bax基因在天花粉蛋白诱导RM-1细胞凋亡过程中起重要调控作用.
-
结肠癌富伴侣分子疫苗的制备及其抗癌作用研究
目的 研究高效结肠癌富伴侣分子疫苗的制备及其抗癌治疗作用.方法 结肠癌CT26细胞在0.1 mg/L天花粉蛋白的培养基中不同温度下培养,诱导癌细胞伴侣分子的表达和抗原肽的合成.超声裂解并离心,盐析法分离上清蛋白,低温透析去除相对分子质量低于50 000和高于300 000的蛋白分子.凝胶过滤结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)收取相对分子质量70 000、90 000、95 000、110 000和170 000处峰段蛋白.对所获蛋白定性定量,检测不同蛋白复合物的T细胞增殖、抗结肠癌自然杀伤细胞(NK)和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性等主要抗癌效应.结果 主要伴侣分子(HSP60、HSP70、HSP90、gp96、HSP110和HSP170)的抗原肽复合物被较好提取,制备了浓缩的富伴侣分子抗原肽.体外抗癌实验显示,相对于普通处理的瘤苗,各肠癌瘤苗的细胞增殖、NK和CTL细胞活性等主要抗癌效应均有明显提高(P<0.01).结论 凝胶过滤结合SDS-PAGE法可以更好地提取制备浓缩的富伴侣分子抗原肽:热应激和天花粉蛋白处理可使抗原肽的表达量增加和免疫原性提高,从而诱导出更强的抗癌免疫.其中42℃热应激加天花粉蛋白组瘤苗的抗癌作用强.
-
天花粉蛋白诱导胃癌细胞MKN-45凋亡的研究
目的:研究天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)对胃癌细胞的作用,探讨其治疗胃癌的可能作用机制.方法:采用生长曲线、集落形成实验、MTT法、电镜、TUNEL染色和流式细胞仪等技术,研究TCS对胃癌细胞MKN-45的增殖抑制和诱导凋亡作用.结果:TCS能够明显抑制胃癌细胞MKN-45的生长和集落形成,1μg/ml和0.1μg/mlTCS作用MKN-45后,细胞集落形成率分别为(6.63±1.31)%和(14.68±1.27)%,明显低于对照组的(23.67±2.76)%(P<0.05).TCS对MKN-45细胞有较强的细胞毒作用,其IC50约为10.6μg/ml.TCS作用于MKN-45细胞后,光镜和电镜下能见到典型的细胞凋亡形态学特征:细胞核染色质致密浓缩,或聚集于核膜呈新月形,凋亡小体形成等.流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体"凋亡峰",细胞凋亡率在5.32%～27.4%,细胞凋亡与TCS作用时间和浓度相关.TCS对胃癌细胞MKN-45的作用表现为周期特异性,TCS作用48hG0/G1期细胞从67.2%下降到43.9%,S期细胞从26.7%上升到45.3%,G2/M期细胞无变化.结论:TCS抑制胃癌细胞MKN-45增殖和诱导细胞凋亡,主要作用于细胞周期的S期,具有治疗胃癌的潜在价值.
-
重组免疫毒素EGF-TCS对荷瘤小鼠抗肿瘤效果的实验研究
目的 使用EGF-TCS重组蛋白对裸鼠的肿瘤模型进行体内抑瘤实验,观察其抗肿瘤效果.方法 分别给裸鼠右腋皮下接种人肝癌BEL-7402细胞,接种后第6天,尾静脉注射100、50和25 μg/kg EGF-TCS进行治疗,设空白对照组,停药后第2天处死小鼠,称量瘤重,计算抑瘤率;肿瘤组织做免疫组织化学实验,从而研究其抑制肿瘤生长的途径.结果 高、中和低剂量组的抑制率分别为71.3%、60.87%和45.22%,对治疗结束后各组平均瘤重进行统计学分析,结果有显著性差异(F=8.712,P=0.006);免疫组化结果显示EGF-TCS可以明显的抑制肿瘤血管的形成,高剂量组肿瘤组织未有可见血管,中低剂量组肿瘤组织血管明显少于模型组,其抑制肿瘤生长的途径可能是通过抑制肿瘤血管生长从而达到治疗目的.结论 EGF-TCS可以有效地抑制荷瘤小鼠实体瘤的生长,预示了该免疫毒素在肿瘤治疗中的潜在应用价值.
-
人表皮生长因子-天花粉蛋白融合蛋白的基因克隆、表达及纯化
目的 构建人表皮生长因子(EGF)-linker-天花粉蛋白(TCS)融合蛋白的表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化EGF-linker-TCS融合蛋白.方法 用PCR方法扩增EGF及柔性连接肽Linker基因片段,插入质粒PQE30-TCS中,转化至大肠杆菌M15中,表达该融合蛋白(EGF-linker-TCS).表达产物经Ni-NTA Agrose亲和层析柱纯化.结果 PQE30-EGF-linker-TCS蛋白在大肠杆菌M15中获得稳定、高效的融合表达.目的蛋白占细胞总蛋白的40%左右,以可溶性形式存在,表达上清柱纯化后纯度达95%以上.结论 应用基因工程技术,成功地构建了融合蛋白EGF-linker-TCS的表达载体,表达并纯化了该融合蛋白,为进一步研究其结构功能关系和肿瘤临床应用奠定了基础.
