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从HIV阳性者痰液中分离出一株胞内分枝杆菌
近，我们从13例HIV阳性患者痰液中分离出胞内分枝杆菌(Mycobactreium, intracellulare)一株，现报告如下。 一般资料：患者男性，38岁，因吸毒而发现HIV阳性，后到我院就诊并作痰液结核分枝杆菌培养与鉴定和药物敏感性试验，结果培养出胞内分枝杆菌。 细菌培养：痰液用4% NaOH前处理、以pH 6.8 PBS洗涤后接种于BACTEC 12B培养基［1］，37℃培养第11天显示阳性，抗酸染色，显微镜下菌体呈分散且长短不一的短杆状。后转种改良罗氏培养基、对硝基苯甲酸培养基(PNB，下同)、噻吩—2—羧酸肼培养基(TCH，下同)和盐酸羟胺培养基(HA，下同)，以便按照防痨协会制订的有关规程作进一步生化鉴定［2］ 生物状况：菌株为不产色性，能在28～42℃生长，对PNB、TCH和HA(125μg/ml)耐受，能在谷氨酸钠葡萄糖琼脂培养基上生长，在改良罗氏培养基上菌落光滑、湿润、小而扁平、蔓延呈乳酪样。生化反应：耐热触酶、烟酰胺酶、亚硝酸盐还原试验(3天)和芳香硫酸酯酶阳性。烟酸、硝酸盐还原、吐温80水解、尿素酶和β—半乳糖苷酶阴性。根据以上生化反应分析，该菌株应鉴定为：胞内分枝杆菌。为进一步核实，我们以北京市结核病胸部肿瘤研究所提供的标准株胞内分枝杆菌(ATCC 13950)和鸟分枝杆菌(ATCC 25291)作了平行性的生化反应试验，结果胞内分枝杆菌在谷氨酸钠葡萄糖琼脂基上有菌落形成而鸟分枝杆菌未见有生长，其他生物特性和培养条件与我们从患体分离出的菌株生化反应结果一致，从而验证了实验的可靠性。 药物敏感性试验：采用BACTEC法［1］，结果显示本菌对异烟肼、链霉素、利福平和乙胺丁醇均耐药，对卡那霉素敏感。 讨论：文献报道［3］，自80年代初全球进入HIV/AIDS流行时代以来，人类新老的两大传染病AIDS与结核病相互影响，至90年代前者的流行已成为全球结核病呈上升趋势的主要原因。在HIV/AIDS的分枝杆菌机会感染中，非结核分枝杆菌感染仅次于结核分枝杆菌；在非结核分枝杆菌感染中，又以鸟复合型分枝杆菌为多见，我们从13例HIV阳性标本中分离出一株胞内分枝杆菌就是明证。此外，药敏试验结果显示，非结核分枝杆菌对大多数抗结核药物呈现原始耐受性，给临床治疗带来了极大的困难。因此，对于HIV/AIDS者，分枝杆菌培养、鉴定和药物敏感性试验，是一项必不可少的实验室工作。
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全细菌SELEX技术筛选鸟分枝杆菌的适配子
目的 应用指数级富集配体系统进化技术(system evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选与鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)特异性结合的ssDNA适配子,建立酶联寡聚核苷酸吸附试验(enzyme-linked oli-gonucleotide assay,ELONA)检测鸟分枝杆菌的方法.方法 设计并合成随机序列ssDNA文库,以鸟分枝杆菌为靶标,利用SELEX技术筛选特异性的ssDNA适配子,将亲和力高的适配子进行克隆、测序;用DNAMAN软件分析适配子的二级结构,并检测其特异性.结果 单适配子N1与鸟分枝杆菌结合的Kd为(246±21.87) nmol/L,即亲和力高,而对结核分枝杆菌等其他分枝杆菌亲和力较低.结论 应用SELEX筛选的鸟分枝杆菌ssDNA适配子N1具有较高亲和力和特异性,可作为鸟分枝杆菌检测及艾滋病合并鸟分枝杆菌感染的特异性诊断制剂.
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结核分枝杆菌有质粒吗?
答:目前结核分枝杆菌没有发现质粒.在分枝杆菌方面已检测带有质粒的分枝杆菌有胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、偶然分枝杆菌和耻垢分枝杆菌.
