手工判读MGIT法检测分枝杆菌的效果评价

目的 应用手工荧光判读仪对MGIT液体培养基进行快速检测分枝杆菌的效果评价.方法 收集2011年3月至2011年4月杭州市红十字会医院临床诊断为结核病的患者临床标本230份,其中涂片法抗酸染色阳性标本57份,阴性标本173份.分别对同份标本做L-J固体和MGIT液体培养法分离培养效果比较,结果统计学分析采用x2检验和非参数检验(Z),P值＜0.05差异有统计学意义.结果 230份标本中,两种分离培养方法共分离出90株分枝杆菌菌株,检出率为39.1％( 90/230)；其中MGIT液体培养检出率为34.3％ (79/230),L-J培养检出率为27.4％ (63/230).在173份抗酸染色阴性标本中,用液体培养和L-J培养分离培养检出率分别为19.1％(33/173)、11.0％ (19/173).上述两组数据经统计学分析,培养检出率差异有统计学意义(P＜0.05).MGIT液体培养法阳性报告时间中位数为13天；L-J培养法阳性报告时间中位数为21天,差异有统计学意义(Z=3.293,P＜0.001).抗酸涂阳样本MGIT液体培养法阳性报告时间比抗酸涂阴标本提早7天.结论 手工MGIT液体培养法能快速检测分枝杆菌,检出率高,适合基层实验室推广应用.

百令胶囊联合缬沙坦治疗慢性肾炎轻中度蛋白尿的临床观察

慢性肾小球肾炎呈慢性进展过程，临床上以蛋白尿、血尿、水肿及高血压等为特征，蛋白尿是影响慢性肾炎预后的独立危险因素，降低蛋白尿是延缓肾衰竭的重要治疗措施之一。冬虫夏草是我国传统的名贵中草药，具有提高机体免疫功能、降血脂、耐缺氧等肾保护作用，百令胶囊的主要成分为发酵虫草菌菌丝体干粉，是由冬虫夏草的无性世代中华束丝孢真菌经液体培养得到的，对多种肾脏疾病有治疗作用。我院自2012年6月至2014年6月进行了百令胶囊联合缬沙坦治疗慢性肾炎轻、中、重度蛋白尿的临床研究，现报告如下。

两种结核分枝杆菌快速检测方法的比较

目的 比较荧光定量PCR检测和直接扩增检测两种方法对结核分枝杆菌检测的敏感性、特异性,及在国境口岸卫生检疫工作中的应用前景.方法应用结核分枝杆菌荧光定量PCR和直接扩增检测47份疑似或确诊活动性肺结核空腹痰标本,并与液体培养结果进行比较.结果荧光定量PCR法与直接扩增法对结核分枝杆菌检测敏感性分别为46.7％和100％,特异性分别为81.2％和84.4％.结论结核分枝杆菌直接扩增检测是一种较为敏感而特异的快速检测方法,在国境口岸卫生检疫部门具有重要的应用价值.

同步固—液双相泌尿生殖道支原体培养、鉴定和药敏

目的 同步进行固体与液体支原体培养,解决液体培养的假阳性和假阴性,缩短培养时间,准确的鉴定为临床用药提供可靠的药敏结果.方法 采用法国生物梅里埃公司Mycoplasma IST2支原体试剂盒对6363例疑似非淋菌性尿道炎(NGU)患者进行泌尿生殖道支原体培养、鉴定和药敏试验;用上海恩科生物有限公司生产的解脲脲原体和人型支原体的选择显示培养基.结果 泌尿生殖道支原体阳性检出率为32.8％,其中Uu阳性率为75％、Mh阳性率为2％、Uu+Mh混合感染阳性率为24％；药敏试验结果显示,Uu、Mh、Uu+Mh对原始霉素、交沙霉素、强力霉素敏感性均较高,达到90％以上;而Uu对氧氟沙星和环丙沙星具有较高的耐药性.结论 固体、液体同步培养支原体只需2d时间,将支原体固体培养的金标准与液体培养的药敏相结合达到试验互补,为临床泌尿生殖道支原体培养提供准确的鉴定和药敏报告.

