首页 > 文献资料
-
永磁场对结核分枝杆菌生长影响的初步观察
近年来,不少学者致力于结核分枝杆菌快速培养的研究,但大多着眼于培养基本身的改变,即需加入若干种特殊的成份[1-3].我们在常规的改良罗氏培养基的基础上,将一定强度的永磁场作用于结核分枝杆菌,收到了明显的培养效果,现报告如下.
-
从HIV阳性者痰液中分离出一株胞内分枝杆菌
近，我们从13例HIV阳性患者痰液中分离出胞内分枝杆菌(Mycobactreium, intracellulare)一株，现报告如下。 一般资料：患者男性，38岁，因吸毒而发现HIV阳性，后到我院就诊并作痰液结核分枝杆菌培养与鉴定和药物敏感性试验，结果培养出胞内分枝杆菌。 细菌培养：痰液用4% NaOH前处理、以pH 6.8 PBS洗涤后接种于BACTEC 12B培养基［1］，37℃培养第11天显示阳性，抗酸染色，显微镜下菌体呈分散且长短不一的短杆状。后转种改良罗氏培养基、对硝基苯甲酸培养基(PNB，下同)、噻吩—2—羧酸肼培养基(TCH，下同)和盐酸羟胺培养基(HA，下同)，以便按照防痨协会制订的有关规程作进一步生化鉴定［2］ 生物状况：菌株为不产色性，能在28～42℃生长，对PNB、TCH和HA(125μg/ml)耐受，能在谷氨酸钠葡萄糖琼脂培养基上生长，在改良罗氏培养基上菌落光滑、湿润、小而扁平、蔓延呈乳酪样。生化反应：耐热触酶、烟酰胺酶、亚硝酸盐还原试验(3天)和芳香硫酸酯酶阳性。烟酸、硝酸盐还原、吐温80水解、尿素酶和β—半乳糖苷酶阴性。根据以上生化反应分析，该菌株应鉴定为：胞内分枝杆菌。为进一步核实，我们以北京市结核病胸部肿瘤研究所提供的标准株胞内分枝杆菌(ATCC 13950)和鸟分枝杆菌(ATCC 25291)作了平行性的生化反应试验，结果胞内分枝杆菌在谷氨酸钠葡萄糖琼脂基上有菌落形成而鸟分枝杆菌未见有生长，其他生物特性和培养条件与我们从患体分离出的菌株生化反应结果一致，从而验证了实验的可靠性。 药物敏感性试验：采用BACTEC法［1］，结果显示本菌对异烟肼、链霉素、利福平和乙胺丁醇均耐药，对卡那霉素敏感。 讨论：文献报道［3］，自80年代初全球进入HIV/AIDS流行时代以来，人类新老的两大传染病AIDS与结核病相互影响，至90年代前者的流行已成为全球结核病呈上升趋势的主要原因。在HIV/AIDS的分枝杆菌机会感染中，非结核分枝杆菌感染仅次于结核分枝杆菌；在非结核分枝杆菌感染中，又以鸟复合型分枝杆菌为多见，我们从13例HIV阳性标本中分离出一株胞内分枝杆菌就是明证。此外，药敏试验结果显示，非结核分枝杆菌对大多数抗结核药物呈现原始耐受性，给临床治疗带来了极大的困难。因此，对于HIV/AIDS者，分枝杆菌培养、鉴定和药物敏感性试验，是一项必不可少的实验室工作。
-
二种结核分枝杆菌药物敏感试验方法的评估
结核分枝杆菌药物敏感试验通常采用L-J常规法中的绝对浓度法,即在固体改良罗氏培养基中加入各种抗结核药物,药物分低浓度和高浓度两种浓度,根据细菌在培养基上的生长情况判断药物敏感试验的结果.目前,许多单位采用BACTEC法,即在12B培养基中加入各种抗结核药物,根据结核分枝杆菌的生长指数(GI值)判断药物敏感试验的结果,此法与比例法有所相同.本院实验室对300例住院初、复治病人的痰标本分离培养后的结核分枝杆菌,进行了上述二种方法的药物敏感试验,观察二种方法对抗结核药物耐药性的符合率及耐药性的检出率.
