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初探提高肺活检标本利用率的方法
近10年来,随着人类上皮生长因子受体(human epithelial growth factor receptor,EGFR)突变和间变性淋巴瘤激酶(anaplastic large cell lymphoma kinase,ALK)基因重排的发现,以及其相应的靶向药物的应用,使得肺癌从传统的外科手术治疗和细胞毒性化学治疗,步入到外科个体化靶向治疗的新阶段,进入了精准医疗时代.2015版WHO(2015)肺、胸膜、胸腺和心脏肿瘤分类[1]融入了更多的遗传学信息等.WHO(2015)肺癌分类中特别就肺癌活检标本(包括CT下经皮肺穿刺活检标本和支气管镜活检标本)的病理检查流程进行了阐述,强调推荐广泛使用免疫组化方法(immunohistochemistry,IHC)用于肺癌的组织学分型.
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基于颜色判定的环介导等温扩增检测人型支原体的研究
目的 建立一种基于颜色判定的快速、灵敏、简便的人型支原体环介导等温扩增(LAMP)方法. 方法 使用PrimerExplorer V5软件设计针对人型支原体MHO_2540基因保守区域的4条特异等温扩增引物,用羟基萘酚蓝(H NB)作为结果判读指示剂并优化体系中dNTPs、MgSO4浓度,建立人型支原体LAMP检测方法,进行灵敏度、特异度等的检测并与普通PCR比较. 结果 LAMP对标准浓度人型支原体核酸的检测限约为102 CFU,与普通PCR相同,但比实时荧光定量PCR差一个数量级.人型支原体阳性临床标本拷贝数>103 CFU者LAMP阳性率100%,与普通PCR检出率(100%)一致,拷贝数101~103 CFU的弱阳性标本LAMP检出率为63.6%(14/22),普通PCR检出率为31.8%(7/22),差异有统计学意义(x2=4.46,P<0.05). 结论 LAMP检测人型支原体敏感、特异且操作简便,可在基层推广应用.
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重大传染病诊断技术
近年来,我国在突发传染病,尤其是严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)和甲型H1N1流感等的防控经验显示,诊断试剂在传染病的预防和控制中发挥着越来越重要的作用.这些诊断试剂从方法学上讲,主要分为两大类,即免疫学诊断和分子诊断.本文对这两类诊断技术进行简要综述.
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葡萄胎的分子诊断研究进展
葡萄胎是常见的危害女性生殖健康的胎盘增生性疾病,其特点是异常受精以及随后的滋养细胞增生。葡萄胎主要分为完全性葡萄胎( complete hydatidiform mole,CHM)和部分性葡萄胎( partial hydatidiform mole, PHM),具有进展为持续性滋养细胞疾病的危险性[1]。其中CHM(13.9%~17.8%)比PHM(1.1%~3.5%)更容易进展为持续性滋养细胞疾病;且异精受精的杂合型CHM进展为持续性滋养细胞疾病的风险比孤雄来源的纯合型CHM高(P=0.029)[2];临床上,CHM与PHM和水肿型流产( hydropic abortions,HA)相比,除了清宫、定期随访外还需要适当的预防性化疗,因此葡萄胎的准确分型十分重要。目前病理学上对于葡萄胎的诊断和分型主要是依据临床症状及组织学形态观察,p57蛋白的免疫组织化学染色。凭借以上手段大多数葡萄胎可以得以准确诊断和分型,但是由于双亲来源的CHM、PHM及HA都表达p57蛋白,依然有少部分病例诊断和分型比较困难。近年来一些分子检测手段,如短串联重复序列( short tendom repeat, STR)多态性分析、妊娠相关microRNA检测、Lewis X检测等对葡萄胎的诊断和准确分型提供更可靠的依据。我们就葡萄胎的分子诊断及预后等方面的国内外研究进展作一综述。
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前列腺癌的分子诊断及监测标记物研究进展
血清前列腺特异性抗原(PSA)检测应用于前列腺癌的临床诊断和治疗监测已经15年了[1],其应用一方面使很多患者能够得以早期诊断,因此发生远处转移的患者数量有所减少;另一方面由于肿瘤的早期发现,现在检测到的前列腺肿瘤体积普遍比以前缩小,男性前列腺癌患者的PSA水平也稳定下降.
