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利用960系统快速鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的可行性研究
目的 探讨应用BACTEC MGIT 960系统的分枝杆菌生长指示管(Mycobacter Growth Indicator Tube,MGIT)加入对硝基苯甲酸(ρ-Nitro benzoic Acid,PNB)区分结核分枝杆菌复合群(MTBC)与非结核分枝杆菌(NTM)的可行性.方法 用含PNB MGIT检测5株标准分枝杆菌菌株的体外抑菌浓度,并对111株临床分离菌株与传统改良罗氏(Lwenstein-Jensen,L-J)PNB鉴定进行比较.结果 以PNB300 μg/ml为界,111株临床分离菌株PNB MGIT法与L-J PNB的菌群鉴定相比较符合率为90.09%;鉴定结果报告平均7.72 d,与L-J PNB法比较有显著性差异,检测时间明显缩短(P＜ 0.001).结论 应用960系统PNB MGIT法鉴定分枝杆菌菌群的方法快速、准确、实用.
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从HIV阳性者痰液中分离出一株胞内分枝杆菌
近，我们从13例HIV阳性患者痰液中分离出胞内分枝杆菌(Mycobactreium, intracellulare)一株，现报告如下。 一般资料：患者男性，38岁，因吸毒而发现HIV阳性，后到我院就诊并作痰液结核分枝杆菌培养与鉴定和药物敏感性试验，结果培养出胞内分枝杆菌。 细菌培养：痰液用4% NaOH前处理、以pH 6.8 PBS洗涤后接种于BACTEC 12B培养基［1］，37℃培养第11天显示阳性，抗酸染色，显微镜下菌体呈分散且长短不一的短杆状。后转种改良罗氏培养基、对硝基苯甲酸培养基(PNB，下同)、噻吩—2—羧酸肼培养基(TCH，下同)和盐酸羟胺培养基(HA，下同)，以便按照防痨协会制订的有关规程作进一步生化鉴定［2］ 生物状况：菌株为不产色性，能在28～42℃生长，对PNB、TCH和HA(125μg/ml)耐受，能在谷氨酸钠葡萄糖琼脂培养基上生长，在改良罗氏培养基上菌落光滑、湿润、小而扁平、蔓延呈乳酪样。生化反应：耐热触酶、烟酰胺酶、亚硝酸盐还原试验(3天)和芳香硫酸酯酶阳性。烟酸、硝酸盐还原、吐温80水解、尿素酶和β—半乳糖苷酶阴性。根据以上生化反应分析，该菌株应鉴定为：胞内分枝杆菌。为进一步核实，我们以北京市结核病胸部肿瘤研究所提供的标准株胞内分枝杆菌(ATCC 13950)和鸟分枝杆菌(ATCC 25291)作了平行性的生化反应试验，结果胞内分枝杆菌在谷氨酸钠葡萄糖琼脂基上有菌落形成而鸟分枝杆菌未见有生长，其他生物特性和培养条件与我们从患体分离出的菌株生化反应结果一致，从而验证了实验的可靠性。 药物敏感性试验：采用BACTEC法［1］，结果显示本菌对异烟肼、链霉素、利福平和乙胺丁醇均耐药，对卡那霉素敏感。 讨论：文献报道［3］，自80年代初全球进入HIV/AIDS流行时代以来，人类新老的两大传染病AIDS与结核病相互影响，至90年代前者的流行已成为全球结核病呈上升趋势的主要原因。在HIV/AIDS的分枝杆菌机会感染中，非结核分枝杆菌感染仅次于结核分枝杆菌；在非结核分枝杆菌感染中，又以鸟复合型分枝杆菌为多见，我们从13例HIV阳性标本中分离出一株胞内分枝杆菌就是明证。此外，药敏试验结果显示，非结核分枝杆菌对大多数抗结核药物呈现原始耐受性，给临床治疗带来了极大的困难。因此，对于HIV/AIDS者，分枝杆菌培养、鉴定和药物敏感性试验，是一项必不可少的实验室工作。
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对《结核病诊断细菌学检验规程》的一点看法
中国防痨协会在1995年制定并于2006年再版修订但至今仍作为实验室常规操作标准的《结核病诊断细菌学检验规程》(简称"规程")[1],体现了实验室的细菌学检查对结核病诊断和流行病学预防的重要性.在规程中,国际公认的55种分枝杆菌中有致病性的36种分枝杆菌的生物化学要点被罗列了出来,其中把对硝基苯甲酸(PNB)作为区别Mtb与非结核分枝杆菌(NTM)的惟一实验标准,为实验室进行分枝杆菌分型鉴定制定了一套较为完善的鉴定程序.但在实验室的日常常规工作中笔者却发现规程存有值得商榷之处.