-
继发性肺结核并发非结核分枝杆菌肺病1例
患者,女性,42岁,汉族,已婚,农民.因反复咳嗽、咳痰、咯血4年,加重月余.于2002年6月3日由乡镇医院按肺结核可疑者转诊到当地县(区)级结核病防治所门诊.患者1998年起曾被外医院诊为支气管扩张症,否认结核病史及抗结核治疗史.无烟酒嗜好.查体:生命体征正常,体重43 kg.神清,自动体位.左胸呼吸音减弱,左肩胛下区可闻及少量湿口罗音.心脏、腹部及其余未见异常.实验室检查:痰涂片抗酸杆菌阳性,X线胸片诊为:继发性肺结核.血红细胞沉降率62 mm/h,血清结核抗体阴性,PPD 5U皮试阴性,血常规及肝肾功能均正常.诊断:继发性肺结核(右上肺野、左肺野并空洞、胸膜增厚)涂(+)初治,按新发初治涂阳肺结核登记采用2月强化期的异烟肼(H)、利福平(R)、乙胺丁醇(E)、吡嗪酰胺(Z)和4月的HR,具体方案为:2H3R3Z3E3/4H3R3,于2002年6月4日始治疗,全程督导间歇服药管理,化疗前送痰做分枝杆菌培养及药敏测试,方法按<全国结核病防治工作手册>,以酸性改良罗氏培养基分离菌株后,用对硝基苯甲酸(PNB)和噻吩2羧肼(TCH)培养基进行菌型初鉴定;对常用的抗结核药物H、R、E、S 4药进行敏感测试.患者在化疗后的第2月末复查痰菌仍阳性痰培养报告为牛型分枝杆菌,H 1 μg/ml耐药(++),10μg/ml敏感,E 5μg/ml耐药(++),50μg/ml敏感,R和S均敏感.延长1月强化期,再送痰做分枝杆菌培养、药敏测试.始治第3月末痰培养及药敏报告为:快生长型NTM后鉴定为偶然分枝杆菌,对H 1 μg/ml,10μg/ml,E 5μg/ml和50μg/ml均耐药,S 10μg/ml耐药,100 μg/ml敏感,R 50μg/ml和250μg/ml均敏感.2002年12月30日起改为:力克肺疾片+利福喷丁胶囊+罗红霉素片,至2003年7月30日改为:力克肺疾片+利福喷丁胶 +克拉霉素片.2003年12月8日痰培养报告为:快生长型NTM仍为偶然分枝杆菌,耐药情况基本同2002年10月8日痰培养及药敏结果,诊断修改为:继发性肺结核并NTM肺病.2004年4月29日因痰菌TB阳性化疗改为:力克肺疾+E+Z+克拉霉素片,经治疗22月,患者症状逐渐减轻,体重回升,X线胸片表现为:右上肺浸润病灶吸收呈纤维化改变,左肺野病灶稍有吸收,但空洞一直存在,气管影左偏,肺野呈含气不全,胸膜增厚.2004年6月22日痰培养报告未见分枝杆菌生长,患者仍在治疗中.
-
配制小批量改良罗氏培基方法的改进
目前,改良罗氏培养基仍然是基层实验室作为分离培养结核分枝杆菌所采用的培养基,由于标本量不多,培养基用量少,按传统方法每月配制小批量培养基,每次称取少量多种成分,手续较为繁琐又耗时,因此,在配制方法上我们做了一些改进,现介绍如下.
-
两种固体培养基对分枝杆菌培养影响的比较
我们根据文献[1]关于在改良罗氏培养基(L-J)中加入丙酮酸钠的报道,试以丙酮酸钠代替L-J中的甘油,对临床分枝杆菌纯分离株进行了与传统L-J法的比较探讨.经504株临床分枝杆菌分离株的培养比较后发现,用丙酮酸钠代替L-J中的甘油,其无论是培养时间或是菌落形态以及数量,都明显优于传统L-J(P≤0.01).