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采用高通量基因芯片筛选乳腺癌分子诊断基因群的研究
早期诊断是提高乳腺癌治愈率和生存率的关键.肿瘤细胞的发生发展过程中涉及复杂的生物学过程.基因芯片技术可以在基因组范围内对组织细胞的基因表达谱进行研究,为肿瘤发生发展中多基因改变的分子机制研究提供了有力的工具[1].我们采用高通量基因表达谱芯片通过比较乳腺原发癌与其配对的癌旁正常乳腺组织基因表达差异筛选乳腺癌相关基因,并探讨其作为乳腺癌分子诊断基因标志群的临床意义.
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黑色素瘤的分子病理诊断和个体化治疗进展
根据美国国立癌症中心的统计数据,在2014年的新发恶性肿瘤中,黑色素瘤约占4.6%,美国目前有黑色素瘤患者约92万名,每年死亡人数超过9000名[1]。近几十年间,黑色素瘤的患病率和死亡率均有明显的增加。由于黑色素瘤的组织学形态多种多样,遇到疑难病例,即使是有经验的病理医师也难以仅凭组织学形态做出明确诊断。随着分子病理的飞速发展,分子诊断在黑色素细胞病变的诊断和治疗过程中扮演着越来越重要的角色,除了协助诊断,还能明确基因突变的位点,了解黑色素瘤的特异性遗传学改变,为黑色素瘤患者的个体化治疗提供有价值的信息[2-3]。我们总结了黑色素瘤中的特征性基因突变、分子检测方法及新的个体化治疗进展,同时重点阐述了BRAF和KIT基因突变及荧光原位杂交( FISH)检测在黑色素瘤诊治中的作用。
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加强基因型分析发展个体化医学
疾病的诊断,从表型(phenotype)分析发展到表型和基因型( genotype)结合分析代表着医学的革命性进步。临床分子病理学,或称分子诊断,已成为当今迅猛兴起的病理亚学科之一。它从核酸水平(DNA和RNA)研究疾病发生和发展规律,揭示疾病时外源性基因在体内的存在和内源性基因的突变及表达异常,是传统形态病理学的有益补充和发展。
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关于评选“吴秉铨优秀青年学者(参会奖)”的通知
吴秉铨病理学发展基金会近年来支持中华医学会病理学分会评选的“吴秉铨优秀青年学者(参会奖)”2015年在评选、推荐奖项上,评选标准不变,奖励人数和内容上有所变动,奖励人数拟设置为4名,奖励内容为参加一次国际会议的邀请函。获奖者持此邀请函可参加国际妇产科病理学大会暨第12届海内外病理学术论坛(2016年10月28—30日),会议在由国际妇科病理学会、国际病理学会中国分会、北京大学医学部主办,于北京国家会议中心举行。会议的主题是当代妇产科病理学和女性健康,邀请了国际顶级妇科病理专家与国内专家学者进行面对面的充分交流,内容涉及子宫、输卵管、卵巢、生殖道、胎盘以及乳腺疾病的病理学和细胞学诊断、疾病的基因型分析和分子诊断。会议将展示和交流2014版WHO女性生殖器官肿瘤分类的特点和应用经验。
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2016年福建省输入性黄热病的分子诊断
目的 应用分子检测方法,对输入性黄热病病例进行实验诊断.方法 采集病例血清和尿液标本,应用实时荧光定量逆转录PCR(Real-time RT-PCR)法检测黄热病毒特异性核酸;套式RT-PCR法扩增病毒基因片段,序列测定或片段长度多态性法鉴别野毒株或疫苗株.结果 Real-time RT-PCR法检测5例黄热病毒核酸阳性病例,病毒在尿液标本中存在时间较血清中存在时间更长,序列测定及限制性片段长度多态性法证实Angola71型病毒感染.结论 同时采用血液和尿液检测可以提高黄热病检测敏感性,RFLP分析方法可快速鉴别野病毒感染,排除因疫苗接种后可能出现的阳性结果.