-
低分子量鱼精蛋白介导的天花粉蛋白的抗肿瘤应用
【目的】研究重组穿膜肽天花粉蛋白的抗肿瘤作用。【方法】利用蛋白重组技术，在天花粉蛋白的C端引入半胱氨酸，并以此作为修饰位点偶联穿膜肽，通过亲和色谱法分离纯化得到目的蛋白。以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测目的蛋白的生成以及其对还原性物质的响应性。通过细胞摄取实验研究穿膜肽介导蛋白内吞摄取效率，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法，测定穿膜肽天花粉蛋白修饰物的抗肿瘤活性。【结果】成功制备穿膜肽-天花粉蛋白复合物，此复合物具有一定还原响应性。且经过穿膜肽修饰后，天花粉蛋白在HeLa、 MCF-7肿瘤细胞的摄取率明显增强，对HeLa、 MCF-7细胞的抗肿瘤作用也显著提高。【结论】穿膜肽修饰天花粉蛋白可显著提高其抗肿瘤作用。
-
天花粉蛋白结构改造对引产活性的影响
目的:研究结构改造对天花粉蛋白(TCS)引产活性的影响.方法:利用定点突变将TCS第219位的天冬酰胺残基改变为半胱氨酸残基(Q219C)以供定点聚乙二醇(PEG)修饰,测定修饰产物的致核糖体失活活性及小鼠中期引产活性.结果:PEG修饰使TCS的致核糖体失活活性约降低90%;相对分子质量为5000的PEG修饰对引产活性无明显影响,而相对分子质量为20000的PEG修饰却明显增强引产活性;此外,PEG修饰使TCS的体内半衰期大为延长.结论:PEG定点修饰TCS可加强其引产活性,原因可能是较长的体内半衰期延长了药物作用的时间.
-
重组hEGF-TCS融合蛋白基因表达载体的构建及表达产物的纯化
目的 构建新型人表皮生长因子(human epidermal growth factor,hEGF)和天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)融合蛋白的表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化EGF-TCS融合蛋白.方法 利用基因工程技术将人表皮生长因子EGF和天花粉蛋白基因连接起来,克隆到高效表达载体pQE30中,构建重组表达质粒pQE30-EGF-TCS.并在大肠杆菌M15中表达该融合蛋白(EGF-TCS).产物经Ni-NTA Agrose亲和层析柱纯化.结果 重组表达质粒pQE30-EGF-TCS在大肠杆菌M15中获得稳定、高效的融合表达.目的蛋白占细胞总蛋白的40%左右,以可溶性形式存在,表达上清柱纯化纯度达95%以上.结论 应用基因工程技术,成功构建了融合蛋白EGF-TCS,为进一步研究其结构功能关系和临床应用奠定了基础.
-
天花粉蛋白治疗未破裂型异位妊娠121例
异位妊娠是妇科常见的急腹症,也是妊娠早期孕妇死亡的主要原因之一.近年来,由于对异位妊娠的高度重视和诊断手段的发展,使早期异位妊娠的诊断率上升,治疗手段也有了明显的改进.我院自2005年1月至2008年1月应用天花粉蛋白注射液治疗未破裂型异位妊娠121例,取得良好效果,现将结果报告如下.
-
天花粉蛋白联合甲氨蝶呤治疗剖宫产术后子宫瘢痕妊娠的疗效观察
目的:观察天花粉蛋白联合甲氨蝶呤(MTX)治疗剖宫产术后子宫瘢痕妊娠(CSP)的疗效.方法:选择2013年3月至2015年7月在宁夏回族自治区固原市隆德县人民医院接受治疗的剖宫产术后CSP患者94例,按随机数字表法分为观察组和对照组,每组47例.观察组给予天花粉蛋白注射液联合MTX治疗,对照组单纯给予MTX治疗.对比两组临床疗效、生育功能恢复情况、相关临床指标及不良反应发生情况.结果:观察组治疗总有效率为95.7％,显著高于对照组的74.5％(P＜0.05).与对照组比较,观察组阴道流血时间、血清β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平恢复时间、月经恢复时间及住院时间均显著缩短(均P＜0.05).两组患者在治疗后2d、7d的血清β-HCG水平、治疗后7d的孕囊直径及MTX再次使用率比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).观察组总不良反应发生率显著低于对照组(P＜0.05).结论:天花粉蛋白联合MTX治疗剖宫产术后CSP的疗效优于单独使用MTX,可减少术中出血,缩短住院时间,促进生育功能恢复,不良反应少,具有较高的临床应用价值.
-
天花粉蛋白治疗未破裂异位妊娠36例
目的总结天花粉蛋白治疗未破裂异位妊娠的临床疗效. 方法对确认无过敏史,且各项有关化验正常的患者,肌肉注射天花粉蛋白治疗. 结果 36例异位妊娠患者中,33例血β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)在不同时间内下降至正常,25例阴道出血停止,12例腹痛好转至消失,3例失败,治愈率达91.66%. 结论天花粉蛋白是安全、有效治疗未破裂异位妊娠的理想药物.