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耐高温的结核分枝杆菌二株
分枝杆菌菌型鉴定在结核病流行病学调研和临床用药指导方面起到了至关重要的作用[1],因由Mtb或非结核分枝杆菌(non-tuberculosis Mycobacteria,NTM)引致的肺部疾病,其临床症状和X线影像表现没有任何的区别,但临床治疗有很大的差异甚至完全不同[2],因此结核分枝杆菌复合群(MTC)与NTM正确的区分尤为重要.故中国防痨协会基础专业委员会在1995年制定并于2006年再版修订了《结核病诊断实验室检验规程》(简称"规程")[3],其中分枝杆菌的鉴定程序为结核病流行病学调研和指导临床用药方面提供了可靠的业务保障.在规程中,对MTC的鉴定有明确的实验室鉴定标准,如生长速度缓慢,不产色性,对硝基苯甲酸(PNB)、耐热触酶和吐温-80水解试验阴性,噻吩-2-羧酸肼(TCH)、硝酸盐还原试验及尿素酶分解试验阳性,对5％NaC1不耐受等;培养温度宜37℃,在28℃和42℃环境下不生长等.但笔者在对2913株分枝杆菌进行菌型鉴定时,在1736株确诊为MTC株中发现2株(注:来自同一例患者)能在42℃高温环境下生长的株种,现报道如下.
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变色液体培养基系统快速鉴定结核分枝杆菌和耐药性测定
由于固体培养基鉴定结核分枝杆菌(结核菌)及药敏试验均需28 d,其制作过程需加热,且培养基中蛋白质对药物有吸附作用,故仅用于常规抗结核药敏试验,不适合用于分枝杆菌低抑菌浓度(MIC)测定.多耐药结核菌和非结核菌对常用抗结核药物耐药,因此急需一种快速测定分枝杆菌药敏的方法,筛选新的药物.尽管Bactec系统可用于分枝杆菌药敏试验和MIC测定[1],但试剂和仪器昂贵.因此,我们采用快速变色液体培养基系统鉴定结核与非结核分枝杆菌,并测定了结核菌常规药物的敏感性和非结核分枝杆菌对9种药物的MIC,结果如下.一、材料和方法1.标本来源:128株结核菌,34株非结核分枝杆菌(其中15株龟分枝杆菌脓肿亚种、4株龟分枝杆菌龟亚种、14株偶发分枝杆菌和1株胞内分枝杆菌).上述菌株为深圳地区和广州地区分离株.2.结核菌快速鉴定及药敏试剂、分枝杆菌MIC测定试剂和菌株鉴定试剂:对硝基苯甲酸(PNB)培养基、5%氯化钠耐受试验、芳香硫酸酯酶(3、14
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正交试验优化硝基卡因的直接酯化工艺研究
目的 采用正交试验法优化硝基卡因的直接酯化工艺.方法 以对硝基苯甲酸和N,N-二乙氨基乙醇为原料,通过直接酯化法合成硝基卡因,选择反应的催化剂、溶剂、投料比、时间为考察因素,采用L9(34)正交试验确定硝基卡因的直接酯化法佳工艺.结果 佳工艺条件是催化剂为甲酸,溶剂为二甲苯,投料比为1∶1.10,反应时间为6h.佳工艺条件下的合成收率为98.17％,硝基卡因的质量分数为99.40％.结论 该合成硝基卡因的方法具有收率高、工艺简单、稳定可行的特点.