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微流控环介导等温扩增集成诊断技术新研究进展
随着微型铸造技术的不断发展,近两年来微流控(Microfluidics)集成诊断技术逐步成熟并逐渐应用到医学生命科学领域.微流控是将样品分析从前处理到反应再到结果检测等一系列连续操作过程整合到一个微型芯片上,从而实现全分析过程自动化的一项技术[1].环介导等温扩增( Loop - Mediated Isothermal Amplifica-tion,LAMP)技术是 Notomi 等[2]于 2000 年报道的一种新型等温核酸扩增方法.
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核苷酸衍生物相关技术在分子诊断中的应用与展望
近年来,一些人工合成的核苷酸衍生物,包括肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)、锁核酸(locked nucleic acid,LNA)、己糖醇核酸(hexitol nucleic acid,HNA)等开始在分子诊断领域中得以应用[1].与普通的核苷酸(DNA、RNA)一样,这些衍生物由A、T、C、G四种碱基组成,可通过碱基配对原则与互补的核酸序列结合.这些人工合成的核苷酸衍生物有诸多自身优势,如较高的热稳定性、酶抵抗性等.籍此,其可以明显改善普通分子生物学技术的性能特点,包括灵敏度、特异性、重复性等.譬如,利用3’端LNA修饰的引物可显著提高单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)检测的特异性,利用PNA夹止技术的抑制作用,可选择性扩增高野生背景中的少量突变[2,3].
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BRAF V600E基因突变与甲状腺癌病理生物学特点及其靶向治疗的研究进展
BRAF基因突变在甲状腺癌发病机制中具有重要意义,由此促进了甲状腺癌分子发病机制领域的研究进展.BRAF基因突变将导致MAPK通路的持续活化,引发细胞异常增殖,进而导致肿瘤的发生发展.BRAF基因常见的突变为第1799位碱基由胸腺嘧啶错义突变为腺嘌呤(T1799A),导致其翻译的缬氨酸变为谷氨酸,即BRAF V600E基因突变.BRAF V600E基因突变与甲状旁腺浸润、淋巴结转移和复发具有明显的相关性.并且,BRAF V600E基因突变对于指导甲状腺癌的初始治疗方式、控制放射碘治疗的剂量和预后的判断也具有重要的意义.目前,针对该突变的靶向药物也正处于试验阶段.本文将对甲状腺癌领域的BRAF基因突变的新研究进展综述.
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两种产毒型艰难梭菌分子诊断方法的临床应用评价
目的 通过与Xpert C.difficile/Epi检测临床粪便样本中艰难梭菌毒素基因方法的对比,系统评价实验室研发的艰难梭菌毒素基因多重荧光PCR检测方法的性能.方法 2016年8月1日至12月30日采集杭州市余杭区第一人民医院和宁波市鄞州人民医院临床腹泻患者粪便样本176份,平行采用Xpert C.difficile/Epi和实验室研发的检测方法进行检测,同时进行艰难梭菌分离培养和PCR毒素鉴定.采用SPSS 20.0软件对检测结果进行交叉表分析.结果 以Xpert C.difficile/Epi检测结果为标准,本实验室研发方法的敏感度为91.7%(22/24)、特异度为100%(152/152)、阳性预测值为100%(22/22)、阴性预测值为98.7%(152/154),两种方法检测结果的一致性好(Kappa=0.950,P<0.001).以厌氧分离培养和PCR毒素检测结果为标准,本实验室研发方法的敏感度为90.0%(18/20)、特异度为97.0%(152/156)、阳性预测值为81.8%(18/22)、阴性预测值为98.7%(152/154)(Kappa=0.838,P<0.001);Xpert C.difficile/Epi的敏感度为90.0%(18/20)、特异度为96.0%(150/156)、阳性预测值为75.0%(18/24)、阴性预测值为98.7%(150/152)(Kappa=0.792,P<0.001).结论 实验室研发的艰难梭菌毒素基因多重荧光PCR检测方法与Xpert C.difficile/Epi检测性能基本一致,可直接用于临床腹泻标本中产毒型艰难梭菌检测.该方法的临床应用为国内临床艰难梭菌感染病例的诊断提供一种国产化的检测方法.