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鸟分枝杆菌临床分离株亚种组成及耐药谱研究
目的 分析我国鸟分枝杆菌临床分离株的亚种组成及其耐药谱,为治疗鸟分枝杆菌感染疾病提供科学依据.方法 通过hsp65基因可变3'端测序对50株鸟分枝杆菌临床分离株进行亚种分析,采用微孔板Alamar Blue微量稀释法测定鸟分枝杆菌对15种药物的低抑菌浓度(MIC),以确定其药物敏感性.结果 hsp65基因可变3'端序列分析结果显示,50株鸟分枝杆菌临床分离株均属于hominissuis亚种.药物敏感性试验(简称“药敏试验”)结果显示,克拉霉素(98.0％,49/50)和莫西沙星(86.0％,43/50)在体外对鸟分枝杆菌具有较好的抗菌活性;其次,80.0％(40/50)、70.0％(35/50)和58.0％(29/50)的鸟分枝杆菌分别对阿米卡星、利福平和利奈唑胺敏感;除1株菌株外,其余菌株均对乙胺丁醇耐药;3种注射类抗结核药物的MIC5o和MIG90值的顺序为:阿米卡星≤链霉素＜卷曲霉素;5种氟喹诺酮类药物的MIC5o和MIG0值的顺序为:莫西沙星＜环丙沙星＜左氧氟沙星＜安妥沙星=氧氟沙星.15株对利福平耐药的菌株中仅有1株鸟分枝杆菌在rpoB基因的81 bp核心区发生了非同义突变,10株对阿米卡星耐药的菌株均未发生rrs基因突变.结论 我国鸟分枝杆菌临床分离株主要是hominissuis亚种,克拉霉素和莫西沙星在体外对鸟分枝杆菌具有较好的抗菌活性.
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鸟分枝杆菌二元调控系统PhoP基因的克隆与分析
目的：对鸟分枝杆菌调控因子PhoP的基因序列和氨基酸序列进行生物信息学分析。方法：利用PCR技术扩增鸟分枝杆菌HIV/AIDS临床分离株PhoP基因，与pEASY-T1载体连接后测序，运用生物信息学工具对其序列进行分析。结果：PCR产物显示一条<为720bp的条带，测序结果与GenBank数据库中鸟分枝杆菌104株PhoP基因序列完全一致。该分离株PhoP的基因和氨基酸序列与结核分枝杆菌H37Rv比对，同源性分别为86%和94%。分离株PhoP基因编码的氨基酸数目为239个氨基酸，其中从136到239位氨基酸为DNA结合区。结论：成功克隆出鸟分枝杆菌HIV/AIDS临床分离株的PhoP基因。该分离株PhoP的氨基酸序列与结核分枝杆菌具有高度的同源性。
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播散性鸟分枝杆菌病例分析
1病例摘要患者，女，44岁，以“咳嗽1个月，胸痛2周”为主诉于2012年11月入院。患者1个月来无明显诱因咳嗽，咳少许白黏痰，量约20ml/d，无咳血痰。无畏冷、发热、气促。2周前感胸痛，为阵发性刺痛。外院胸部CT示“左侧肺门占位性病变，考虑肿瘤可能，左上肺阻塞性炎症；左肺门及纵隔淋巴结肿大；双肺散在索条影；双侧胸膜增厚”（图1）。2012年10月27日于外院行支气管镜检查。左上叶口黏膜活检病理报告示：黏膜慢性炎症及肉芽组织，小灶见上皮样肉芽肿。免疫组化：CK阴性，特染：碘酸雪夫染色及六氨银，抗酸染色（+），符合结核诊断标准。予“异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇”抗结核治疗，咳嗽、胸痛加剧，伴胸闷，转诊本院。入院查体：体温36.4℃，呼吸19次/分，血压95/69mmHg，神志清楚，浅表淋巴结未触及肿大。左上肺呼吸音减弱，双肺未闻及干湿性音。心率90次/分，律齐，未闻及病理性杂音。腹平软，肝脾未触及肿大。双下肢无水肿，未见杵状指（趾）。
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RNA恒温扩增实时检测技术快速鉴定鸟分枝杆菌
目的 建立RNA恒温扩增技术快速鉴定鸟分枝杆菌(RIARD-MA)的方法,评估鉴定分枝杆菌临床分离株的应用效果.方法 以鸟分枝杆菌(MA)的16S rRNA的特异序列为检测靶标,设计RNA探针和带有T7启动子的逆转录扩增引物,42℃恒温扩增实时检测,对21种分枝杆菌标准株、4株非分枝杆菌和259株分枝杆菌临床分离株进行鉴别检测；同时以PCR测序结果为参考对照.结果 RIARD-MA可以在2h内完成检测,能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株及4株非分枝杆菌检测中的MA,检测灵敏度达103 CFU/mL;检测分枝杆菌临床分离株中MA的敏感性、特异性均可达100％.结论 RIARD-MA鉴定MA具有较高的敏感性、特异性,检测快速,有望作为一种新的MA临床分离株鉴定方法.