桦褐孔菌菌株的分离鉴定及液体优化培养

桦褐孔菌(Inonotusobliquus)是一种十分珍稀而名贵的药用真菌,主要分布在俄罗斯、吉林、黑龙江一带.桦褐孔菌中的多糖有明显的降血糖作用;桦褐孔菌,又称血液血管的清洁剂,对高血压的防治效果显著.桦褐孔菌化学成分有多糖、桦褐孔菌素、桦褐孔菌醇、多种氧化三萜类化合物、栓菌酸、多种羊毛甾醇型三萜类化合物、叶酸衍生物、芳香族的香草酸、丁香酸及 γ 羟基苯甲酸,还有报道称已分离出单宁化合物、类固醇、生物碱类化合物、黑色素类、低分子多酚类及木质素类化合物.该文通过桦褐孔菌的野外采集、收集,分离纯化得到一株桦褐孔菌菌株,经鉴定为桦褐孔菌,代号:F83280(2014);通过对该菌株的液体发酵优化培养,得到该菌株F83280(2014)液体培养佳的培养基配方及培养工艺条件,为今后开展药效学研究提供了样品及可靠数据.

红曲霉液体培养法制备姜黄素的工艺优化

目的:优选红曲霉液体培养法制备姜黄素的工艺条件.方法:以天然姜黄为原料,姜黄素得率为指标,在单因素试验基础上,采用正交试验考察发酵时间、料液比、营养比和发酵液pH对制备工艺的影响.结果:佳制备工艺为发酵时间5d,料液比1 g·L-1,营养比1/6,发酵液pH 4,姜黄素得率达0.43％.结论:优选的制备工艺稳定可行、效率高.

药用霍山石斛原球茎的液体悬浮培养

目的:考察霍山石斛原球茎在液体培养中增殖、水溶性多糖与总生物碱积累的特征.方法:在霍山石斛试管苗茎段原球茎诱导与继代培养的基础上,进行原球茎的液体悬浮培养,分析原球茎生长动态,用比色法测定水溶性多糖与总生物碱的含量.结果:霍山石斛茎段在NAA或NAA与KT组合的MS培养基上可诱导出原球茎,MS基本培养基适合原球茎继代培养增殖;原球茎在液体悬浮培养中大比生长速率0.044 * d-1,倍增时间15.8 d,适生长周期为4周,水溶性多糖和总生物碱含量分别是3.75%和0.0261%.结论:霍山石斛原球茎液体培养生长良好,具有目的化学成分的合成能力,为发酵培养开发霍山石斛资源提供可能.

不同浓度HEPES缓冲液对肺炎支原体培养效果的影响

目的 观察在商品化肺炎支原体培养基中添加不同浓度的HEPES缓冲液对肺炎支原体培养效果的影响.方法 使用未添加及添加终浓度为10、20、30、40、50、60、80 mmol/L HEPES缓冲液的商品化培养基,分别接种相同菌量肺炎支原体标准株ATCC29342进行培养,每天采用微孔稀释法定时检测8种培养基中的活支原体数,同时测定8种培养基的pH值,连续检测13d,绘制8种培养基中肺炎支原体的生长曲线和培养基pH曲线.结果 肺炎支原体在液体培养基中的生长曲线平台期随HEPES浓度增加逐渐延长,且培养基pH下降速度及程度随HEPES浓度增加相应变慢、变缓.10 mmol/L的HEPES可提高肺炎支原体液体培养大菌量一个数量级,但pH缓冲能力有限,不能延长肺炎支原体生长曲线平台期;＞50 mmo/L的HEPES培养基缓冲能力强,可延长肺炎支原体培养平台期2d左右,但不能增加液体培养中肺炎支原体的大菌量.结论 10～80 mmol/L HEPES缓冲液均可影响肺炎支原体液体培养的生长曲线变化,较低浓度的HEPS可提高肺炎支原体液体培养的大菌量,较高浓度的HEPS可延长肺炎支原体培养平台期,因此可依据实验目的不同添加不同浓度HEPES缓冲液以获取实验结果优化.