-
肌肉注射引起偶发分枝杆菌局部感染的细菌学鉴定
1998年8月～1999年3月，福建省南平市樟湖镇，先后发生了59例患者因肌肉注射引起的局部细菌感染，且久治不愈,主要表现为感染部位肿痛，无发烧，局部组织病理学检查表现为脓肿及肉芽肿小结节形成的空泡细胞条带。所有患者感染部位渗出液标本经培养均分离出一种分枝杆菌，经鉴定确定为偶发分枝杆菌(M. Fortuitum)。报道如下。 一、材料和方法 1.标本来源：59例因肌肉注射引起局部感染久治不愈而收治入院的患者。临床根据患者情况不定期抽取炎性渗出液作细菌培养及鉴定，先后送检96份标本（每个患者先后送检1～3份标本）。 2.细菌鉴定仪器及试剂盒：Hemoline双相血培养瓶，细菌生化鉴定卡(ATB和API)和药敏卡(Rapid ATB STAPH和ATB G-)，细菌鉴定仪均由生物梅里埃公司提供。菌株的生物学及生化反应特性的鉴定参照有关文献［1-3］。药敏纸片由浙江省军区后勤部卫生检定所生产。 3.标本接种及鉴定：将96份感染部位渗出液标本接种Hemoline双相血培养瓶和改良罗氏结核菌培养基，同时接种麦康凯、SS、普通营养琼脂和血琼脂平板等，置28℃需氧培养。所有分离出的菌株接种API、ATB生化鉴定卡作出初步鉴定，对符合分枝杆菌属的菌株再按上述文献中有关分枝杆菌分类方法作进一步的生物学及生化特性鉴定。对确定为偶发分枝杆菌的菌株再接种上述药敏试验卡，37℃孵育36～48 h后用ATB鉴定仪或手工判读药敏结果，同时有部分药物用药敏纸片扩散法作对照检测。 二、结果 1.生物学特性：从患者感染部位采取的96份标本，均检出分枝杆菌，各菌株的生物学特性基本相同。标本接种Hemoline双相血培养瓶培养48 h后，液体明显混浊，有薄层菌膜形成，半固体斜面生长出灰白色菌落，直径1～2 mm。在改良罗氏培养基和血平板上，28℃培养48 h后，菌落形态及大小与上述相似，继续培养后，菌落表面逐渐干燥和粗糙。在SS和麦康凯平板上，生长缓慢，培养3天后，形成1～1.5 mm大小的菌落，呈紫红色。各菌株在pH 4～11.5培养可生长，但以pH 8.0～10.0佳。涂片革兰染色阳性，菌体呈杆状或球杆状，长约1～3μm；抗酸染色阳性或弱阳性。
-
发展中国家使用固体和液体培养基进行结核分枝杆菌培养的费用和成本效益研究
背景:发展中国家已经提出通过开展结核分枝杆菌(以下简称结核分枝杆菌)培养来加强结核病(TB)控制工作.目的:研究赞比亚国家结核病参比实验室自制的和商业生产的改良罗氏培养基(HLJ和CLJ),以及自动和手工的液体培养基(AMGIT和MMGIT)费用和成本效益.方法:费用是从供应商的角度根据每月平均结核分枝杆菌培养标本量来进行估算的.成本效益的估计是建立在研究期间收益.结果:4种培养方法,每个标本培养成本相当(均在28～32美元之间).发现1个结核分枝杆菌阳性样本,使用手动液体培养MMGIT、自动液体培养AMGIT、商业生产的改良罗氏培养CLJ和实验室自制的改良罗氏培养HLJ,成本分别为197美元,202美元,312美元和340美元.4种培养方法,当培养标本量达到大时,发现1个结核分枝杆菌阳性样本成本均高于95美元.当仅对涂片阴性的样本进行检测时,应用手动液体培养MMGIT确定1个额外的结核分枝杆菌阳性样本需要487美元,其他方法价格更高.结论:基于成本效益的理由,液体培养基相比传统的固体培养基更好,特别是液体培养基的产量大大高于传统罗氏培养基.结果表明:总体上,结核分枝杆菌培养成本较高,将培养扩展到标本量较低的基层防治机构可能会导致更高的成本.
-
双向培养基快速分离培养结核分支杆菌
目的 建立一种快速、经济、准确培养分离结核分支杆菌的方法.方法 用双向培养基培养不同稀释度标准结核分支杆菌H37Rv,记录出现阳性结果 的时间,并与改良罗氏培养基配对比较;将200份肺结核患者痰液标本直接涂片镜检,按涂阳和涂阴标本配对接种于双向培养基和改良罗氏培养基上,比较其阳性率.结果 标准结核分支杆菌H37Rv在双向培养基上(10.3±5.2)d出现阳性,而改良罗氏培养基(26.0±11.5)d出现阳性,两者差异有显著性(P<0.01);在双向培养基、改良罗氏培养基上结核分支杆菌总阳性率分别为37.5%和36.0%,涂阳标本在双向培养基、改良罗氏培养基上阳性率分别为97.14%和95.71%,涂阴标本在2种培养基上阳性率分别为5.38%和3.84%,组组各自比较差异均无显著性(P0.05).结论 双向培养基能快速分离培养出结核分支杆菌,结果 可靠,操作简单,价格低廉,适合广大基层医疗单位推广应用.