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播散性皮肤鸟分枝杆菌感染
报告1例少见的播散性皮肤鸟分枝杆菌感染患者.患者女,67岁.双侧乳房及左上肢皮肤水疱、囊性肿物及溃疡5个月余.皮肤科检查:双侧乳房及左上肢有结节及溃疡,表面有坏死组织及脓液.皮损组织病理:真皮深部见一巨大无包膜的炎性结节,其内炎性细胞主要为中性粒细胞、浆细胞、组织细胞及淋巴细胞构成,抗酸染色可见大量抗酸杆菌,溃疡面胶冻状内容物培养可见黄色光滑菌落生长,经聚合酶链反应(PCR)检测结果鉴定为鸟分枝杆菌.诊断:播散性皮肤鸟分枝杆菌感染.
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鸟分枝杆菌病
鸟分枝杆菌病是由鸟-胞内分枝杆菌复合体(Mycobacterium avium complex或Mycobacterium avium-intracellulare complex,MAC)感染引起的人兽共患性传染病.MAC感染后可侵害多种组织器官包括肺、骨髓和淋巴结等.
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结核分枝杆菌embB基因突变检测的研究进展
乙胺丁醇(EMB)是具有广谱抗分枝杆菌活性的一线抗结核合成药物,被广泛应用于结核分枝杆菌和鸟分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌等多种非结核分枝杆菌感染的治疗.近年来,结核病疫情呈上升趋势,其耐药问题也日趋严峻,乙胺丁醇(EMB)作为主要的抗结核药物[1],在原发和复发结核病患者中的耐药率有上升趋势[2],据报道在一些国家获得性EMB耐药率已达13.7%[3].
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利用基因芯片法检测鸟分枝杆菌
目的 通过PCR扩增和基因芯片技术检测鸟分枝杆菌,并与现行的细菌培养法进行比较分析,使基因芯片法检测鸟分枝杆菌能尽快应用于临床.方法 对95例痰液标本进行DNA提取、PCR扩增、基因芯片检测,与细菌培养法检测结果进行比对分析.结果 结果显示,以细菌培养法为参考方法,培养法检出鸟分枝杆菌5例,基因芯片检测出4例,基因芯片检测法的灵敏度为80.0％;培养法检出其他菌株及阴性样品89例,基因芯片检出88例,特异性为98.9％;基因芯片法与培养法的总体符合率为97.9％,两种方法的检测符合率无显著性差异(P＞0.05).结论 基因芯片法灵敏度高、特异性强,与细菌培养检测结果符合度高,而且比常规的细菌培养法快捷、简便,非常适合鸟分枝杆菌的临床检验.
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播散性鸟分枝杆菌感染1例
患者女,37岁.咳嗽、咳痰伴发热2年,颈胸部、四肢结节、溃疡1年,曾诊断为肺结核、淋巴结核.皮肤科情况:颈部、前胸、四肢有结节及溃疡,表面有坏死组织及脓液.创口分泌物及痰抗酸染色见大量抗酸杆菌,分泌物结核分枝杆菌rRNA直接检测法(MTD)为鸟胞内分枝杆菌.皮损组织病理示:真皮内可见大量混合性炎症细胞浸润及坏死组织,抗酸染色可见大量抗酸杆菌.诊断:鸟分支杆菌感染.
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鸟分枝杆菌pncB基因的克隆及测序分析
目的:研究鸟分枝杆菌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的代谢.方法:筛选基因文库和亚克隆.结果:得到了鸟分枝杆菌的编码烟酸磷酸核糖转移酶的基因pncB的全序列.结论:用筛选基因文库的方法寻找新基因的方法是可行的.