联合检测技术用于结核病及耐多药结核病快速诊断的研究

目的 探讨多技术联合检测用于结核病及耐多药结核病快速诊断的临床价值. 方法 应用浓缩涂片法、结核分枝杆菌DNA荧光定量法(TB-DNA)和结核分枝杆菌RNA恒温扩增检测(SAT TB-RNA)组成的结核快速诊断技术(简称快速法)及线性探针结核分枝杆菌耐药快速检测系统(Hain Geno-Type MTBDRplus,简称HAIN)对1 180例结核病患者和1 120例非结核病对照者分别进行检测,同步进行BACTEC MGIT-960培养、鉴定及药敏试验,比较各方法的敏感性和特异性及结核病、耐多药结核病检出率. 结果 以BACTEC MGIT-960培养鉴定结果为金标准,快速法的敏感度为97.84％(543/555),特异度为96.16％(601/625),符合率为96.95％(1 144/1 180);2种方法的结核病检出率比较差异无统计学意义(x2=0.245,P＞0.05);以BACTEC MGIT-960药敏试验为金标准,HAIN检出耐多药结核病的敏感度为93.62％(44/47),特异度为99.41％(508/511),符合率为99.46％(552/555);2种方法的耐多药结核病检出率比较差异无统计学意义(x2 =0.102,P＞0.05).快速法结果报告时间缩短为1d,HA1N报告时间为2d. 结论 多技术联合检测对快速诊断结核病及耐多药结核病的敏感性和特异性都有明显的优势,显著缩短了检测时间,具有快速准确的诊断价值.

Xpert Mtb/RIF全自动核酸扩增技术在结核病应急诊断中的应用

目的 评价半巢式结核分枝杆菌/利福平全自动实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)用于结核病应急诊断的临床价值. 方法 采集汕头市2015年1-12月疑似结核病突发公共卫生事件现场、口岸、急诊科、重症观察室的915例患者标本,应用涂片荧光染色法、BACTEC MGIT-960液体培养法、结核分枝杆菌DNA荧光定量法(TB-DNA)、Xpert MTB/RIF技术分别进行检测,并将Xpert MTB/RIF利福平耐药结果与BACTEC MGIT 960药敏试验相比较. 结果 915例患者中437例为活动性结核病患者,478例为非结核患者,Xpert MTB/RIF法的敏感性为51.72％(226/437),特异性为100％(478/478),Xpert MTB/RIF法的阳性检出率与涂片荧光染色法检测结果比较差异有统计学意义(x2 =55.91,P＜0.01),与BACTEC MGIT-960液体培养法、TB-DNA结果比较差异有统计学意义(x2值分别为3.85和4.40,P＜0.05);以BACTEC MGIT-960液体培养药敏试验为金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感度为92.31％(24/26),特异度为99.41％(168/169),二种方法具有良好的一致性(Kappa值为0.93). 结论 XpertMTB/RIF法灵敏度和特异性高,操作简便、快速且易于开展,能在2h内报告结核分枝杆菌及利福平耐药结果,对结核病的应急诊断具有较高的应用价值.

固体培养和液体培养对铜绿假单胞菌双鞭毛影响的比较

铜绿假单胞菌属于单端双鞭毛菌,而不是单端单鞭毛菌,这一发现是将菌种接种在哥伦比亚羊血琼脂平板上培养得出的[1].本文研究证实铜绿假单胞菌液体培养双鞭毛细胞数与单鞭毛细胞数的比值高于固体培养.

用显微镜观察药物敏感性方法快速检测结核分枝杆菌耐药性

背景和目的:结核病的早期快速诊断是阻断结核病传播,尤其是耐药结核病传播的关键.显微镜观察药物敏感性(microscopic-observation drug-susceptibility,MODS)方法是一种通过痰液标本的液体培养,在镜下检测细菌生长特性的方法.

8种支原体液体培养试剂盒的质量评价

目的 临床评估8种支原体(Uu)液体培养试剂盒(Kit)的质量.方法 6家性病实验室的技术人员,在同一条件下,分别用8种试剂平行双盲检测100份临床样本.以A7固体培养结果为标准,分析各试剂的敏感性、特异性、总功效率.结果 8种Kit检测Uu的敏感性从73.2％～100％不等,其中Kit6、7、8的敏感性低于85％,显著低于固体培养法(P＜0.01).Uu检测的特异性显示:5种Kit达95.4％～100％,而Kit2、4、8为77.3％～86.4％,显著低于固体培养法(P＜0.05).人型支原体(Mh)检测的敏感性较高(80.4％～97.8％),只有Kit9的敏感性(80.4％)显著低于固体培养法(P＜0.01),漏检率为19.6％.Mh检测的特异性均达96.3％以上.10份抑菌效果实验显示:所有试剂均能100％抑制杂菌生长.结论 部分国产试剂已等同或接近国外试剂,但试剂的性能指标存在差异,临床检测应用时应注意.