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X-连锁肾上腺脑白质营养不良的分子诊断方法研究
X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-linked adrenoleukodystrophy,X-ALD)是过氧化物酶体病的一种,由ABCD1基因突变所致,该疾病基因定位于Xq28,其成熟mRNA长约3 700bp,编码1个含745个氨基酸残基的蛋白质,称为ABCD1蛋白.自ALD的致病基因被定位克隆以来[1],至今国际上已报告了900余种ABCD1基因突变(www.X-ald.nl),其中错义突变占60%[2].笔者于2006年7月至11月分别对6个X-ALD家系进行基因突变分析,现报告如下.
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临床实验室分子诊断的标准化
临床实验室分子诊断涉及病原体核酸、人类基因和各种蛋白等大分子的测定,在许多临床疾病的诊断方面,有极为关键的作用.工作程序、试剂方法的标准化以及标准物质的应用,是保证实验室检验结果准确性的前提.在日常检验工作中应用标准物质,将极大地改善不同实验室间检验结果的可比性,从而逐步实现不同实验室间检验结果有条件的互认.
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DNA甲基化及其在肿瘤分子诊断中的前景
DNA甲基化是研究为深入的表观遗传学机制.该机制的异化可导致基因表达的异常及基因组稳定性的降低,继而促进肿瘤发生和发展.启动子CpG岛的高甲基化已被认为是与遗传性缺陷同等重要的、造成抑癌基因在肿瘤中失活的分子生物学机制.
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β-地中海贫血分子诊断进展
β-地中海贫血(β-地贫)是世界上常见、对人类健康危害严重的单基因遗传病之一.本文从临床实验室的角度,对β-地贫分子诊断技术的新进展进行了综述,涉及反向斑点杂交、微测序、实时PCR以及无创产前诊断等技术的原理、特点和发展趋势等.
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离子特异性DNA酶在人体重金属含量检测中的应用
20世纪90年代以来,研究人员逐渐发现了多种具有特定生物催化功能的DNA分子,即DNA酶.离子特异性DNA酶是上述DNA中特殊的一类.该酶是具有离子结合特异性的DNA分子片段[1-5],这些片段和某种特定离子结合后可以被活化成为一种核酸内切酶,能够将与之序列互补的核酸链切断[6-9],因此被称为离子特异性DNA酶.目前在分子诊断中一般通过多种方法筛选得到目的离子特异性DNA酶,随后构建相应的离子特异性DNA酶生物传感器(探针)用于离子浓度的检测.
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2015循环生物标志物检测与临床应用研讨会报名
为了更好地推动循环生物标志物在我国检验医学及相关临床学科的研究与应用,由广东省医学会检验分会主办的“2015循环生物标志物检测与临床应用研讨会”将于2015年11月27至29日在广东省广州市召开。此次研讨会的目的是为我国从事循环生物标志物分子诊断与临床应用的学者搭建与国内外著名专家交流的学术平台,会议将邀请国内外知名专家教授就循环肿瘤细胞、细胞外囊泡、循环核酸等循环生物标志物检测技术及其在人类重大疾病分子诊断、个体化用药等精准医疗领域展开学术报告与交流,共同探讨循环生物标志物检测与临床应用、科研的现状及展望。欢迎全国检验、临床和相关领域的专家、学者参会,并授予国家级继续教育Ⅰ类学分6分[项目编号:2015-11-00-180(国)]。