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双氧水介导制备对硝基苯甲酸乙酯的初步研究
目的:探讨双氧水催化合成对硝基苯甲酸乙酯的可行性,并考察了反应物的摩尔比、催化剂用量、反应温度及反应时间对产物收率的影响.方法:分别采用单因素设计实验与正交设计实验,分析比较这两种方法的佳反应条件.采用数字熔点仪测定样品的熔点:用GC112A型气相色谱仪测定了产物的纯度;用傅里叶变换红外光谱仪测定产物的结构.结果:双氧水可以作为合成对硝基苯甲酸乙酯的催化剂.综合分析可知:当无水乙醇和对硝基苯甲酸的摩尔比为4:1,催化剂含量为10%,反应温度为80℃,反应时间为2.5-3h时酯化产率可达到高值.结论:双氧水催化对硝基苯甲酸、无水乙醇合成对硝基苯甲酸乙酯的效率较高,产品纯度高,环境污染小,不失为一种新的合成方法.
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双氧水介导制备对硝基苯甲酸乙酯的初步研究
目的:探讨双氧水催化合成对硝基苯甲酸乙酯的可行性,并考察了反应物的摩尔比、催化剂用量、反应温度及反应时间对产物收率的影响.方法:分别采用单因素设计实验与正交设计实验,分析比较这两种方法的佳反应条件.采用数字熔点仪测定样品的熔点:用GC112A型气相色谱仪测定了产物的纯度;用傅里叶变换红外光谱仪测定产物的结构.结果:双氧水可以作为合成对硝基苯甲酸乙酯的催化剂.综合分析可知:当无水乙醇和对硝基苯甲酸的摩尔比为4:1,催化剂含量为10%,反应温度为80℃,反应时间为2.5-3h时酯化产率可达到高值.结论:双氧水催化对硝基苯甲酸、无水乙醇合成对硝基苯甲酸乙酯的效率较高,产品纯度高,环境污染小,不失为一种新的合成方法.
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对氟苄胺合成工艺的改进
目的:获得成本低、工艺简单的合成方法.方法:以对硝基苯甲酸为原料经氟化、酰化和还原3步合成药物中间体对氟苄胺. 结果:总收率达30.43%.结论:新的合成方法具有原料易得、成本低廉、操作安全和工艺简单等特点.
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相转移催化法由对硝基苯甲酸合成对氟苯甲酸的探讨
为了简化对氟苄胺的合成,降低成本,用季铵盐作为相转移催化剂以促进对硝基苯甲酸到对氟苯甲酸的转变,研究了反应时间、温度和催化剂用量对对氟苯甲酸产率的影响,对氟苯甲酸的产率达到了78.9％,比文献报道的75.5％的产率高,同时使反应时间从10小时缩短为5小时.还考察了其他相转移催化剂的影响.
关键词： 对氟苄胺 对硝基苯甲酸 对氟苯甲酸 十六烷基三甲基溴化铵 合成 -
对硝基苯甲酸鉴别结核分枝杆菌复合群与非结核分枝杆菌的机制研究
目的：研究对硝基苯甲酸（PNB）鉴别结核分枝杆菌复合群（MTC）与非结核分枝杆菌（NTM）的机制。方法应用高压液相色谱（HPLC）和液相色谱串联质谱法（LC/ MS/ MS）鉴定5株 MTC 标准株和33株NTM 标准株的 PNB 代谢产物。结果33株 NTM 标准株均可将 PNB 还原为对氨基苯甲酸（PABA），而5株MTC 标准株则不具备该能力。结论 PABA 是 PNB 的代谢产物之一。NTM 能将 PNB 还原为细菌可利用的PABA，因此能够耐受 PNB；MTC 不具备该能力，因而不能耐受 PNB。这可能就是 PNB 选择性培养基用于鉴别MTC 与 NTM 的机制。
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三种方法用于耐多药肺结核患者菌种初步鉴定的比较分析