影响支原体液体培养阳性结果的因素

目的:了解各种影响支原体液体培养阳性结果判断的因素,提高泌尿生殖道支原体感染实验室诊断的准确性.方法:对疑为支原体阳性结果的液体培养基再转种和进一步鉴定.结果:从375例疑为支原体阳性结果的液体培养基中分离出34株大肠埃希菌,分离出金黄色葡萄球菌9株,分离出表皮葡萄球菌21株,分离出念珠菌31株.结论:对支原体液体培养结果要详细分析,把澄清桃红色的和浑浊桃红色分开.浑浊桃红色的再进一步鉴定,才能为临床提供准确可靠的检验结果.

影响肺炎支原体液体培养假阳性的因素分析

目的:探讨影响肺炎支原体液体培养假阳性的因素.方法:随机选取60例支原体肺炎病例资料,分析研究肺炎支原体液体培养结果.结果:60例支原体肺炎病例资料显示,肺炎支原体液体培养假阳性5例,假阳性率8.33％.其中影响因素有环境因素、培养基因素、标本因素及鉴定因素等.结论:影响肺炎支原体液体培养假阳性的因素众多,只有提高肺炎支原体液体培养质量控制,才能降低肺炎支原体液体培养假阳性的发生率.

一种改良幽门螺杆菌液体培养方法

目的:探索一种简便的液体培养方法培养幽门螺杆菌( Hp).方法:采用组织培养瓶,装少量含有10 %小牛血清、0.5 %淀粉、10 mg/L万古霉素和 2 500 U/L多粘菌素B的脑心浸液肉汤,在厌氧罐中通过抽气换气建立微需氧环境,37℃振荡培养,平板菌落计数法检测生长情况.结果:培养24 h～48 h,液体中活菌水平超过108 c fu/ml,涂片染色细菌形态典型.结论:此Hp液体培养方法简便可行,细菌生长良好,能满足对Hp的毒力因子、菌体成分的研究需要.

海洋红酵母的液体培养

目的 探讨提高海洋红酵母的液体高密度培养方法.方法 在摇瓶培养条件下,测定温度、pH、装液量、接种量及摇床转速对海洋红酵母BY2菌株生长的影响,进一步放大培养至50 L发酵罐,在培养过程流加氨水以控制pH稳定在5.3～5.5的条件下,考察不同葡萄糖浓度对海洋红酵母BY2菌株发酵菌量的影响.结果 摇瓶适培养条件为温度25℃,pH 5.5,接种量8％、装液量40 mL/250 mL三角瓶、摇床转速200 r/min,在此培养条件下,24 h时菌量达到8.9×108 CFU/mL;扩大至50 L发酵罐,葡萄糖初始浓度为40、60、80、100 g/L各罐20～ 24 h时的菌量相应达到26.6×108、29.5×108、47.8×108、66.8×108 CFU/mL.结论 提高初始葡萄糖浓度,流加氨水稳定发酵过程的pH,可以显著提高BY2菌株的发酵菌量.

神经细胞培养方法在缺血性脑损伤研究中的应用

神经组织的体外培养是1907年由Harrison首创[1],很多学者相继在培养技术、培养容器、培养液几方面作出改进:1956年Nakai创造了神经组织的分离细胞培养[2],1957年Dulbecco采用胰蛋白酶消化并用液体培养基方法获得了单层培养细胞;神经组织的分离细胞培养和单层培养法的出现,对神经细胞培养的发展起了很大的推动作用,已成为人们进行神经领域研究所普遍采用的技术.

泌尿生殖道支原体液体培养与固体培养比对

目的:验证泌尿生殖道支原体液体培养,准确地为鉴定临床用药提供科学理论依据.方法:对636例用Mycoplasma IST2 支原体试剂盒液体培养阳性的标本转种在支原体固体培养基,按培养条件和时间要求进行低倍显微镜结果确认.结果:泌尿生殖道支原体液体培养阳性率为33%,固体培养阳性检出率为32%.结论:泌尿生殖道支原体液体培养与固体培养相符率为97%,支原体液体培养变红且清亮不用做固体培养,支原体液体培养变红且混浊需要加做支原体固体培养,将支原体固体培养的金标准与快速带药敏的液体培养相结合达到试验互补,避免了假阳性造成的误诊,合理使用抗生素,确保医疗安全.

012采用液体培养从母体外周血富集并检测胎儿有核红细胞