-
支气管肺泡灌洗液BACTECMGIT960system快速分离结核杆菌的效果评价
结核分枝杆菌培养是结核病细菌学检查的金标准[1],而目前常规使用结核分枝杆菌改良罗氏培养基培养法,存在结核菌生长缓慢,阳性率低,严重影响结核病的诊断治疗的现状,因而寻找一种快速培养结核分枝杆菌的方法对结核病诊断治疗有着重大意义.2007年我院购进的BACTECMGI960system是培养结核分枝杆菌的一种新方法、新技术.为了更好更快更准确为临床治疗提供检验依据,我院应用了作为标本相结合的分离培养结核分枝杆菌的新方法.为了解其分离结核分枝杆菌的效果,以常规的改良罗氏培养基、结核菌快速培养仪和常规痰标本、支气管肺泡灌洗液两两结合对比研究,报告如下.
-
高原制作改良罗氏培养基的条件探讨
目的 利用蒸汽凝固器在高原制作改良罗氏培养基的温度和时间设定值,探索适合高原改良罗氏培养基制作的条件.方法 利用标准配制改良罗氏培养基液,以推荐的85℃的温度、50 min的时间为基础,设置不同的温度、时间进行比对,同时通过无菌试验、H37RV标准结核菌株生长实验得出适合高原地区的温度、时间.结果 标准配制的改良罗氏培养基液,蒸汽凝固器78℃、50 min为适合高原地区制作改良罗氏培养基的温度和时间.结论 应用蒸汽凝固器时将温度设定为78℃,耗时50 min制作的改良罗氏培养基无菌试验合格、H37RV标准结核菌株生长旺盛,适合高原地区制作改良罗氏培养基,有推广应用价值.
-
结核分支杆菌药物敏感性检测方法比较
在结核病发现与规范化治疗中,结核菌耐药情况日益严重.因此,准确进行分支杆菌的培养与鉴定至关重要.本文分别采用改良罗氏培养基常规培养方法、全自动分支杆菌检测系统(BACTEC MGIT 960 System,美国BD公司)仪器法、聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析3种方法,检测分离菌株对利福平(RFP)、链霉素(SM)的敏感性与耐药性,并进行分析比较.结果报告如下.
-
消毒粉对人型结核杆菌杀灭效果的探讨
目的 了解不同浓度的消毒粉在不同时间对人型结核杆菌的杀灭效果.方法 用有效氯含量分别为50、100、200、500、1 000、2 000、5 000、10 000 mg/L的消毒粉,作用于人型结核杆菌,在5、10、15、20、25、30、45、60 min时,接种于改良罗氏培养基上,根据菌落的生长情况,以此来判定杀灭效果.结果 作用5、10 min时,所有浓度消毒粉均无作用;15 min时,含量分别为5 000、10 000 mg/L的消毒粉全部杀灭人型结核杆菌;20 min时,含量分别为1 000 mg/L以上浓度的消毒粉对人型结核杆菌全部杀灭作用;30 min时,含量分别为200 mg/L以上浓度的消毒粉全部杀灭作用;60 min时,有效氯含量为100 mg/L以上浓度的消毒粉全部杀灭作用;含量为50 mg/L的消毒粉不能杀灭人型结核杆菌.结论 在日常工作中,有效氯含量为100 mg/L的消毒粉,作用60 min或含量为200 mg/L以上的消毒粉,作用30 min后来消除人型结核杆菌造成地面污染.
-
结核分枝杆菌在两种培养基上生长情况的观察比较
目的:探讨结核分枝杆菌在改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基上阳性分离培养情况及形成菌落天数情况.方法:对100例新登记肺结核患者的痰液标本经去污染处理,接种在自制改良罗氏、丙酮酸钠培养基上.接种后在37℃孵箱内培养8周,每周观察一次记录菌落生长情况及污染情况.每份标本用改良罗氏培养基2支,丙酮酸钠培养基2支.结果:结核分枝杆菌在改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基上均生长20例,在改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基上均不生长70例.结核分枝杆菌在改良罗氏培养基上生长而在丙酮酸钠培养基上不生长6例,在丙酮酸钠培养基上生长,而在改良罗氏培养基上不生长4例.结核分枝杆菌改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基在形成典型菌落数上无差异(t=0.57,P＞0.01).结论:分枝杆菌分离培养检查法,是结核病确诊可靠的方法.
-
痰分支杆菌快速培养和药敏试验的评价
2002年本院住院和门诊肺结核病人(按2003年结核病诊断标准确诊为肺结核)痰140份,同时采用改良罗氏培养基分离培养加以对照.痰标本经NALC-NaOH消化振荡离心法前处理后,无菌条件将待测液接种于快速培养瓶和改良罗氏培养基内,同时将标本涂片:萋-纳二氏染色,镜检.