目的：分析临床分枝杆菌培养阳性的耐多药肺结核患者三种初步鉴定结核菌种方法的准确度，期望为临床结核病实验室初步菌种鉴定技术的有效运用提供参考。方法收集重庆市公共卫生医疗救治中心结核内科2013年7月15日至2014年1月14日期间162例临床明确诊断为耐多药肺结核患者的实验室检查数据，统计三种方法（方法一：噻吩-2-羧酸肼（ TCH）和对硝基苯甲酸（ PNB）试验方法二：胶体金法定性检测MPB64抗原，方法三：分枝杆菌分型鉴定）菌种初步鉴定结果，分析检测结果的敏感性，采用卡方检验，以P＜0．05为差异，具有统计学意义。结果以临床诊断结果为标准，三种方法鉴定结核分枝杆菌的敏感性，为93.8％（152／162），95.7％（155／162），96.3％（156／162）（P＞0.05）。以方法三为标准，方法一和方法二鉴定结核分枝杆菌的敏感性分别为93.8％（150／156），95.7％（154／156）（P＜0.01）；鉴定非结核分枝杆菌的敏感性分别为50％（1／2），100％（2／2）。结论三种方法均可用于耐多药肺结核患者菌种的初步鉴定，使用胶体金法定性检测MPB64抗原法更方便、更省时。
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涂片镜检结合胶体金法对结核杆菌复合群的鉴别价值
目的：探讨结核分枝杆菌在BACTEC960中湿片镜检形态特征及胶体金法对结核杆菌复合群的鉴别价值。方法收集陕西省结核病防治院经BACTEC 960培养阳性920例，进行直接涂片湿片镜检、涂片抗酸染色、胶体金法菌群鉴定，并以PNB(对硝基苯甲酸)和TCH(噻吩-2-羧酸肼)鉴别培养基菌群检测为标准。结果结核分枝杆菌(MTB)在液体培养管中呈镜检呈索状排列98．3%(832/846)；非结核分枝杆菌( NTM)镜检呈团状排列32．43%(24/74)、块状排列35．13%(26/74)、散在排列为24．32%(20/74)。胶体金法检测结核分枝杆菌的敏感性98．34%(832/846)，特异性98．64%，阳性预测值99．87%，阴性预测值86．90%。结论湿片观察结核分枝杆菌在BACTEC 960培养管中形成索状排列，较涂片抗酸染色更简便、快速，对鉴定分枝杆菌有初筛作用。
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ATP发光法快速鉴定非结核分枝杆菌的可行性评估
目的 通过与罗氏菌型鉴定法和BD960菌型鉴定法的比较,判断三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)发光法在实际运用过程中的可行性.方法 运用三种鉴定方法同时对69例临床菌株进行检测,并对结果进行比较,分析ATP发光法的优缺点.结果 ①ATP发光法的准确率为98.6％(68/69),与BD960法相同,比罗氏法的95.7％(66/69)略高;②ATP发光法的检测时间比罗氏法快了很多,差异有显著性(t=54.94,P＜0.001);略快于BD960法,差异无显著性(t=0.003,P=0.957);③ATP发光法检测只需要一台小型的Hygiena PI-102检测仪,价格便宜操作简便,常规实验室均可开展.结论 ATP发光法鉴定非结核分枝杆菌快速简便、准确率高且成本低,在减少非结核分枝杆菌感染患者的误诊和误治中一定能起到关键性作用.
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快速鉴定人肺部感染中非结核分枝杆菌的一种简单方法
目的 建立一种快速鉴别结核分枝杆菌(tuberculous mycobaetefia,TIM)和非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria.NTM)的简单方法.方法 收集165例诊断为肺结核病人的痰标本,经除污染杂菌处理后各取0.1 ml的痰液沉淀物.分别加入到含不同浓度对硝基苯甲酸(para-nitro benzoic acid,PNB)的未成熟椰汁液体培养基和罗氏培养基中培养.对在含PNB的培养基中生长的阳性培养物进行烟酸检测.结果 所测样本菌株中有18株在含PNB的培养基中生长.其培养物中检测不含烟酸.形态学检查18例未成熟椰汁液体培养基中阳性培养物都不同于典型的结核分枝杆菌.结论 含PNB的未成熟椰汁液体培养基,可作为一种快速鉴定人肺部感染中非结核分枝杆菌的简单筛选方法.
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非结核分支杆菌肺病48例诊治体会
本文统计了2000年5月～2002年3月960例分支杆菌初培阳性者,在进行改良罗氏培养基耐药试验同时再采用含0.5%对硝基苯甲酸(PNB)鉴别培养,按1987年分支杆菌诊断标准,鉴别为非结核分支杆菌生长的48例(5%),现报道如下.