-
一种新型结核杆菌快速培养促生长剂的研制
目的 以改良罗氏培养基为基础成分,研制一种快速培养结核杆菌的新型快速促生长剂.方法 将结核杆菌H37Rv株和20株结核杆菌临床分离株,分别接种于含促生长剂的改良罗氏培养基和改良罗氏培养基上,观察两者的生长效果.结果 结核杆菌H37Rv株在含促生长剂的罗氏培养基上5～7 d可形成肉眼可见的米粒状菌落,而在改良罗氏培养基上14 d才形成肉眼可见的米粒状菌落;采用结核杆菌临床分离株分别进行20组实验,在含促生长剂的罗氏培养基上的平均生长时间为7 d,而在不合促生长剂的培养基上的平均生长时间为14.7 d(P＜0.01).结论 新型结核杆菌促生长剂能使结核杆菌标准株和临床分离株在7 d内快速培养出,此快速促生长剂的研制为结核杆菌的快速培养及结核病的诊断、化疗效果观察、流行病学调查、抗结核药物作用研究等有效的手段.
-
应用BACTEC 960系统与改良罗氏培养基从肺外标本分离培养分枝杆菌的效果比较
目的:比较BACTEC 960系统与改良罗氏培养基对肺外标本中分枝杆菌的分离培养效果.方法:应用上述两种方法,分别对382份肺外标本进行分离培养.结果:两种方法的总阳性率为7.33%.BACTEC 960系统培养阳性率为6.54%,平均报告时间14.3 d,污染率4.95%;改良罗氏培养基培养阳性率为3.93%,平均报告时间26.8 d,污染率2.12%.结论:对肺外标本中分枝杆菌的分离培养,BACTEC 960系统较改良罗氏培养基更为高效,但污染率略高.
关键词： 分枝杆菌 培养 BACTEC 960系统 改良罗氏培养基 -
两种不同固体培养基对结核分枝杆菌培养阳性率的影响
目的:了解和分析丙酮酸钠培养基与改良罗氏培养基对分枝杆菌培养阳性率的影响,为实验室提高分枝杆菌培养阳性率提供科学依据.方法:714 份临床送检标本按常规进行有关前处理后同时接种于丙酮酸钠培养基与改良罗氏培养基,前两周每3 天观察1 次,以后每周观察1 次,并记录出现阳性的时间,8 周后未见生长者记录为阴性结果.结果:丙酮酸钠培养基与改良罗氏培养基总阳性率分别是24.09%和22.97%,两者比较差异无统计学意义.其中复治组病例阳性率分别是23.76%和19.80%,两者差异有显著性意义;出现阳性平均天数分别是25.33、31.29 天.结论:丙酮酸钠培养基能提高分枝杆菌尤其是复治病例的培养阳性率,而且能比改良罗氏培养基平均提前6 天得出阳性结果.
-
新型液体培养基用于结核分枝杆菌快速培养的研究
目的以新鲜椰子汁和马血清为基础成分,研制一种快速培养结核分枝杆菌的新型液体培养基.方法将300份肺结核患者痰液标本进行直接涂片镜检,按涂阳和涂阴标本配对接种在新型液体培养基和改良罗氏培养基上,比较两种培养基培养的阳性率和阳性结果出现的时间.结果在新型液体培养基与改良罗氏培养基上结核分枝杆菌培养总阳性率分别为36.0%、37.0%,直接涂片镜检阳性痰液标本在新型液体培养基与改良罗氏培养基培养阳性率分别为94.55%、96.36%,直接涂片镜检阴性的培养阳性率分别为2.1%、2.6%,组组各自比较差异均无显著性(P均＞0.05);新型液体培养基平均(9.66±3.14)d出现阳性结果,而改良罗氏培养基平均(27.56±7.74)d出现阳性结果,两者差异有显著性(P＜0.01).结论新型液体培养基能快速培养出结核分枝杆菌,其制作方便,价格低廉,操作简单,适合于广大基层医疗机构使用.
-
非结核分支杆菌肺病48例诊治体会
本文统计了2000年5月～2002年3月960例分支杆菌初培阳性者,在进行改良罗氏培养基耐药试验同时再采用含0.5%对硝基苯甲酸(PNB)鉴别培养,按1987年分支杆菌诊断标准,鉴别为非结核分支杆菌生长的48例(5%),现报道如下.
